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免疫磁捕获-实时荧光PCR快速检测鸡肉中沙门氏菌 被引量:19
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作者 张东方 袁飞 +3 位作者 王娉 胡玥 陈颖 葛毅强 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期142-147,共6页
对免疫磁捕获-实时荧光PCR检测鸡肉中沙门氏菌进行了初步研究。主要包括免疫磁珠制备条件的选择及优化,通过实验最终确定了以6 mg/mL EDC和5 mg/mL NHS活化直径为700 nm的羧基聚苯乙烯磁性微球,与浓度为100μg/mL的沙门氏菌抗体在37℃... 对免疫磁捕获-实时荧光PCR检测鸡肉中沙门氏菌进行了初步研究。主要包括免疫磁珠制备条件的选择及优化,通过实验最终确定了以6 mg/mL EDC和5 mg/mL NHS活化直径为700 nm的羧基聚苯乙烯磁性微球,与浓度为100μg/mL的沙门氏菌抗体在37℃振荡孵育1.5 h,制备得到抗沙门氏菌免疫磁珠,与市售沙门氏菌免疫磁珠试剂盒(Dynal产品)捕获效率相当。免疫磁捕获-实时荧光PCR检测方法检测限为104 CFU/mL左右,能在16 h内检测出鸡肉中104 CFU/mL的沙门氏菌,可用于食品中沙门氏菌的快速检测。 展开更多
关键词 沙门氏菌 免疫捕获 实时荧光pcr 检测
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免疫捕获PCR法快速检测金黄色葡萄球菌 被引量:2
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作者 夏俊芳 刘箐 +7 位作者 韩舜愈 刘芳 王婧 刘雅莉 汪小波 樊学军 田绿波 黄超杰 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期181-187,共7页
旨在建立一种快速检测金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,SA)免疫捕获PCR技术,并探讨其灵敏度和特异性。SA特异性抗体包被PCR管以富集待测样品中目标菌,之后在同一PCR管里直接进行免疫捕获PCR,并和直接PCR比较。免疫捕获PCR法可特... 旨在建立一种快速检测金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,SA)免疫捕获PCR技术,并探讨其灵敏度和特异性。SA特异性抗体包被PCR管以富集待测样品中目标菌,之后在同一PCR管里直接进行免疫捕获PCR,并和直接PCR比较。免疫捕获PCR法可特异性检测2株SA菌株,而无法检测到其它8种常见食源性致病菌,说明该方法对SA具有良好的特异性;该方法对纯菌液而言,检测灵敏度可达到2.35×102CFU/mL,是直接PCR的100倍;对5种食品模拟带菌检测发现,无需增菌培养,其灵敏度可达到2.35×103-2.35×104CFU/mL,是直接PCR的10-100倍。免疫捕获PCR法集免疫学与分子生物学检测技术于一体,具有高特异性、高灵敏度、检测快速、易于操作、成本低廉等诸多优点,是一种适合基层实验室使用的检测技术。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 免疫捕获pcr 直接pcr
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免疫捕获PCR法快速检测大肠埃希氏O157∶H7的研究 被引量:1
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作者 牛建军 黄建炜 +1 位作者 李莉 彭宣宪 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2004年第10期897-900,896,共5页
