期刊文献+
共找到13篇文章
< 1 >
每页显示 20 50 100
免疫捕获PCR法快速检测金黄色葡萄球菌 被引量:2
1
作者 夏俊芳 刘箐 +7 位作者 韩舜愈 刘芳 王婧 刘雅莉 汪小波 樊学军 田绿波 黄超杰 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期181-187,共7页
旨在建立一种快速检测金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,SA)免疫捕获PCR技术,并探讨其灵敏度和特异性。SA特异性抗体包被PCR管以富集待测样品中目标菌,之后在同一PCR管里直接进行免疫捕获PCR,并和直接PCR比较。免疫捕获PCR法可特... 旨在建立一种快速检测金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,SA)免疫捕获PCR技术,并探讨其灵敏度和特异性。SA特异性抗体包被PCR管以富集待测样品中目标菌,之后在同一PCR管里直接进行免疫捕获PCR,并和直接PCR比较。免疫捕获PCR法可特异性检测2株SA菌株,而无法检测到其它8种常见食源性致病菌,说明该方法对SA具有良好的特异性;该方法对纯菌液而言,检测灵敏度可达到2.35×102CFU/mL,是直接PCR的100倍;对5种食品模拟带菌检测发现,无需增菌培养,其灵敏度可达到2.35×103-2.35×104CFU/mL,是直接PCR的10-100倍。免疫捕获PCR法集免疫学与分子生物学检测技术于一体,具有高特异性、高灵敏度、检测快速、易于操作、成本低廉等诸多优点,是一种适合基层实验室使用的检测技术。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 免疫捕获pcr 直接pcr
下载PDF
免疫捕获PCR法快速检测大肠埃希氏O157∶H7的研究 被引量:1
2
作者 牛建军 黄建炜 +1 位作者 李莉 彭宣宪 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2004年第10期897-900,896,共5页
目的建立两种免疫捕获PCR法快速检测E.coliO157∶H7,并探讨其灵敏度和特异性。方法运用免疫磁珠集菌(IMS)和抗体包被扩增管(mACT)两种方法富集待测样品中E.coliO157∶H7,再应用巢式PCR法检测编码E.coliO157∶H7O抗原的rfbE基因,对13株E.... 目的建立两种免疫捕获PCR法快速检测E.coliO157∶H7,并探讨其灵敏度和特异性。方法运用免疫磁珠集菌(IMS)和抗体包被扩增管(mACT)两种方法富集待测样品中E.coliO157∶H7,再应用巢式PCR法检测编码E.coliO157∶H7O抗原的rfbE基因,对13株E.coliO157菌和10株非E.coliO157菌进行检测。结果应用两种icPCR检测,所有E.coliO157∶H7和E.coliO157NM菌株均为阳性结果,而其它包括与O157抗血清能交叉凝集的菌株检测结果均为阴性;对于含有48×102cfu/ml以上浓度的E.coliO157∶H7菌悬液,两种方法,所有试验管都能检测到特异性扩增;并证实了这两种方法可用于检测鲜牛奶中E.coliO157∶H7,样品中E.coliO157∶H7的含量只要不少于101cfu/ml,经过6小时增菌均能检测出来。结论IMS-icPCR和mACT-icPCR用于检测E.coliO157∶H7,是快速、灵敏且高特异的方法。 展开更多
关键词 快速微生物检测 免疫捕获pcr 病原菌
下载PDF
免疫捕获PCR检测进境苹果果实中梨火疫病菌 被引量:5
3
作者 何丹丹 周国梁 +3 位作者 陈仲兵 印丽萍 徐殿胜 易建平 《植物检疫》 北大核心 2010年第1期13-17,共5页
