脑脊液白血病细胞免疫标记检测及应用

脑脊液白血病细胞免疫标记检测及应用广东省人民医院儿科研究室（５１００８０）林愈灯综述沈亦逵审校目前中枢神经系统白血病（ＣＮＳＬ）的诊断主要依靠临床表现和脑脊液常规检查。脑脊液细胞数较低时，则难以早期诊断［１］。免疫标记检测敏感性和特异性较高，但由于脑...

标记免疫双组分的SERS检测研究

以金膜为免疫检测的基底,采用自组装技术（Self-assembled monolayer,SAM）将ω-巯基十六酸（16-MHA）修饰于金膜后与抗体结合成固相抗体,在此基础上组装“固相抗体-待测抗原-标记免疫金溶胶”三明治复合体系.采用不同标记分子苯硫酚（Thiophenol）和4,4′-联吡啶（4,4′-Bipyridine）分别标记不同的免疫金溶胶,利用表面增强拉曼光谱（SERS）谱峰较窄且具有较强的分辨率及高灵敏度的特点,通过对两种标记分子特征谱峰的判断识别所加入的两种抗原.通过选择合适的标记分子和一定尺度的免疫溶胶,标记免疫SERS检测的检测限可达到飞克级（1～100 fg/mL）.

基于SERS标记免疫检测的再生性研究

具有高灵敏度,高选择性特点的表面增强拉曼散射(SERS)与免疫学中的特异吸附机理相结合形成的SERS标记免疫检测技术具有很大的研究及应用价值。文章重点研究了关于SERS标记免疫检测的再生性问题,力求增加此技术的循环利用价值。实验采用甘氨酸-HCl生物缓冲体系对三明治结构(固相抗体-抗原-标记免疫金溶胶)进行洗脱,通过酸碱度的改变,促使抗体抗原复合物发生解离。实验结果表明,洗脱24h后,固相抗体上连接的抗原及标记免疫溶胶能得到很好的去除,去除后再次组装三明治结构,仍能通过对标记分子的识别进行SERS标记免疫检测。在此基础上还研究了此方法的稳定性与重复使用次数,发现其具有较好的稳定性,重复使用次数可达10次左右。

表面增强拉曼散射标记免疫检测的再生性研究

目的:探讨表面增强拉曼散射标记免疫检测技术的循环利用问题和价值。方法:采用4,4’-联吡啶和苯硫酚制备金溶胶作SERS标记分子,并组装抗原抗体复合物,用其进行SERS检测,通过对SERS谱图的分析识别加入的抗原,重点研究固相抗体的重复使用方法。甘氨酸-HCI缓冲体系能彻底分离抗原和抗体,在SERS标记免疫检测中,能通过实验研究该体系对基底再生性和稳定性的影响。结果:使用甘氨酸-HCl缓冲体系对抗原抗体复合物进行洗脱,在洗脱时间为24h时,抗原和抗体能充分分离,因此清除了抗体上的标记免疫溶胶和抗原。第二次制备抗原抗体复合物时,基底的再生能力良好,重复使用的次数可达约10次,同时能继续识别标记分子,并进行SERS检测,具有稳定性。结论:通过甘氨酸-HCI生物缓冲体系洗脱是一种洗脱基底再生效果好和稳定性强的方法。

免疫组化标记物检测技术对子宫内膜癌早期的诊断价值探讨

目的研究子宫内膜癌早期应用免疫组化标记物检测技术的诊断价值。方法选取160例子宫内膜癌患者作为研究组,另选取100例子宫内膜增生患者作为对照组。两组患者均取子宫标本组织,采用免疫组化标记物检测技术检测免疫组化标记物(孕激素受体、雌激素受体、癌胚抗原、ki67、p53、p16)表达情况。比较两组免疫组化标记物表达情况,子宫内膜癌不同分期免疫组化标记物表达情况,子宫内膜癌不同分型免疫组化标记物表达情况,子宫内膜癌不同组织分化程度免疫组化标记物表达情况。结果研究组孕激素受体表达阳性率56.3%、雌激素受体表达阳性率61.3%、p16的表达阳性率21.3%均低于对照组的90.0%、92.0%、44.0%,癌胚抗原表达阳性率23.8%、ki67表达阳性率22.5%、p53表达阳性率58.8%均高于对照组的2.0%、8.0%、4.0%,差异具有统计学意义(P<0.05)。ⅠA期子宫内膜癌孕激素受体、雌激素受体、p16表达阳性率与ⅠB期比较差异无统计学意义(P>0.05);ⅠB期子宫内膜癌癌胚抗原、ki67、p53表达阳性率均高于ⅠA期,差异具有统计学意义(P<0.05)。Ⅰ型子宫内膜癌p16、癌胚抗原表达阳性率与Ⅱ型比较差异无统计学意义(P>0.05);Ⅱ型子宫内膜癌孕激素受体、雌激素受体、ki67、p53表达阳性率均高于Ⅰ型,差异具有统计学意义(P<0.05)。子宫内膜癌不同组织分化程度p16、p53表达阳性率比较差异无统计学意义(P>0.05);子宫内膜癌G1和G2孕激素受体、雌激素受体表达阳性率高于G3,癌胚抗原、ki67表达阳性率低于G3,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论在子宫内膜癌早期诊断中免疫组化标记物检测技术的应用临床价值显著。