目的建立两种免疫捕获PCR法快速检测E.coliO157∶H7,并探讨其灵敏度和特异性。方法运用免疫磁珠集菌(IMS)和抗体包被扩增管(mACT)两种方法富集待测样品中E.coliO157∶H7,再应用巢式PCR法检测编码E.coliO157∶H7O抗原的rfbE基因,对13株E.... 目的建立两种免疫捕获PCR法快速检测E.coliO157∶H7,并探讨其灵敏度和特异性。方法运用免疫磁珠集菌(IMS)和抗体包被扩增管(mACT)两种方法富集待测样品中E.coliO157∶H7,再应用巢式PCR法检测编码E.coliO157∶H7O抗原的rfbE基因,对13株E.coliO157菌和10株非E.coliO157菌进行检测。结果应用两种icPCR检测,所有E.coliO157∶H7和E.coliO157NM菌株均为阳性结果,而其它包括与O157抗血清能交叉凝集的菌株检测结果均为阴性;对于含有48×102cfu/ml以上浓度的E.coliO157∶H7菌悬液,两种方法,所有试验管都能检测到特异性扩增;并证实了这两种方法可用于检测鲜牛奶中E.coliO157∶H7,样品中E.coliO157∶H7的含量只要不少于101cfu/ml,经过6小时增菌均能检测出来。结论IMS-icPCR和mACT-icPCR用于检测E.coliO157∶H7,是快速、灵敏且高特异的方法。 展开更多
关键词 快速微生物检测 免疫捕获pcr 病原菌
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免疫组织化学和RT-PCR法检测乳腺癌骨髓和前哨淋巴结微小转移的临床研究 被引量:1
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作者 赵佳 刘晓安 +1 位作者 王水 刘力嘉 《现代肿瘤医学》 CAS 2006年第7期813-816,共4页
目的探讨免疫组织化学(IHC)和RT-PCR法检测乳腺癌骨髓和前哨淋巴结(SLN)微小转移的灵敏度及临床意义。方法留取乳腺癌改良根治术腋窝淋巴结HE染色证实阴性的病人的胸骨骨髓血和SLN,分别采用IHC和RT-PCR方法检测其微小转移情况。结果62例... 目的探讨免疫组织化学(IHC)和RT-PCR法检测乳腺癌骨髓和前哨淋巴结(SLN)微小转移的灵敏度及临床意义。方法留取乳腺癌改良根治术腋窝淋巴结HE染色证实阴性的病人的胸骨骨髓血和SLN,分别采用IHC和RT-PCR方法检测其微小转移情况。结果62例中,骨髓样本RT-PCR检测15例阳性表达,其中9例IHC检测也为阳性,二者结果有较好一致性(kappa=0.6945),检出率有统计学差异(P=0.0412);SLN样本RT-PCR法有13例KT19mRNA表达,其中7例IHC检出KT19阳性细胞,二者结果一致性较好(kappa=0.6483),检出率有统计学差异(P=0.0412);骨髓和SLN同时表达KT19mRNA仅3例,无显著相关(P=0.796);原发肿瘤大小和骨髓KT19mRNA表达率有关联(P=0.003)。结论常规检查未发现远处和腋窝淋巴结转移,骨髓和SLN可检出微小转移,RT-PCR较IHC更灵敏,肿瘤大小与骨髓微小转移有关联。由于骨髓和腋窝淋巴结微小转移不一定同步出现,选用灵敏方法对不同组织同时进行检测可能更具临床价值。 展开更多
关键词 骨髓 前哨淋巴结 微小转移 乳腺肿瘤 免疫组织化学 rt—pcr
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免疫捕获法多重PCR技术检验和鉴定霍乱弧菌 被引量:1
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作者 黄建炜 陆祖福 +2 位作者 李莉 徐雪荣 牛建军 《海峡预防医学杂志》 CAS 2006年第2期8-11,共4页
[目的]应用免疫捕获法和多重PCR技术检测霍乱弧菌,探讨其方法的敏感性与特异性。[方法]霍乱弧菌McAb包被微量PCR管,捕获标本中霍乱弧菌;裂解后用多重PCR检测菌体抗原和肠毒素的编码基因,以检测霍乱弧菌。[结果]用凝胶电泳法,检出限低于1... [目的]应用免疫捕获法和多重PCR技术检测霍乱弧菌,探讨其方法的敏感性与特异性。[方法]霍乱弧菌McAb包被微量PCR管,捕获标本中霍乱弧菌;裂解后用多重PCR检测菌体抗原和肠毒素的编码基因,以检测霍乱弧菌。[结果]用凝胶电泳法,检出限低于100 cfu/ml,可直接检测霍乱弧菌的血清群别和肠毒素基因(ctx),扩增片段序列与引物设计模板一致。[结论]该方法敏感性高、特异性好、简便快捷,适于各种标本霍乱弧菌的快速检测方法。 展开更多
关键词 霍乱弧菌 免疫捕获 多重pcr 分型鉴定
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免疫捕获PCR快速检测阳性血培养瓶中的金黄色葡萄球菌 被引量:1
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作者 周义正 李向阳 杨锦红 《浙江临床医学》 2007年第7期991-992,共2页