利用梨火疫病菌抗体和PCR技术建立了梨火疫病菌免疫捕获PCR方法,检测苹果模拟样品的灵敏度达到了1.5×102cfu/reaction。与直接PCR进行比较,免疫捕获PCR方法检测苹果模拟样品的灵敏度提高了10倍以上,而且省去了DNA提取等步骤。利用... 利用梨火疫病菌抗体和PCR技术建立了梨火疫病菌免疫捕获PCR方法,检测苹果模拟样品的灵敏度达到了1.5×102cfu/reaction。与直接PCR进行比较,免疫捕获PCR方法检测苹果模拟样品的灵敏度提高了10倍以上,而且省去了DNA提取等步骤。利用该方法成功从进境苹果样品中检测到梨火疫病菌,产物测序结果表明,产物序列和梨火疫病菌的相应序列高度一致。试验结果表明,免疫捕获PCR法能除去样品中的大部分PCR反应抑制物质,可以有效检测进境苹果中梨火疫病菌,在口岸水果检疫中具有一定的应用潜力和推广价值。 展开更多
关键词 梨火疫病菌 免疫捕获pcr 苹果
下载PDF
香蕉线条病毒多重免疫捕获PCR方法的建立及应用
4
作者 卢咏思 刘润沛 饶雪琴 《华中农业大学学报》 2025年第1期168-173,共6页
为提高复合感染香蕉的香蕉线条病毒(banana streak virus,BSV)的诊断效率,保障香蕉产业的健康发展,设计基于香蕉线条病毒OL(banana streak OL virus,BSOLV)、香蕉线条病毒GF(banana streak GF virus,BSGFV)的外壳蛋白(coat protein,CP)... 为提高复合感染香蕉的香蕉线条病毒(banana streak virus,BSV)的诊断效率,保障香蕉产业的健康发展,设计基于香蕉线条病毒OL(banana streak OL virus,BSOLV)、香蕉线条病毒GF(banana streak GF virus,BSGFV)的外壳蛋白(coat protein,CP)基因和香蕉线条病毒IM(banana streak IM virus,BSIMV)的RNase H基因保守序列的特异引物,利用BSV多克隆抗血清捕获病毒为模板,通过对引物浓度、退火温度等条件的优化,建立能够同步检测BSOLV、BSGFV、BSIMV的多重免疫捕获PCR方法。研究结果显示,建成的最优体系为BSOLV、BSGFV、BSIMV上下游引物终浓度(μmol/L)比例0.5∶0.5∶0.5,退火温度为63℃。利用该多重免疫捕获PCR方法可以从1 mg/mL的香蕉粗提液中分别检测出BSOLV、BSGFV和BSIMV。所建立的多重免疫捕获PCR方法与引起相似症状的黄瓜花叶病毒(cucumber mosaic virus,CMV)无交叉反应。对15份田间香蕉样品进行检测,能够明显区分出复合侵染的样品,经测序验证,BSOLV、BSGFV和BSIMV的扩增产物与GenBank相应病毒同源率分别在94%以上。表明该多重免疫捕获PCR方法具有较高的敏感性和特异性,可应用于香蕉种苗以及田间香蕉样品中3种BSV的检测。 展开更多
关键词 香蕉 香蕉线条病毒 多重免疫捕获pcr 复合感染
下载PDF
副溶血性弧菌VBNC的诱导及其免疫捕获PCR检测 被引量:11
5
作者 郭川 林奕华 +2 位作者 庄旭冬 孙作俤 胡忠 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2010年第7期502-504,509,F0004,共5页
目的研究一种适用于副溶血性弧菌活的非可培养状态(VBNC)的检测方法。方法将副溶血性弧菌VPL4-90悬浮于陈海水中,利用低温条件诱导VBNC状态,42d后取样,进行AOAC法观察、DVC法观察、PC计数及国标法检测等;以诱导后菌体为抗原,制备兔抗VBN... 目的研究一种适用于副溶血性弧菌活的非可培养状态(VBNC)的检测方法。方法将副溶血性弧菌VPL4-90悬浮于陈海水中,利用低温条件诱导VBNC状态,42d后取样,进行AOAC法观察、DVC法观察、PC计数及国标法检测等;以诱导后菌体为抗原,制备兔抗VBNC血清,用于免疫捕获PCR检测。结果进入VBNC状态的细菌缩小成球形,大部分仍然是活菌,但不能形成菌落;国标检测方法未能使进入VBNC状态的细菌得到分离培养;利用抗血清捕获VBNC菌体后对副溶血性弧菌的tlh基因进行PCR扩增,检测到副溶血性弧菌VBNC。结论制备的抗血清对VBNC菌体具有富集作用;建立的免疫捕获PCR法可应用于对副溶血性弧菌VBNC的检测。 展开更多
