植物叶片中Rubisco含量的免疫沉淀法测定

Rubisco为光合生物中的关键性酶,对光合作用起重要的调节作用,Rubisco又是植物中重要的氮源贮藏物质,因而Ru bisco的定量测定十分重要。以扬麦为实验材料,提取、纯化Rubisco,再以纯化的Rubisco为抗原制备Rubisco抗体,利用所得抗体采用免疫沉淀技术测定了不同植物中的Rubisco含量,为Rubisco的准确定量测定提供了较简便、快速的方法。

免疫沉淀法测定血清乳酸脱氢酶同工酶1对急性心肌梗塞的诊断

用自行开发的免疫沉淀法和经典的电泳法测定乳酸脱氢酶（LDH）同工酶，比较它们对25例急性心肌梗塞（AMI）及24例心绞痛诊断价值，证实免疫沉淀法测得的LDH1和LDH的比值（LDH1／LDH）是所有指标中最好的一个，AMI阳性率为100％，假阳性率为4．1％，且100％阳性率持续16小时。与其它易引起总LDH增高的4种疾病共42例进行比较，也证实本法LDH1／LDH（％）优于电泳法的LDH1／LDH2指标。免疫法测定LDH1具有特异、灵敏、定量且操作简单，可适应急诊测定等特点，便于推广，有助于提高AMI诊断水平。

免疫沉淀法测定乳酸脱氢酶同工酶1的研究

应用免疫沉淀法测定了乳酸脱氢酶同工酶１（ＬＤ１）．血清与抗血清用量为１０：１，加入抗血清５ｍｉｎ后再加入与血清量相等的饱和硫酸铵溶液．离心后测定上清液中的ＬＤ．总酶活性在６１８Ｕ／Ｌ内线性关系良好．二份标本批内精度ＣＶ值分别为３．７６％和４．７０％，批间ＣＶ值为７．００％，免疫沉淀法与电泳法高度相关（ｎ＝２２，ｒ＝０．９７６）．７２例正常人ＬＤ参考值为１０２．３１±１６．４Ｕ／Ｌ，ＬＤ１为２３．６５±４．３９Ｕ／Ｌ，ＬＤ１／ＬＤ为２３．１２±３．８５％．免疫沉淀法的优点是特异性高，操作简单，可用于自动生化分析仪．精确度高，线性关系好，测定范围宽，是测定ＬＤ１的理想方法．

免疫沉淀法用于A群流脑多糖菌苗的鉴别试验

本文将免疫沉淀法——免疫双扩散及对流免疫电泳法用于Ａ群流脑多糖菌苗的鉴别试验。并对其检测Ａ群流脑多糖菌苗的特异性及敏感性与传统采用的间接血凝抑制试验法进行了比较。试验结果表明，免疫沉淀法准确、特异性好、操作简便、经济。完全符合ＷＨＯ规程及中国规程中对《Ａ群脑膜炎球菌多糖菌苗制造及检定规程》鉴别试验的要求。因此可望替代现行的间接血凝抑制试验。

免疫沉淀法分离血清APO-B在慢性丙型肝炎与脂代谢研究中的应用

目的：为研究西安地区慢性丙型肝炎（HCV）感染与脂代谢关系而探讨脂质简便分离技术的可行性。方法：以羊抗人APO-B抗血清沉淀并分离HCV抗体阳性者血清APO-B,再以PCR技术进行扩增检测APO-B中HCV-RNA,并作血清HCV-RNA检测及HCV抗体阴性组对照。结果：在HCV抗体阳性者血清APO-B实验组中,检出了HCV-RNA,且拷贝数占血清中HCV-RNA的较大比率（4.74%～27%）,而各对照组中没有HCV-RNA表达。结论：免疫沉淀法分离血清APO-B的实验方法是一项传统的成熟技术,操作方便稳定可靠,实验结果进一步支持和证实了HCV与LDL结合的密切关系。