关键词 金黄色葡萄球菌 快速检测 血培养瓶 免疫捕获 pcr 阳性 AUREUS MECA基因
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免疫磁捕获-PCR检测大肠杆菌O157
7
作者 田菊霞 解宇 杨艳宏 《健康研究》 CAS 2010年第1期5-7,共3页
目的使用免疫BMPs,对牛粪标本中的大肠杆菌O157进行免疫磁捕获,再对捕获物进行PCR检测,研究免疫磁捕获-PCR检测牛粪标本中大肠杆菌O157的方法。方法从磁性细菌中获取BMPs,将大肠杆菌O157抗体接种于BMPs表面,制成免疫BMPs。使用免疫BMPs... 目的使用免疫BMPs,对牛粪标本中的大肠杆菌O157进行免疫磁捕获,再对捕获物进行PCR检测,研究免疫磁捕获-PCR检测牛粪标本中大肠杆菌O157的方法。方法从磁性细菌中获取BMPs,将大肠杆菌O157抗体接种于BMPs表面,制成免疫BMPs。使用免疫BMPs,对大肠杆菌O157∶H7浓度为1×103cfu/g的牛粪标本,进行免疫磁捕获,对捕获物以vt1(Vero毒素1基因)、vt2(Vero毒素2基因)为增扩对象,进行PCR检测。作为对照,相同牛粪标本,直接对牛粪标本以vt1、vt2为增扩对象,进行同样PCR检测。结果相同牛粪标本,经免疫BMPs捕获处理,捕获物的PCR结果显示vt1及vt2基因阳性。而未经免疫磁捕获处理的牛粪标本,直接PCR检测的结果显示阴性。结论对牛粪标本,利用免疫BMPs,可捕获目标抗原,同时还可去除牛粪中存在的PCR反应抑制物等影响因素,提高检测敏感度。 展开更多
关键词 免疫捕获 pcr 大肠杆菌O157
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免疫捕获PCR检测进境苹果果实中梨火疫病菌 被引量:4
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作者 何丹丹 周国梁 +3 位作者 陈仲兵 印丽萍 徐殿胜 易建平 《植物检疫》 北大核心 2010年第1期13-17,共5页
利用梨火疫病菌抗体和PCR技术建立了梨火疫病菌免疫捕获PCR方法,检测苹果模拟样品的灵敏度达到了1.5×102cfu/reaction。与直接PCR进行比较,免疫捕获PCR方法检测苹果模拟样品的灵敏度提高了10倍以上,而且省去了DNA提取等步骤。利用... 利用梨火疫病菌抗体和PCR技术建立了梨火疫病菌免疫捕获PCR方法,检测苹果模拟样品的灵敏度达到了1.5×102cfu/reaction。与直接PCR进行比较,免疫捕获PCR方法检测苹果模拟样品的灵敏度提高了10倍以上,而且省去了DNA提取等步骤。利用该方法成功从进境苹果样品中检测到梨火疫病菌,产物测序结果表明,产物序列和梨火疫病菌的相应序列高度一致。试验结果表明,免疫捕获PCR法能除去样品中的大部分PCR反应抑制物质,可以有效检测进境苹果中梨火疫病菌,在口岸水果检疫中具有一定的应用潜力和推广价值。 展开更多
关键词 梨火疫病菌 免疫捕获pcr 苹果
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免疫磁球捕获-PCR检测牛奶中金黄色葡萄球菌的研究 被引量:10
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作者 邓奕 许迪莘 +1 位作者 赵琳娜 杨寅 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期304-307,313,共5页
对免疫磁球捕获-PCR(IMS-PCR)检测牛奶中金黄色葡萄球菌进行了初步研究。优化了免疫磁球制备参数,确定了金黄色葡萄球菌免疫磁球对目标菌的结合时间。研究结果显示,当纯菌浓度为101~104CFU/m L水平时,金黄色葡萄球菌免疫磁球对目标菌... 对免疫磁球捕获-PCR(IMS-PCR)检测牛奶中金黄色葡萄球菌进行了初步研究。优化了免疫磁球制备参数,确定了金黄色葡萄球菌免疫磁球对目标菌的结合时间。研究结果显示,当纯菌浓度为101~104CFU/m L水平时,金黄色葡萄球菌免疫磁球对目标菌的捕获率大于80%。通过对目标菌和非目标菌的检测,IMS-PCR检测方法显示了很强的特异性;在纯培养、无需增菌情况,IMS-PCR检测方法检测限为104CFU/m L;牛奶中的金黄色葡萄球菌经磁分离后增菌2h用PCR检测,可检测出104CFU/m L的金黄色葡萄球菌。 展开更多