排溢法ELISA,一种改进的二步法标记免疫实验技术

目的:建立一种简便的血清HBsAg检测二步法标记免疫试验。方法:在既往G6ELISA的基础上建立血清HB-sAg检测排溢法ELISA,采用系列稀释实验对方的相对显色强度,敏感性,及其对Hooks效应的拮抗能力进行考核,将其用于对一组临床标本的检测,并与经典二步法及一步法ELISA进行比较。结果:在大致相同的实验条件下排溢法,二步法及一步法ELISA三者实验信号的强度大致相当;其敏感性分别为19.2、12.6及14.5pg/ml。当被检标本HBsAg浓度在37.5μg/ml时一步法ELISA开始显现Hooks效应,至2400μg/ml时测值已接近阈值;而排溢法及经典二步法ELISA两者对Hooks效应则表现出相似的拮抗。对231例临床标本进行检测,112例高滴度阳性标本(经稀释实验证实)中出现中重度Hooks效应者一步法ELISA17例,占15.2%,而排溢法及其二步法ELISA则未见Hooks效应的影响。结论:在保证实验结果的前提下,排溢法ELISA在操作程度简化上与一步法相当,但可完全克服Hooks现象的干扰。

抗心磷脂抗体IgG和IgM双标记时间分辨荧光免疫分析法的建立和应用

目的 评价新建立的双标记时间分辨荧光免疫分析法（TRFIA法）检测抗心磷脂抗体（ACA）IgG和IgM的临床应用价值。方法 以心磷脂抗原（含β2糖蛋白Ⅰ段）包板,以稀土元素铕离子（Eu3＋）和钐离子（Sm3＋）分别标记抗人IgG抗体和抗人IgM抗体建立双标记TRFIA法。收集510例自身免疫性疾病患者（硬皮病24例、肾病综合征36例、强直性脊柱炎16例、脑梗死117例、狼疮性肾炎33例、干燥综合征63例、系统性红斑狼疮153例、类风湿关节炎70例）和50名健康献血者的血清标本,采用双标记TRFIA法测定ACA-IgG型抗体和ACA-IgM型抗体的临床阳性率和特异度。评估双标记TRFIA法检测高、中、低值样本的精密度。将3份已知浓度血清标本作倍比稀释,计算ACA-IgM型抗体和ACA-IgM型抗体的回收率。与酶联免疫吸附试验（ELISA法）的结果进行比对,分析双标记TRFIA法与ELISA法检测结果的一致性和稳定性等。结果 双标记TRFIA法检测ACA-IgG型抗体和ACA-IgM型抗体标准曲线的R2值分别为0.999、0.993,荧光强度值与样本浓度呈线性相关。ACA-IgM型抗体高、中、低3个浓度的批内变异系数（CV）分别为1.31%、2.82%、4.14%,批间CV分别为2.29%、4.08%、6.97%;ACA-IgG型抗体高、中、低3个浓度的批内CV分别为1.21%、3.18%、4.61%,批间CV分别为2.26%、3.93%、7.34%。双标记TRFIA法检测ACA-IgM型抗体和ACA-IgG型抗体的灵敏度均为0.1U/mL,特异度均为98.00%（49/50）。ACA-IgG型抗体回收率为95.11%~106.14%,ACA-IgM型抗体回收率为96.04%~106.54%。硬皮病、肾病综合征、强直性脊柱炎、脑梗死、狼疮性肾炎、干燥综合征、系统性红斑狼疮、类风湿关节炎患者ACA-IgG型抗体阳性率依次为16.67%、2.78%、7.14%、3.42%、15.15%、4.76%、7.84%、8.57%,ACA-IgM型抗体阳性率依次为4.17%、11.11%、14.29%、3.42%、27.27%、3.17%、8.50%、10.00%。双标记TRFIA法检测ACA-IgM型抗体和ACA-IgG型抗体的结果与ELISA法均呈正相关（R2值分别为0.928、0.924,P值均〈0.05）。双标记TRFIA法检测ACA-IgM型抗体和ACA-IgG型抗体的荧光强度值分别下降14.7%和15.8%,ELISA法检测ACA-IgM型抗体和ACA-IgG型抗体的光密度值分别下降37.6%和33.9%。结论 双标记TRFIA法同时检测ACA-IgG型抗体和ACAIgM型抗体具有效率高、灵敏度高、特异性强、检测范围宽和稳定的优点,其临床应用价值高,应用前景广阔。