免疫沉淀法测定血清LDL—VLDL—GGT活性及在肝癌诊断中的应用

目的：建立免疫沉淀法测定血清LDL-VLDL-GGT活性并观察其在肝癌鉴别诊断中的价值。方法：以ApoB抗体作为沉淀剂，沉淀血清中与LDL及VLDL结合的GGT并测定其活性，测定65例肝癌，53例肝硬化，32例慢性肝炎及75例正常人结果，并进行统计分析。结果：ApoB抗体能很好地沉淀各种样品中LDL和VLDL，该方法批内精密度为3.56％-8.21％，批间精密度为5.45％-9.77％。LDL-VLDL-GGT活性在0-58U/L范围内线性良好。以10U/L为cut off值，则其对肝癌的诊断敏感性可达86.15％，肝癌与肝硬化和慢性肝炎鉴别诊断的特异性分别为67.92％和81.25％。结论：本法检测血清LDL-VLDL-GGT活性对鉴别肝癌与其它肝病具有重要意义。

CK-MB免疫抑制法和免疫沉淀法的比较

CK-MB的测定已广泛用于心肌损伤的诊断,目前实验室常用的测定方法多为免疫抑制法和免疫沉淀法。免疫抑制法检测CK-MB的活性浓度(U/L),因其操作简单,可在生化仪上检测而得到广泛应用。但有时由于非典型CK成份存在会导致测定CK-MB时出现错误的结果。近几年随着全自动免疫分析仪发展,免疫沉淀法测定CK-MB得到广泛普及,它检测其定量浓度,不受非典型CK成分影响,能更好地反映心肌损伤的程度。本文收集一组标本用两种方法检测并比较分析两者的优缺点及临床应用价值。

一种简便的染色质免疫沉淀法的建立

染色质结构和基因表达调节是当前国际前沿研究的热点 .染色质免疫沉淀法是研究染色质结构的首选方法 ,它不仅可用来研究体内反式因子与DNA的相互作用 ,也可以用来研究组蛋白修饰与基因表达的关系 .综合国外相关文献 ,建立了一种简便的染色质免疫沉淀法 ,并通过对诱导前后的MEL细胞中 β 珠蛋白基因簇组蛋白H3乙酰化的研究 ,证实了其可操作性 .结果表明 :高敏位点HS2和活跃基因 βmaj的启动子区域存在较高的组蛋白乙酰化水平 ,且诱导前后变化显著 ,而不活跃基因Ey的启动子区域则几乎检测不到组蛋白的乙酰化 ,且诱导前后无明显变化 .

免疫沉淀法与质谱联用检测RHD蛋白序列方法学的建立

目的建立人类红细胞RHD蛋白序列分析的方法,为检测RhD血型基因在红细胞膜上抗原量的表达奠定基础。方法随机选取10例无偿献血者的抗凝血5 mL,均为已知RhD阳性,对标本中的Rh血型抗原蛋白进行免疫沉淀。采用蛋白酶解法从红细胞膜中提取RH蛋白并定量。经蛋白酶切割后,利用LC-MS质谱平台对Rh蛋白序列进行鉴定。结果建立了检测RHD蛋白序列的方法,制定出适合检测RHD蛋白的标准曲线,得到10例样本的RHD蛋白浓度,鉴定到的RHD目标蛋白序列与Blast平台检索到的RHD蛋白片段序列吻合度达100%,获得红细胞膜RHD蛋白肽段二级图谱。结论免疫沉淀法与质谱联用可以鉴定红细胞RHD蛋白的氨基酸序列,为检测RhD抗原在红细胞上的表达量奠定基础,为精确鉴定RhD血型提供可行的方法,具有广泛的应用价值。

应用麻风和结核患者血清以免疫沉淀法鉴定麻风菌抗原

用抗麻风菌的鼠单克隆抗体技术,能识别蛋白或多糖抗原上的麻风菌特异的或有交叉反应的表位。作者曾用一套单抗,采用固相免疫沉淀法识别麻风菌的4个蛋白抗原（分子量为12K,18K,35K和70K）。现用同样的抗原制剂和方法,研究了麻风和结核患者的抗体。自犰狳提取人麻风菌和牛分枝菌,超声粉碎,126I标记,与血清和金葡菌CowanA株共同孵育;然后洗涤沉淀,