关键词 副溶血性弧菌 非可培养状态 免疫捕获pcr
原文传递
副溶血性弧菌的免疫捕获PCR检测 被引量:3
6
作者 郭川 林洁敏 +3 位作者 伦镜盛 胡忠 林耀盛 方小衡 《中国卫生检验杂志》 CAS 2010年第6期1403-1405,共3页
目的:将免疫捕获PCR法应用于副溶血性弧菌检测。方法:将脱毒后的副溶血性弧菌作为抗原免疫家兔,得到抗血清包被PCR管,对待检的副溶血弧菌进行免疫捕获,利用捕获到的菌体作为模板进行PCR检测。结果:PCR体系对副溶血性弧菌的tlh基因扩增... 目的:将免疫捕获PCR法应用于副溶血性弧菌检测。方法:将脱毒后的副溶血性弧菌作为抗原免疫家兔,得到抗血清包被PCR管,对待检的副溶血弧菌进行免疫捕获,利用捕获到的菌体作为模板进行PCR检测。结果:PCR体系对副溶血性弧菌的tlh基因扩增具有特异性;抗体对副溶血弧菌起到一定程度的富集作用,包被抗血清后使PCR扩增出来的阳性结果更为明显,而抗血清本身没有扩增出DNA条带。结论:该检测方法能够对副溶血性弧菌进行特异性的检测,同时包被抗体的捕获对提高检测灵敏度起到一定的作用。 展开更多
关键词 副溶血性弧菌 免疫捕获pcr 抗血清
原文传递
应用IC-RT-PCR方法检测齿兰环斑病毒和建兰花叶病毒 被引量:3
7
作者 李志勇 郭京泽 +2 位作者 司贺龙 李兴红 董金皋 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期40-42,共3页
根据已报道的建兰花叶病毒和齿兰环斑病毒外壳蛋白基因序列设计PCR引物,建立了蝴蝶兰建兰花叶病毒和齿兰环斑病毒IC-RT-PCR检测方法。用该方法对天津地区8个蝴蝶兰标样检测,结果显示:8个标样中有4个检测到建兰花叶病毒,另外4个检测到齿... 根据已报道的建兰花叶病毒和齿兰环斑病毒外壳蛋白基因序列设计PCR引物,建立了蝴蝶兰建兰花叶病毒和齿兰环斑病毒IC-RT-PCR检测方法。用该方法对天津地区8个蝴蝶兰标样检测,结果显示:8个标样中有4个检测到建兰花叶病毒,另外4个检测到齿兰环斑病毒。该方法简化了操作程序,为蝴蝶兰种苗病毒的快速检测奠定了基础。 展开更多
关键词 蝴蝶兰 齿兰环斑病毒 建兰花叶病毒 外壳蛋白基因 免疫捕获pcr 序列分析
下载PDF
应用IC-RT-PCR方法检测水仙中百合斑驳病毒 被引量:6
8
作者 贾丽霞 李志勇 马继芳 《北方园艺》 CAS 北大核心 2011年第14期123-125,共3页
水仙病毒严重影响水仙的品质与规模化生产,而快速检测水仙病毒可以有效防控其危害与扩散。根据已报道的百合斑驳病毒外壳蛋白基因序列设计PCR引物,利用免疫捕获PCR检测了水仙样品中百合斑驳病毒。PCR扩增产物回收后克隆到PMD19-T载体... 水仙病毒严重影响水仙的品质与规模化生产,而快速检测水仙病毒可以有效防控其危害与扩散。根据已报道的百合斑驳病毒外壳蛋白基因序列设计PCR引物,利用免疫捕获PCR检测了水仙样品中百合斑驳病毒。PCR扩增产物回收后克隆到PMD19-T载体中测序。把克隆得到的百合斑驳病毒外壳蛋白基因部分序列提交到Genbank中。结果表明:基因登录号为JF714974,克隆的百合斑驳病毒外壳蛋白基因部分序列与国内外百合斑驳病毒同源性为90.4%~99.5%。建立了水仙中百合斑驳病毒的IC-RT-PCR的检测方法,简化了试验步骤,适合于水仙中百合斑驳病毒的快速检测。 展开更多
关键词 水仙病毒病 免疫捕获pcr 百合斑驳病毒 序列分析
下载PDF
南瓜种子中黄瓜绿斑驳花叶病毒IC-RT-PCR检测方法的建立 被引量:4
9
