共表达膜结合型与可溶性H9N2亚型禽流感病毒HA蛋白的重组基因Ⅶ型新城疫病毒的构建及免疫效果评价

旨在构建能高效稳定表达H9N2 AIV的HA蛋白的重组基因Ⅶ型新城疫病毒,有望开发抗新城疫和H9N2亚型禽流感病毒的二联疫苗,为控制H9N2 AIV和NDV提供新的防御思路,对NDV疫苗载体的构建和优化有重要的参考意义。利用反向遗传技术,以rDHN3-mF为骨架,在病毒基因组的P和M之间的非编码区插入全长膜结合HA和另外一个带有截短跨膜结构域的可溶性HA蛋白,获得了能高效稳定表达H9N2 AIV的HA蛋白的基因Ⅶ型NDV减毒株重组病毒rDHN3mF-HA和rDHN3mF-2HA。通过鸡胚接种、Western blot、血凝效价(HA)及平均鸡胚致死时间(MDT)等试验来检测重组病毒的稳定性以及生物学特性,将重组病毒以10~6 EID_(50·)只^(-1)剂量免疫7日龄SPF鸡并测定血凝抑制(HI)抗体,在免疫后28 d对各组进行攻毒保护试验。结果显示:重组病毒在鸡胚中连续传至十五代后HA基因无突变发生;Western blot证明重组病毒可稳定高效地表达特异性的HA蛋白;重组病毒的生长曲线说明了重组病毒与亲本毒株具有相似的复制特性和低毒力特征;重组病毒免疫组的SPF鸡均能产生针对NDV或者H9N2 AIV的特异性HI抗体;攻毒保护试验结果:重组病毒均能对攻毒后的鸡产生100%保护效果;喉、肛拭子检测结果说明重组病毒可显著减少NDV与H9N2 AIV的体外排毒;气管与肺qPCR检测结果显示攻毒后3 d, rDHN3mF-2HA较rDHN3mF-HA更显著地降低了脏器中H9N2 AIV含量。本研究成功构建了共表达膜结合型与可溶性H9N2亚型禽流感HA蛋白的基因Ⅶ型重组NDV,为H9N2 AIV和NDV的一种新型重组基因工程二联活载体疫苗的研制与应用奠定了基础。

糖尿病药物可提高免疫效率

加拿大与美国的研究人员联合研究发现，广泛用于治疗糖尿病的处方药物——二甲双胍，可以提高人体免疫系统的T细胞效率，进而使抗癌和抗病毒的疫苗更为有效。该项发现对于科学家开发新的抗癌疫苗和找到新的癌症治疗方法，提供了有价值的线索。相关研究文章发表在6月的《自然》杂志上。

无标度网络的免疫策略研究

文章结合目标免疫和熟人免疫各自的优势,提出了一种改进的免疫算法:随机选择网络中的部分节点,对被选节点的最大度邻居进行免疫.在算法上结合了熟人免疫的优点,即无需获知全局网络结构信息,并具有目标免疫策略的高效性.通过对算法进行基于无标度网络拓扑进行仿真模拟,验证了本算法具有更高的免疫效率和更广的应用价值.

复杂网络上免疫技术的研究

基于复杂网络中已有的三种网络免疫策略,从免疫效率、代价等方面分析免疫策略,根据它们的免疫特性,本文提出了一种新的免疫策略——二阶双免疫策略,主要是在网络中随机选取一部分节点,然后对所选取的节点中最大度的节点和二阶邻居节点进行节点免疫,是对熟人免疫和双免疫策略的改进和完善。实验结果表明,在无标度网络中,本文采用的二阶双免疫在网络免疫中的效果更好,与传统的随机免疫、熟人免疫和双免疫,还有最大度免疫策略,其免疫效果有了很大的提高。

基于图覆盖的改进复杂网络免疫策略

提出一种基于图覆盖的改进复杂网络免疫策略。该方法引入模拟退火的思想,利用局部信息,以节点度大为原则选取免疫节点,同时以一定的概率接受度小的节点。使用交互式邮件传播模型,在真实的网络数据集上从免疫效率和免疫代价的角度进行了对比实验。实验结果发现,改进的方法在一些社团结构明显的网络中具有更好的效果,从而验证该方法的有效性。

规范免疫队伍,提升免疫效果

近几年,随着商品蛋鸡单栋和整体养殖规模的迅猛增加,负责免疫接种的免疫小分队如雨后春笋般发展壮大了起来。虽然,免疫小分队具有免疫效率快,养殖户(场)省事等诸多便利,但由于存在走千家万户和操作不规范等问题,也在蛋鸡疫病的传播中起到了推波助澜的作用。