免疫沉淀法测定血清中与两种脂蛋白结合的γ-谷氨酰基转移酶活性及其诊断肝癌的价值

目的 建立免疫沉淀法测定血清中与低密度脂蛋白及极低密度脂蛋白结合的γ 谷氨酰基转移酶活性 (LDL VLDL GGT) ,并观察其在肝癌鉴别诊断中的价值。方法 以抗载脂蛋白B抗体为沉淀剂 ,沉淀血清中LDL VLDL GGT ,测定其活性 ,并对 65例肝癌、53例肝硬化、3 2例慢性肝炎病人及 75名正常人进行检测分析。结果 抗载脂蛋白B抗体能很好地沉淀血清样品中的LDL和VLDL ,该方法批内精密度CV值为 3 6%～ 8 2 % ,批间精密度CV值为 5 5%～ 9 8%。在 0～ 587U/L范围内线性良好。以 10U/L为临界值 ,其对肝癌的诊断敏感性达 86 2 % ,肝癌与肝硬化及肝癌与慢性肝炎鉴别诊断的特异性分别为 67 9%和 81 3 %。结论 本法检测血清LDL VLDL

肿瘤细胞表面抗原的单克隆抗体-免疫沉淀筛选法

目的筛选新的肿瘤特异性抗原,为探索新的肿瘤诊断标志物和肿瘤疫苗奠定基础。方法将人宫颈癌细胞系Hela细胞免疫BALB/c小鼠,制备杂交瘤,应用杂交瘤培养上清对人结肠癌细胞系Colo205、人Burkitt淋巴瘤细胞系Raji等细胞进行红细胞花环形成实验以筛选阳性杂交瘤。应用Colo205、Raji、人肺癌细胞系PLA801、人胃癌细胞系7901、人T细胞白血病细胞系Jurkat、小鼠骨髓瘤细胞系SP2/0等肿瘤细胞系、胚胎细胞系人胚肾上皮细胞系293T、人脐静脉内皮细胞系ECV304和健康人外周血单个核细胞(PBMC)等对所筛选的单克隆抗体进行活细胞免疫荧光染色和流式细胞仪鉴定单克隆抗体对多种细胞系膜表面天然抗原的识别情况,同时应用免疫沉淀法和Western blotting检测所筛单克隆抗体对细胞膜抗原的识别。结果采用红细胞花环形成实验从制备的抗体中成功筛选出3株单克隆抗体,流式分析显示其可同时识别Hela、293T、ECV304、Raji和Colo205细胞,但却不能识别Jur-kat、PLA801、7901、SP2/0细胞以及静止或活化的人PBMC。Western blotting证实这3株抗体可识别表达于Hela、Raji细胞膜的分子量约为47kD的膜蛋白。结论成功地制备了3株可识别肿瘤抗原候选分子的mAb,为筛选和鉴定肿瘤特异性抗原提供了有力手段。

免疫沉淀法分离纯化感染细胞中的甲肝病毒RNA

本研究采用抗血清（多抗血清）沉淀甲肝病毒，并用盐酸胍酸性酚，氯仿一步法分离纯化病毒ＲＮＡ．此方法能排除非病毒ＲＮＡ的污染，操作简单，要求条件较低。

免疫沉淀分离外泌体对PC12细胞上清中α-syn含量的影响

目的探讨采用免疫沉淀方法分离PC12多巴胺能细胞上清中外泌体对细胞上清中α-突触核蛋白(α-syn)含量的影响。方法利用多西环素诱导PC12细胞高表达α-syn,培养24 h后收集细胞上清液,采用免疫沉淀方法进行外泌体的分离纯化,采用酶联免疫吸附测定方法测定外泌体分离前后细胞上清中α-syn的含量。结果采用免疫沉淀方法可以分离出细胞上清中的外泌体,分离出的外泌体表达特异性标记物alix和CD63。外泌体分离后,上清中α-syn的含量从(2999.0±193.0)ng/L下降为(2276.0±81.8)ng/L,降低了(723.0±111.2)ng/L(t=4.580,P<0.05)。结论免疫沉淀分离外泌体能够降低PC12细胞上清中α-syn的水平。

免疫沉淀法检测RNPs的RNA组分及其应用

本文用免疫沉淀法检测各种RNPs的RNA组分,发现各种抗RNPs抗体所沉淀的RNAs是具有特征性的,抗U_1RNP抗体沉淀出U_1RNA,抗Sm抗体沉淀出U_2RNA、U_1RNA、U_4RNA、U_5RNA和U_6RNA,抗SSA抗体沉淀出了Y_1-Y_5RNAs,抗SSB抗体沉淀出Y_1-Y_5RNAs、La4.5RNA和7-2RNA,抗JO-1抗体沉淀出tRNA^(His)。因而根据待测血清所沉淀的RNAs可判断血清中各种抗BNPs抗体,结果显示,免疫沉淀法较免疫双扩散法敏感。