关键词 免疫磁球捕获 pcr 牛奶 金黄色葡萄球菌
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南瓜种子中黄瓜绿斑驳花叶病毒IC-RT-PCR检测方法的建立 被引量:4
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作者 黄静 廖富荣 +1 位作者 林石明 陈青 《漳州职业技术学院学报》 2009年第1期12-15,共4页
黄瓜绿斑驳花叶病毒(Cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)是葫芦科重要种传病毒之一。本文建立了免疫捕获RT—PCR(IC—RT—PCR)的分子检测方法直接从带毒种子中检测出该病毒,扩增获得其CP基因,并克隆到pMD18-T载体中,经... 黄瓜绿斑驳花叶病毒(Cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)是葫芦科重要种传病毒之一。本文建立了免疫捕获RT—PCR(IC—RT—PCR)的分子检测方法直接从带毒种子中检测出该病毒,扩增获得其CP基因,并克隆到pMD18-T载体中,经核苷酸序列分析表明,该分离物CP基因全长为486个核苷酸,编码由161个氨基酸组成的17.3kDa蛋白,与国内外已报道的CGMMV的CP基因相比,其核苷酸序列的同源性为91.4%~99.4%,其推导的氨基酸同源性为98.8%~100%。IC-RT—PCR方法的建立,为检疫部门提供了从带毒种子中快速、准确检测该病毒的方法,很有应用前景。 展开更多
关键词 南瓜种子 黄瓜绿斑驳花叶病毒 免疫捕获rt—pcr CP基因 序列分析
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空肠弯曲菌的磁捕获_-荧光PCR检测方法的建立 被引量:19
11
作者 刘光明 苏文金 +3 位作者 蔡慧农 谢明星 刘棠 彭小莉 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期336-340,共5页
为提高畜禽类食品中空肠弯曲菌的检出率和灵敏度 ,应用抗血清和磁性微珠首次制备弯曲菌免疫磁珠 ,利用弯曲菌免疫磁珠直接捕获检样中目的菌 ,不需要增菌培养 ;通过荧光PCR检测鞭毛蛋白A(flaA)基因和 或马尿酸酶 (hipO)基因 ,首次建立... 为提高畜禽类食品中空肠弯曲菌的检出率和灵敏度 ,应用抗血清和磁性微珠首次制备弯曲菌免疫磁珠 ,利用弯曲菌免疫磁珠直接捕获检样中目的菌 ,不需要增菌培养 ;通过荧光PCR检测鞭毛蛋白A(flaA)基因和 或马尿酸酶 (hipO)基因 ,首次建立空肠弯曲菌的磁捕获_荧光聚合酶链反应 (IMC_FPCR)方法。IMC_FPCR法检测空肠弯曲菌方法简便易行 ,可在 2 4h内完成 ,特异性好 ,检测低限达到 10cfu mL ,抗干扰性强。IMC_FPCR方法可望解决非可培养状态的空肠弯曲菌检测难题 ,是一种适用于检验检疫、卫生防疫和农产品安全检验等领域的快速方法。 展开更多
关键词 空肠弯曲菌 免疫磁珠捕获 荧光pcr 检测
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一种豇豆重花叶病毒IC-RT real-time PCR检测方法的建立 被引量:3
12
作者 李彬 粟寒 +2 位作者 吴翠萍 周明华 安榆林 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期491-496,共6页
为建立豇豆重花叶病毒(Cowpeasevere mosaic virus,CPSMV)免疫捕获-反转录-实时荧光(IC-RTreal-time)PCR分子检测方法,利用从ATCC和DSMZ引进的CPSMV标准毒株,先建立CPSMVRTreal-time PCR检测方法;在此基础上,建立用于CPSMV检测的IC-RTre... 为建立豇豆重花叶病毒(Cowpeasevere mosaic virus,CPSMV)免疫捕获-反转录-实时荧光(IC-RTreal-time)PCR分子检测方法,利用从ATCC和DSMZ引进的CPSMV标准毒株,先建立CPSMVRTreal-time PCR检测方法;在此基础上,建立用于CPSMV检测的IC-RTreal-time PCR方法.结果表明:IC-RTreal-time PCR方法的灵敏度可达500 pg叶组织;该方法具有特异性好、灵敏度高、操作简便等优点,省去了RNA的提取过程,适用于豇豆等豆类种子及种苗中对豇豆重花叶病毒的快速检测. 展开更多