植物叶片染色质免疫共沉淀方法的优化

以拟南芥成熟叶片为材料,探索3种不同型号超声破碎仪器的染色质免疫共沉淀(Ch IP)超声破碎条件.根据超声破碎结果推荐使用Covaris M220 Focused-ultrasonicator仪器,并将该仪器破碎条件设置为10%duty cycle、75 Watts Intensity Peak Incident power、200 cycle per Burst、7℃bath temperature、破碎时间12 min时,可获得约500 bp的DNA片段.同时,为检测不同H3K9ac抗体用量对染色质免疫沉淀效率的影响,通过半定量和实时荧光定量PCR检测确定初始量0.25 g的拟南芥叶片所需H3K9ac抗体的最适用量为3μL.此外,以不同衰老程度的水稻旗叶为材料,根据上述破碎条件,进一步优化超声破碎时间,同样可以获得合适的DNA片段,根据优化的样品与抗体用量比例,通过免疫沉淀可以获得适用于后期实时定量PCR(Ch IP-q PCR)和高通量测序(Ch IP-seq)分析的DNA样品.

幽门螺杆菌尿素酶B亚单位W/O/W型复乳剂的研制

目的 制备重组幽门螺杆菌尿素酶B亚单位(rUreB)复乳剂,研究其物理性质及免疫效率。方法 设计处方采用二步法制备复乳,显微镜观察乳滴结构及粒径分布,以电导法测定包封率,以经典法、离心法及电导法观察复乳的稳定性,免疫印迹观察抗原制备成复乳剂后免疫反应性的变化,以动物实验观察rUreB复乳的免疫效率。结果 制备的rUreB复乳性质稳定、包封率98.3％、粒径大小主要在2～10μm,免疫印迹及小鼠口服免疫后特异性抗体测定结果表明,该复乳具有良好的免疫原性,剂量小、免疫效率高。结论 将幽门螺杆菌尿素酶B亚单位制备成复乳剂可得到高效、廉价、使用方便的疫苗,复乳是一个很有潜力的黏膜疫苗传送系统。

T细胞人类白细胞抗原-G过表达对T细胞共培养胃癌MGC-803细胞的免疫杀伤作用

目的研究T细胞人类白细胞抗原-G(HLA-G)过表达后对共培养胃癌MGC-803细胞的免疫杀伤作用。方法处死各组小鼠后分离淋巴细胞,通过免疫磁珠纯化T淋巴细胞,其纯度用流式细胞仪测定。将转染试剂、NC质粒、HLA-G重组载体分别转染至T淋巴细胞分为对照(Control)组、NC转染组、HLA-G转染组,细胞转染效率用荧光显微镜和流式细胞仪测定。以蛋白质印迹(WB)法测定各组细胞中HLA-G蛋白表达水平;以酶联免疫吸附(ELISA)法测定各组细胞上清液中γ-干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-2(IL-2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达水平;转染48 h后以CCK-8法检测HLA-G转染组、NC转染组、Control组与胃癌MGC-803细胞共培养时肿瘤免疫杀伤效率。结果HLA-G转染组细胞中HLA-G蛋白表达(1.08±0.09)明显高于Control组(0.18±0.04)和NC转染组(0.17±0.05,P<0.05)。与Control组、NC转染组相比,HLA-G转染组细胞中IFN-γ、IL-2、TNF-α水平均明显降低(均P<0.05)。效靶比为10∶1、20∶1、40∶1时,与Control组、NC转染组相比,HLA-G转染组胃癌细胞免疫杀伤率均显著降低(P<0.05)。结论T细胞过表达HLA-G后可减弱对胃癌细胞MGC-803体外免疫作用,当效靶比为40∶1时,T细胞对胃癌细胞MGC-803免疫杀伤作用最显著。

重组乳酸乳球菌表达禽流感病毒HA1基因载体的构建及在禽流感病毒防治领域的应用

目的构建以重组乳酸乳球菌为基础的黏膜输送载体。方法以高致病性禽流感病毒H5N1的HA1基因作为研究对象,利用nisin诱导表达控制系统,构建分泌型与非分泌型重组乳酸乳球菌表达载体,经口服灌胃途径免疫BALB/c小鼠,通过ELISA检测小鼠血清IgG和粪便IgA,最后,对免疫后的小鼠进行H5N1病毒攻击实验,进而比较分泌型与非分泌型重组乳酸乳球菌表达载体的免疫效率。结果分泌型重组乳酸乳球菌免疫小鼠后产生的抗体水平(IgG和IgA)高于非分泌型重组乳酸乳球菌,经过同型H5N1病毒攻击后,分泌型重组乳酸乳球菌免疫的小鼠的存活率为80%,而非分泌型重组乳酸乳球菌免疫的小鼠的存活率为60%。结论本研究为防治高致病性禽流感病毒提供可行的思路与方法。