A蛋白定向固定抗体用于椭偏光学生物传感器免疫检测

椭偏光学生物传感器是在椭偏光学显微成像技术的基础上发展的一项生物传感技术。它能够直接观测固体表面上的生物分子面密度 ,毋需任何标记辅助 ,适合发展成为一种无标记免疫检测技术。研究了在硅片表面上通过A蛋白定向固定抗体分子用于椭偏光学生物传感器免疫检测的可能性。实验结果表明 ,通过A蛋白固定抗体得到的抗体膜层的均一性和固定量的重复性能够保证椭偏光学生物传感器免疫检测结果的质量。通过A蛋白定向固定的抗体的抗原结合位点趋向一致 ,显著提高了抗体与抗原结合的能力。此外 ,通过蛋白A固定的免疫球蛋白G分子能够结合更多的多克隆抗体分子说明通过A蛋白固定的蛋白质分子能够较好地保持其空间构象。

泌尿生殖道沙眼衣原体临床检测方法的比较

目的探讨几种检测泌尿生殖道沙眼衣原体感染方法的临床诊断价值。方法免疫荧光法,糖原试验,胶体金标记技术免疫检测,聚合酶链反应(PCR)分别对100例妇产科就诊患者宫颈分泌物标本进行平行检测。结果免疫荧光法阳性检测率为23%,糖原试验阳性检测率为26%,胶体金标记技术免疫检测阳性检测率为22%,PCR 法阳性检测率为34%。结论四种试验方法均可用于沙眼衣原体感染的诊断,可选择两种或两种以上方法平行进行检测,以提高诊断准确率。

轮状病毒抗原检测对腹泻患儿的临床诊断意义

目的:探讨轮状病毒抗原检测对腹泻患儿的临床诊断意义。方法:2017年6月-2019年5月收治腹泻患儿1396例,记录年龄和大便性状,并对粪便进行免疫层析金标记技术快速检测,查看粪便中是否有轮状病毒抗原。结果:1396例患儿中,6个月~2岁组轮状病毒抗原阳性率高于6个月以下组及2~6岁组。蛋花汤样便和稀水样便的出现率高于其他大便性状,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:临床对腹泻患儿进行检查时,可将大便是否呈蛋花样或稀水样便作为是否进行轮状病毒检测的判断标准,而患儿年龄可作为诊断的辅助标准。

表面增强拉曼光谱应用于标记免疫多组分检测

作为一种新型的免疫检测方法,表面增强拉曼光谱(SERS)技术被应用于标记免疫多组分检测.以多种不同的标记分子(苯硫酚,联吡啶类分子,氰基吡啶类分子)分别标记多种不同免疫金溶胶,通过抗体抗原之间所具有的特异吸附性,进一步组装"固相抗体-待测抗原-标记免疫金溶胶"多组分三明治复合体系.利用表面增强拉曼光谱谱峰较窄,具有较强的分辨率及高灵敏度的特点,对多种标记分子特征谱峰进行分析判断,从而识别所加入的多种抗原,实现SERS标记免疫多组分同时检测的目的,并对其中氰基吡啶类分子的吸附进行了探讨.

血样保存温度及时间对他克莫司血清药物浓度监测结果的影响

目的:研究血液样本在不同保存温度及放置下对他克莫司血清药物浓度监测结果的影响。方法:选取80名受检对象(均为肾移植术后患者),每人采集6ml静脉血,将每份样本按照不同保存温度分成2组(分别放在冷藏4℃和室温20℃),采用均相酶标记放大免疫检测技术(EMIT)测定保存0h、24h、48h的他克莫司血清药物浓度,将不同温度组中24h与0h、48h与0h的血药浓度结果差值进行t检验,观察血样在不同保存温度,血药浓度测定结果的变化有无显著性差异。结果:血液样本的保存温度对EMIT法的监测结果有显著影响,并且随放置时间的延长出现明显变化。结论:血清药物浓度监测结果受保存温度和放置时间等因素的影响。

ELISA法检测HBV标志物的影响因素探讨

ELISA法是目前应用最广泛的免疫标记检测方法,特别是对肝炎病毒的检测,但由于ELISA自身存在的缺陷和某些人为因素都可造成实验性漏诊的发生。该文着重讨论ELISA法检测过程中几种因素对结果的影响。