免疫共沉淀联合质谱分析筛选与HCMV IE86相互作用蛋白

目的利用免疫共沉淀联合质谱分析的方法,在人胚肺成纤维细胞系MRC-5细胞和胶质瘤细胞系U87MG细胞中,筛选与人巨细胞病毒(HCMV)即刻早期蛋白IE86相互作用的病毒蛋白和剪接相关蛋白。方法通过HCMV感染细胞使IE86蛋白在细胞中表达,采用免疫共沉淀的方法富集两种细胞系中的IE86结合蛋白,SDS-PAGE凝胶电泳分离免疫共沉淀复合物,从胶中切取IE86结合蛋白条带,胶内酶解后进行液相色谱-质谱联用分析及数据库检索,筛选与IE86相互作用蛋白。结果利用免疫共沉淀联合质谱分析,在MRC-5细胞中,共鉴定到与IE86相互作用的病毒编码的蛋白质17种,宿主细胞编码的剪接相关蛋白25种;在U87MG细胞中,共鉴定到病毒编码的蛋白质4种,宿主细胞编码的剪接相关蛋白8种。结论与胶质瘤细胞系U87MG相比,人胚肺成纤维细胞MRC-5中有更多种病毒蛋白及剪接相关蛋白与IE86有相互作用,协同参与IE86的剪接及病毒早、晚期蛋白的表达,这为进一步研究HCMV在不同细胞环境中的复制机制提供了基础。

传染性法氏囊病病毒dsRNA核酸提取

用免疫沉淀法从感染鸡法氏囊组织中分离传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ），用差速离心法从感染的鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）中分离ＩＢＤＶ，再从分离的ＩＢＤＶ中抽提ｄｓＲＮＡ。在ｄｓＲＮＡ提取物受ＤＮＡ降解产物影响时，可用ＤＮａｓｅⅠ消化去除，核酸再经琼脂糖凝胶电泳纯化。

SAPK/JNK活性的非放射性测定方法与初步应用

目的 建立SAPK/JNK活性的非放射性测定方法。方法 采用“免疫沉淀法”提取SAPK ,根据SAPK可以使底物c Jun(Ser6 3和Ser73)磷酸化的原理 ,以N 末端融合有c Jun的谷胱甘肽Seharosebeads从细胞裂解液中“亲合分离”SAPK ;然后进行体外磷酸化 ;以c Jun的磷酸化特异性抗体进行蛋白质免疫印迹杂交 ;最后以“化学发光法”测定磷酸化底物c Jun来反映细胞内SAPK的活性。结果 以 2 5～ 10 0 μmol/LCdCl2处理豚鼠肾上腺皮质细胞 2小时 ,细胞内SAPK活性随染毒剂量增加而轻度增加。结论 该法测定细胞内SAPK活性 ,方法灵敏、特异性强。

免疫共沉淀联合质谱法筛选和鉴定TS-CBP86-IV相互作用蛋白

目的：利用免疫共沉淀联合质谱分析方法，分别从人精子总蛋白和重组BL21细胞总蛋白中筛选和鉴定与TS-CBP86-IV相互作用的蛋白质。方法用克隆技术得到TS-CBP86-IV cDNA编码基因，构建原核表达载体，导入大肠杆菌BL21中诱导表达纯化重组蛋白；另外收集人精子细胞，提取总蛋白，用特异抗体通过免疫共沉淀法分离出TS-CBP86-IV蛋白复合体，再用质谱鉴定可能与其相互作用的蛋白质。结果利用免疫共沉淀联合质谱分析筛选到16个与TS-CBP86相互作用的候选蛋白质，数据库检索发现部分蛋白具有相同功能注释，参与精子运动调控。结论免疫共沉淀联合质谱分析方法成功筛选和鉴定出TS-CBP86-IV相互作用蛋白质，为进一步研究TS-CBP86-IV的功能奠定了良好的基础。