关键词 豇豆重花叶病毒 免疫捕获反转录 实时荧光pcr
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Real-timePCR分析免疫应激对肉鸡各肠段微生物区系的影响 被引量:2
13
作者 冯焱 杨小军 +2 位作者 李武林 杨宁 姚军虎 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第22期4800-4807,共8页
【目的】应用细菌的16S rRNA序列设计双歧杆菌属(Bifidobacterium)、乳杆菌属(Lactobacillus)、肠杆菌科(Enterobacteriaceae)和肠球菌属(Enterococcus)的引物并对肉鸡肠道的这4类细菌菌属进行定量测定,检测免疫应激对肉鸡不同肠段微生... 【目的】应用细菌的16S rRNA序列设计双歧杆菌属(Bifidobacterium)、乳杆菌属(Lactobacillus)、肠杆菌科(Enterobacteriaceae)和肠球菌属(Enterococcus)的引物并对肉鸡肠道的这4类细菌菌属进行定量测定,检测免疫应激对肉鸡不同肠段微生物区系的影响。【方法】将180只AA肉公鸡随机分4个处理,每处理设5个重复,每个重复有9只。试验分为NV、CV、LPS和CYP处理组。免疫应激组分别于18、19、20、32、33和34 d肌肉注射相应剂量的LPS和CYP,NV组和CV组于同日龄注射等体积生理盐水。分别于21、28、35和42 d,每处理组各取6只鸡,无菌操作,宰杀后取十二指肠、空肠、回肠和盲肠内容物。将待测样品中提取的DNA分别进行4类菌属进行Real-time PCR反应。【结果】与NV相比,4类细菌的基因拷贝数发生显著变化。集中在回肠和盲肠,肠杆菌属:5.03—7.88 copies/mg;乳酸杆菌属:5.48—10.34 copies/mg;双歧杆菌属:4.11—7.98 copies/mg;肠球菌属:5.61—8.79 copies/mg。双歧杆菌属含量为4种菌属中细菌含量最低,乳酸杆菌含量高,盲肠含菌最多,十二指肠含量最少,后期各菌群趋于稳定。【结论】免疫应激可引起肠道菌群失调,乳杆菌属和双歧杆菌属的数量在无免疫情况下的含量相对高,LPS和CYP对肉鸡后期的肠道菌群的无显著影响。 展开更多
关键词 rt—pcr 微生物区系 免疫应激 肉鸡
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应用IC-RT-PCR方法检测齿兰环斑病毒和建兰花叶病毒 被引量:3
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作者 李志勇 郭京泽 +2 位作者 司贺龙 李兴红 董金皋 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期40-42,共3页
根据已报道的建兰花叶病毒和齿兰环斑病毒外壳蛋白基因序列设计PCR引物,建立了蝴蝶兰建兰花叶病毒和齿兰环斑病毒IC-RT-PCR检测方法。用该方法对天津地区8个蝴蝶兰标样检测,结果显示:8个标样中有4个检测到建兰花叶病毒,另外4个检测到齿... 根据已报道的建兰花叶病毒和齿兰环斑病毒外壳蛋白基因序列设计PCR引物,建立了蝴蝶兰建兰花叶病毒和齿兰环斑病毒IC-RT-PCR检测方法。用该方法对天津地区8个蝴蝶兰标样检测,结果显示:8个标样中有4个检测到建兰花叶病毒,另外4个检测到齿兰环斑病毒。该方法简化了操作程序,为蝴蝶兰种苗病毒的快速检测奠定了基础。 展开更多
关键词 蝴蝶兰 齿兰环斑病毒 建兰花叶病毒 外壳蛋白基因 免疫捕获pcr 序列分析
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豇豆花叶病毒和黑眼豇豆花叶病毒RT-Realtime PCR及IC-RT-Realtime PCR检测方法研究 被引量:3
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作者 李彬 粟寒 +3 位作者 李艳华 缪爱斌 吴翠萍 安榆林 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期105-109,共5页
