胸腹水、脑脊液中结核分枝杆菌RD1基因编码抗原刺激后释放γ干扰素的特异性T细胞检测

目的初步探讨胸腹水、脑脊液中结核分枝杆菌RD1基因编码抗原刺激后释放γ干扰素的特异性T细胞检测在诊断结核感染中的应用。方法应用酶联免疫斑点技术检测6kD早期分泌靶向抗原和10kD培养滤过蛋白肽段库刺激后外周血、胸腹水、脑脊液单个核细胞中释放γ干扰素的特异性T细胞。结果静脉血和胸腹水、脑脊液中单个核细胞γ干扰素释放反应有助于诊断结核感染,结果阳性的患者最终均诊断为活动性结核病。结果阳性的胸、腹水斑点形成细胞数分别是静脉血的6.4和31.9倍。结论在胸腹水、脑脊液中检测结核分枝杆菌RD1基因编码抗原刺激后释放γ干扰素的特异性T细胞,可能为诊断结核感染提供新的途径。

肠道病毒71型衣壳蛋白VP1特异性识别和激活手足口病患儿CD4^+T细胞免疫活化

目的探讨肠道病毒病毒71型衣壳蛋白VP1诱导EV71感染患儿外周血T淋巴细胞产生干扰素-γ(IFN-γ)应答特征。方法收集2010年9月至2011年12月西安交通大学医学院第二附属医院和西安市儿童医院住院的EV71感染手足口病患儿共31例,根据临床特征分为3组:急性感染期组(16例)、临床恢复期组(9例)和感染恢复后1个月组(6例);另外,选取10例健康儿童为对照组。通过重叠肽技术合成覆盖EV71衣壳蛋白VP1 36条重叠肽段作为抗原,采用IFN-γ酶联免疫斑点分析法(ELISPOT)和磁珠分选法(MACs)体外检测各组患儿EV71 VP1特异性CD4^+T细胞和CD8+T细胞免疫应答特征。结果急性感染期组有4例(25%)患儿对VP1蛋白存在T细胞免疫反应,临床恢复期组5例(56%)患儿对VP1蛋白存在T细胞免疫反应,其中EV71感染临床恢复期组患者反应强度最强,显著高于急性感染期,差异有统计学意义(Z=-2.042、P=0.041),而感染恢复后1个月组和对照组均未检测到T细胞免疫反应,临床恢复期组患者T细胞反应强度显著高于感染恢复后1个月组(Z=-2.105、P=0.035)和对照组(Z=-2.633、P=0.008),差异均有统计学意义;提示EV71感染患儿VP1蛋白被识别的频率(即例数)随着临床症状及体征消失而消失。VP1蛋白诱导的细胞免疫应答以特异性CD4^+T细胞为主导;筛选确定了8个EV71 VP1蛋白区CD4^+T细胞表位。结论 EV71感染患儿在发病期对VP1蛋白存在特异性T细胞反应,且以特异性CD4^+T细胞为主导;筛选确定EV71感染患儿VP1蛋白的CD4^+T细胞表位有助于阐明EV71感染的细胞免疫学发病机制。

HIV-1蛋白诱导T细胞产生IFN-γ反应特征及对HIV-1感染者病情进展的影响

目的探讨HIV—1特异性T细胞反应特征及对HIV-1感染者病情进展的影响。方法通过合成重叠肽技术及ELISPOT技术，采用队列研究方法对37名HIV-1感染者的病毒特异性T细胞免疫反应进行分析。结果83．78％（31／37）的HIV-1感染者对1个或多个合成肽反应（反应强度大于50SFU／10^6 PBMCs）HIV-1 B型病毒不同蛋白可激发HIV-1感染者的特异性T细胞反应，其中H1V-1 Gag蛋白被识别的频率最高，81％的HIV-1感染者识别HIV—1 Gag而且HIV-1 Gag蛋白诱导的T细胞反应强度最高，相对强度达到28．25％，明显高于其他蛋白，差异具有统计学意义（F=17．969，P〈0．001）；重叠肽诱导T细胞分泌IFN-γ反应频率、反应强度在HIV—1感染无症状期和艾滋病期无明显区别，但是HIV-1Gag蛋白诱导的T细胞反应强度在无症状期明显高于艾滋病期。结论HIV-1 B型病毒不同基因编码蛋白激发T细胞分泌IFN-γ反应不同，其中HIV—1 Gag蛋白特异性T细胞在控制病情进展方面发挥了重要作用。