作者 黄静 廖富荣 +1 位作者 林石明 陈青 《漳州职业技术学院学报》 2009年第1期12-15,共4页
黄瓜绿斑驳花叶病毒(Cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)是葫芦科重要种传病毒之一。本文建立了免疫捕获RT—PCR(IC—RT—PCR)的分子检测方法直接从带毒种子中检测出该病毒,扩增获得其CP基因,并克隆到pMD18-T载体中,经... 黄瓜绿斑驳花叶病毒(Cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)是葫芦科重要种传病毒之一。本文建立了免疫捕获RT—PCR(IC—RT—PCR)的分子检测方法直接从带毒种子中检测出该病毒,扩增获得其CP基因,并克隆到pMD18-T载体中,经核苷酸序列分析表明,该分离物CP基因全长为486个核苷酸,编码由161个氨基酸组成的17.3kDa蛋白,与国内外已报道的CGMMV的CP基因相比,其核苷酸序列的同源性为91.4%~99.4%,其推导的氨基酸同源性为98.8%~100%。IC-RT—PCR方法的建立,为检疫部门提供了从带毒种子中快速、准确检测该病毒的方法,很有应用前景。 展开更多
关键词 南瓜种子 黄瓜绿斑驳花叶病毒 免疫捕获RT—pcr CP基因 序列分析
下载PDF
豇豆花叶病毒和黑眼豇豆花叶病毒RT-Realtime PCR及IC-RT-Realtime PCR检测方法研究 被引量:3
10
作者 李彬 粟寒 +3 位作者 李艳华 缪爱斌 吴翠萍 安榆林 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期105-109,共5页
建立了豇豆两种种传病毒豇豆花叶病毒(CPMV)和黑眼豇豆花叶病毒(BlCMV)RT-Realtime PCR检测方法以及双重RT-Realtime PCR检测方法。在此基础上,根据免疫学抗原抗体特异性吸附的特点,建立了CPMV和BlCMV免疫捕获反转录荧光定量(IC-RT-Real... 建立了豇豆两种种传病毒豇豆花叶病毒(CPMV)和黑眼豇豆花叶病毒(BlCMV)RT-Realtime PCR检测方法以及双重RT-Realtime PCR检测方法。在此基础上,根据免疫学抗原抗体特异性吸附的特点,建立了CPMV和BlCMV免疫捕获反转录荧光定量(IC-RT-Realtime)PCR检测方法以及双重IC-RT-Realtime PCR检测方法。该单重及双重IC-RT-Real-time PCR检测方法具有灵敏度高、特异性强和稳定性好等优点,适用于豆类种苗中对CPMV和BlCMV的检测。 展开更多
关键词 豇豆花叶病毒 黑眼豇豆花叶病毒 免疫捕获反转录实时荧光pcr 双重反转录实时荧光pcr
下载PDF
香石竹环斑病毒多种PCR检测方法的建立与评价
11
作者 崔学慧 陈舜胜 +2 位作者 于子翔 于翠 杨翠云 《上海交通大学学报(农业科学版)》 2012年第5期58-63,共6页
以香石竹环斑病毒(Carnation ringspot virus,CRSV)的5个分离物为研究对象,分别建立了快速检测香石竹环斑病毒的多种PCR方法。结果表明,这些方法的灵敏度都比DAS-ELISA的灵敏度高,其中SYBR Green RT-PCR的灵敏度最高,可检测CRSV RNA的... 以香石竹环斑病毒(Carnation ringspot virus,CRSV)的5个分离物为研究对象,分别建立了快速检测香石竹环斑病毒的多种PCR方法。结果表明,这些方法的灵敏度都比DAS-ELISA的灵敏度高,其中SYBR Green RT-PCR的灵敏度最高,可检测CRSV RNA的最低量是6.4pg。免疫磁珠RT-PCR(IMS-RT-PCR)和普通RT-PCR最低可从400ng的带毒叶片中检出CRSV,而免疫捕获RT-PCR(IC-RT-PCR)最低灵敏度可从40ng的带毒叶片中检出CRSV,是普通RT-PCR的10倍。 展开更多