建立了豇豆两种种传病毒豇豆花叶病毒(CPMV)和黑眼豇豆花叶病毒(BlCMV)RT-Realtime PCR检测方法以及双重RT-Realtime PCR检测方法。在此基础上,根据免疫学抗原抗体特异性吸附的特点,建立了CPMV和BlCMV免疫捕获反转录荧光定量(IC-RT-Real... 建立了豇豆两种种传病毒豇豆花叶病毒(CPMV)和黑眼豇豆花叶病毒(BlCMV)RT-Realtime PCR检测方法以及双重RT-Realtime PCR检测方法。在此基础上,根据免疫学抗原抗体特异性吸附的特点,建立了CPMV和BlCMV免疫捕获反转录荧光定量(IC-RT-Realtime)PCR检测方法以及双重IC-RT-Realtime PCR检测方法。该单重及双重IC-RT-Real-time PCR检测方法具有灵敏度高、特异性强和稳定性好等优点,适用于豆类种苗中对CPMV和BlCMV的检测。 展开更多
关键词 豇豆花叶病毒 黑眼豇豆花叶病毒 免疫捕获反转录实时荧光pcr 双重反转录实时荧光pcr
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应用IC-RT-PCR方法检测水仙中百合斑驳病毒 被引量:6
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作者 贾丽霞 李志勇 马继芳 《北方园艺》 CAS 北大核心 2011年第14期123-125,共3页
水仙病毒严重影响水仙的品质与规模化生产,而快速检测水仙病毒可以有效防控其危害与扩散。根据已报道的百合斑驳病毒外壳蛋白基因序列设计PCR引物,利用免疫捕获PCR检测了水仙样品中百合斑驳病毒。PCR扩增产物回收后克隆到PMD19-T载体... 水仙病毒严重影响水仙的品质与规模化生产,而快速检测水仙病毒可以有效防控其危害与扩散。根据已报道的百合斑驳病毒外壳蛋白基因序列设计PCR引物,利用免疫捕获PCR检测了水仙样品中百合斑驳病毒。PCR扩增产物回收后克隆到PMD19-T载体中测序。把克隆得到的百合斑驳病毒外壳蛋白基因部分序列提交到Genbank中。结果表明:基因登录号为JF714974,克隆的百合斑驳病毒外壳蛋白基因部分序列与国内外百合斑驳病毒同源性为90.4%~99.5%。建立了水仙中百合斑驳病毒的IC-RT-PCR的检测方法,简化了试验步骤,适合于水仙中百合斑驳病毒的快速检测。 展开更多
关键词 水仙病毒病 免疫捕获pcr 百合斑驳病毒 序列分析
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运用实时荧光定量RT-PCR和ELISA方法定量检测SHIV的对比分析 被引量:3
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作者 刘强 杨贵波 +4 位作者 褚亚芬 段丹丽 彭虹 邢辉 邵一鸣 《中国艾滋病性病》 CAS 2006年第4期300-303,310,共5页
目的 建立一种实时、灵敏、特异的针对人/猴免疫缺陷病毒(SHIV)的RNA载量检测方法,通过与酶联免疫吸附试验(ELISA)进行比较,成为监测SHIV病毒体外复制过程的常用方法。方法 体外转录制备RNA标准品,利用TaqMan EZ逆转录聚合酶链... 目的 建立一种实时、灵敏、特异的针对人/猴免疫缺陷病毒(SHIV)的RNA载量检测方法,通过与酶联免疫吸附试验(ELISA)进行比较,成为监测SHIV病毒体外复制过程的常用方法。方法 体外转录制备RNA标准品,利用TaqMan EZ逆转录聚合酶链反应(RT—PCR)试剂盒的反应体系和针对SHIVgag保守区91个碱基的Taq—Man探针与引物,建立一步法实时荧光定量RT—PCR。三种SHIV感染性分子克隆体外转染293T细胞,在不同的时间点采样,通过实时荧光定量RT—PCR和ELISA两种方法监测SHIV病毒复制过程。结果两种方法监测的病毒复制过程基本一致,转染后2~48小时病毒复制出现明显的对数生长期,之后进入平台期,p24浓度大约100pg/ml,而RNA载量大约在100拷贝/ml。两者具有很好的相关性(r^2=0.834;P〈0.001)。实时荧光定量RT+PCR灵敏度更高,检测范围更广,费用更低。结论 所建立的一步法检测SHIV病毒载量的实时荧光定量RT—PCR方法,可以作为监测SHIV体外扩增的常用方法。 展开更多
关键词 人/猴免疫缺陷病毒(SHIV) 实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(rt—pcr) 酶联免疫吸附试验(ELISA) 体外复制 病毒定量
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应用多重套式RT-PCR检测儿童急性淋巴细胞白血病的融合基因 被引量:1
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作者 何军 陈子兴 +4 位作者 薛永权 李建琴 何海龙 黄益萍 朱伶俐 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期91-94,共4页
目的 研究染色体结构易位所致的融合基因在儿童急性淋巴细胞白血病 (ALL)的表达。方法 采用多重套式RT PCR结合染色体R带或G带核型分析、流式细胞仪细胞免疫表型检测对 64例儿童ALL进行分析。结果 64例ALL患儿中 23例(36. 0% )具有 1... 目的 研究染色体结构易位所致的融合基因在儿童急性淋巴细胞白血病 (ALL)的表达。方法 采用多重套式RT PCR结合染色体R带或G带核型分析、流式细胞仪细胞免疫表型检测对 64例儿童ALL进行分析。结果 64例ALL患儿中 23例(36. 0% )具有 13种染色体畸变产生的融合基因,包括E2A/PBX1,E2A/HLF,TEL/AML1,TLS/ERG,MLL/AF4,MLL/AF9,MLL/AF10,MLL/AFX,MLL/AF6,MLL/ELL,dupMLL,TAL1D,HOX11。ALL患儿融合基因和染色体总畸变率为 67. 2%(43 /64)。结论 多重套式RT PCR结合染色体核型、免疫表型是儿童ALL临床诊断、治疗和预后判断的重要依据。 展开更多
关键词 融合基因 儿童急性淋巴细胞白血病 套式rt-pcr 治疗 rt—pcr 患儿 细胞免疫表型 染色体 畸变率 核型分析
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空肠弯曲菌的磁捕获-荧光PCR检测技术研究 被引量:2
19
作者 刘光明 方元炜 +5 位作者 陈伟玲 周昱 孔繁德 王根芳 刘棠 彭小莉 《检验检疫科学》 2004年第B12期16-21,共6页
空肠弯曲菌是世界卫生组织列为最常见食源性传染病菌之一的人兽共患病原菌,传统的分离鉴定方法需要耗费大量工时,并存在敏感性低、难以检出非可培养状态细菌和易出现假阴性结果等问题。本研究首创了空肠弯曲菌的磁捕获-荧光PCR快速检测... 空肠弯曲菌是世界卫生组织列为最常见食源性传染病菌之一的人兽共患病原菌,传统的分离鉴定方法需要耗费大量工时,并存在敏感性低、难以检出非可培养状态细菌和易出现假阴性结果等问题。本研究首创了空肠弯曲菌的磁捕获-荧光PCR快速检测方法,无需增菌培养即可直接捕获检样中的弯曲菌,利用实时荧光PCR进行鉴定,可在24h内完成检测,检测低限达到10cfu/mL,提高了非可培养状态空肠弯曲菌的检出率。 展开更多
关键词 空肠弯曲菌 捕获-荧光pcr检测技术 格林-巴利综合症 人兽共患病 免疫捕获方法 肠炎
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大豆种传南方菜豆花叶病毒和烟草环斑病毒的GICA-RT-PCR检测 被引量:5
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作者 张晓雷 檀根甲 +2 位作者 魏梅生 张永江 李桂芬 《安徽农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期319-322,共4页
南方菜豆花叶病毒(south bean mosaic virus,SBMV)和烟草环斑病毒(tobacco ringspot virus,TRSV)是我国重要的进境检疫性有害生物,两种病毒均为种传病毒,可随大豆种子实现远距离传播。本研究以这两种病毒的大豆病种子为试材,先用胶体金... 南方菜豆花叶病毒(south bean mosaic virus,SBMV)和烟草环斑病毒(tobacco ringspot virus,TRSV)是我国重要的进境检疫性有害生物,两种病毒均为种传病毒,可随大豆种子实现远距离传播。本研究以这两种病毒的大豆病种子为试材,先用胶体金免疫层析试纸条(GICA)检测,将检测完病毒后的胶体金免疫层析试纸条上的T线和C线剪下,再用RT-PCR的方法将T线和C线上捕获的病毒直接进行扩增,这种将血清学与分子生物学相结合起来所建立的GICA-RT-PCR检测方法,省去了烦琐的总RNA提取的环节,简化了病毒检测的步骤,提高了检测的灵敏度。 展开更多
关键词 南方菜豆花叶病毒 烟草环斑病毒 胶体金免疫层析 试纸条 rt—pcr GICA-rt—pcr
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