关键词 香石竹环斑病毒 RT—pcr 免疫捕获RT—pcr免疫磁珠RT—pcr SYBR Green RT—pcr
下载PDF
高粱红条病病原的分子鉴定 被引量:5
12
作者 蒋军喜 周雪平 石银鹿 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期255-259,共5页
从山西高粱红条病病叶中得到一种病毒分离物 ,命名为 GL- SX。根据甘蔗花叶病毒亚组(SCMV subgroup)外壳蛋白 (CP)基因 C-端和复制酶 (NIb)基因 C-端的保守序列设计引物 ,对 GL - SX进行免疫捕获反转录 PCR (IC- RT- PCR)扩增 ,获得一... 从山西高粱红条病病叶中得到一种病毒分离物 ,命名为 GL- SX。根据甘蔗花叶病毒亚组(SCMV subgroup)外壳蛋白 (CP)基因 C-端和复制酶 (NIb)基因 C-端的保守序列设计引物 ,对 GL - SX进行免疫捕获反转录 PCR (IC- RT- PCR)扩增 ,获得一条长约 1.1kb的扩增片段 ,扩增片段克隆后测定序列 ,该序列含 10 87个核苷酸 (nt) ,编码 36 2氨基酸 (aa) ,取其中的近全长 CP氨基酸序列 (2 96 aa)与甘蔗花叶病毒 (Sugarcane mosaic virus,SCMV)、玉米矮花叶病毒 (Maize dwarf mosaic virus,MDMV)、高粱花叶病毒 (Sorghum mosaic virus,Sr MV)和约翰逊草花叶病毒 (Johnsongrass mosaicvirus,JGMV)等 4种病毒的对应序列进行同源性比较 ,结果与 SCMV的同源性最高 (95 .3% ) ,而与Sr MV、MDMV和 JGMV等 3种病毒的同源性相对较低 ,依次为 6 9.3%、6 9.1%和 5 5 .4 %。根据Potyvirus属病毒种类划分的标准 ,将 GL - SX鉴定为 SCMV。将 GL- SX的近全长 CP氨基酸序列与SCMV种内各分离物的对应序列进行同源性比较及构建关系树 ,结果显示 GL- SX与 SCMV- MDB具有较远缘的种内亲缘关系 ,而与德国的一个 SCMV玉米分离物 (SCVM- Hoe)及中国的两个玉米分离物(SCMV- ZJ和 SCMV- BJ) 展开更多
关键词 高梁红条病 病原 分子鉴定 免疫捕获反转录pcr 甘蔗花叶病毒
下载PDF
甜瓜黄斑病毒外壳蛋白的原核表达、多克隆抗体制备及其应用 被引量:2
13
作者 曾蓉 徐丽慧 +1 位作者 高士刚 戴富明 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期647-653,共7页
本研究将甜瓜黄斑病毒(Melon yellow spot virus,MYSV)外壳蛋白基因克隆到原核表达载体pET32a(+)中,利用大肠杆菌系统表达该蛋白,免疫家兔制备其多克隆抗体。本文通过多克隆抗体,建立了间接ELISA(ID-ELISA)、免疫捕获PCR(IC-RT-PCR)、We... 本研究将甜瓜黄斑病毒(Melon yellow spot virus,MYSV)外壳蛋白基因克隆到原核表达载体pET32a(+)中,利用大肠杆菌系统表达该蛋白,免疫家兔制备其多克隆抗体。本文通过多克隆抗体,建立了间接ELISA(ID-ELISA)、免疫捕获PCR(IC-RT-PCR)、Western blot及dot-ELISA的MYSV检测方法,以上各种方法均能特异的检测MYSV。检测结果表明:ID-ELISA方法检测效价大于1∶6 400;Western blot检测灵敏度达到1∶320(W/V,g·mL-1);Dot-ELISA检测灵敏度达到1∶80(W/V,g·mL-1),且用牙签等非实验室工具便能检测该病毒,能高效地应用于田间样品的检测。 展开更多
关键词 MYSV 抗血清 免疫捕获pcr WESTERN BLOT 斑点ELISA
原文传递
上一页 1 下一页 到第
使用帮助 返回顶部