单采血小板不同储存时间免疫活化状态及个体差异分析

目的分析血小板保存时间对血小板活化的影响和献血者个体差异与采集后血小板活化状态的关系,为采供血机构血小板采集工作及临床个性化输注提供参考。方法收集2023年67例捐献者的单采血小板,随机分为保存1、2、3、4、7天,共5组。采用流式细胞仪检测各组血小板活化指标CD62p,进行统计学分析。收集各捐献者一般体检数据、捐献前血液检测数据、和采集参数数据,分析其与血小板活化的关系。结果储存1、2、3、4、7天的血小板CD62p表达率分别为59.13±20.96%、68.26±11.92%、65.50±12.19%、71.53±10.02%、83.16±6.829%。单因素方差分析显示不同存储时长的各组单采血小板活化存在显著差异()。各组两两比较,储存7天的血小板活化明显高于储存1、2、3天的血小板。其他各组无明显差异(P<0.05)。随储存时间的延长,血小板活化率呈增长趋势。Spearman双变量分析显示,采集后血小板的活化率与采集过程中的循环血量和抗凝剂用量呈负相关(P<0.05),与其他因素无明显相关性(P>0.05)。结论单采血小板在保存3天时间内,活化无明显变化,之后出现活化增加的特点。单采过程中的采集参数可影响采集后血小板的活化率。一方面,可依据血小板储存过程中的活化特点选择相应产品应用临床;另一方面,可通过控制采集参数,保证血小板产品质量。

miR-146a调控血小板免疫活化功能

目的探讨miR-146a对血小板免疫活化功能的影响。方法流式细胞术检测冠心病(n=31)及健康成年人(n=35)全血中血小板PAC-1、CD62-P阳性率,q-PCR及光比浊法分别检测血浆中miR-146a及血小板聚集率;培养K562细胞,佛波酯(PMA)诱导分化为巨核细胞后,分别转染miR-146a mimics、inhibitor及其阴性对照,Western blot检测转染后细胞中TLR-4、PAC-1及CD62-P表达水平。结果冠心病患者miR-146a、血小板聚集率及PAC-1、CD62-P阳性率较对照组升高(P<0.05);转染miR-146a mimics后,TLR-4、PAC-1和CD62-P表达水平升高(P<0.05)。结论miR-146a可能依赖血小板TLR-4信号通路,介导血小板免疫活化进而促进血小板聚集,加速血栓形成。

中国儿童与成人艾滋病患者的免疫活化水平比较

目的比较中国儿童及成人艾滋病(AIDS)患者的免疫活化水平。方法以103例儿童AIDS患者、38例成人AIDS患者、88名健康儿童和72名健康成人为研究对象,取抗凝血进行流式细胞计数检测CD4+T细胞数,荧光定量RT-PCR测定血清HIV-RNA滴度,采用ELISA法检测血清中Th1/Th2免疫因子(IL-10、IL-16、IL-18)、趋化因子[包括调节活化正常T细胞表达与分泌的趋化因子(RANTES)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、基质细胞衍生因子1(SDF-1)]及巨噬细胞刺激蛋白(MSP)的水平,并以β2微球蛋白(β2-MG)和可溶性Fas(sFas)的表达水平作为机体免疫活化指标。结果儿童AIDS患者组的CD4+T细胞数显著低于儿童正常对照组(P<0.01),各细胞因子水平较儿童正常对照组显著升高(P均<0.01)。成人AIDS患者组的CD4+T细胞数显著低于成人正常对照组(P<0.01),除MSP水平显著低于成人对照组(P<0.01)外,其余各细胞因子均显著高于成人对照组(P<0.01)。儿童AIDS患者组各因子水平除SDF-1α和β2-MG与成人AIDS患者组差异无显著性(P>0.05)外,其余均显著高于成人AIDS患者组(P<0.01)。结论儿童和成人AIDS患者的免疫系统均表现为明显的异常活化,儿童患者的免疫活化水平高于成人患者。

淋巴细胞免疫活化基因表达与移植肾排斥反应的关系

目的：分析肾移植受者外周血淋巴细胞免疫活化基因表达，与移植肾排斥反应之间的相互关系。方法：采用ＲＴＰＣＲ技术，检测６１例肾移植受者外周血淋巴细胞ＩＬ－２、ＩＦＮγ、ＦａｓＬ和颗粒酶Ｂ４种免疫活化基因表达状况，并结合临床资料全面分析。结果：发现ＩＬ２、ＩＦＮγ、ＦａｓＬ和颗粒酶Ｂ的ｍＲＮＡ表达阳性率分别为４１％、５４１％、６０７％、６７２％。以４种基因同时表达作为诊断标准，诊断敏感性和特异性分别为７８％和８３％；以４种基因同时表达３种或３种以上作为诊断标准，其诊断敏感性和特异性分别为９３％和７５％。结论：这一非侵入性检查方法可以为排斥反应的监测和诊断提供客观依据。

免疫活化血小板对人脐静脉内皮细胞COX-2及PPAR-α表达与活性的影响及LDL的作用

目的:观察免疫活化血小板对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)环氧合酶2(COX-2)及过氧化物酶体增殖物活化受体α(PPAR-α)表达及活性的影响,并探讨低密度脂蛋白(LDL)对其作用。方法:利用腺苷二磷酸(ADP)刺激血小板免疫活化,然后利用免疫活化血小板与HUVECs加或不加LDL共孵育,利用实时定量RT-PCR、Westernblotting分别检测HUVECsCOX-2及PPAR-αmRNA及其蛋白的表达,ELISA法检测PGE2浓度反映COX-2活性、核因子活性检测试剂盒检测PPAR-α活性。结果:血小板活化组COX-2及PPAR-αmRNA表达量较血小板对照组均有较明显升高(1.49±0.27vs0.68±0.21,1.45±0.21vs1.17±0.16,均P<0.01);血小板活化组COX-2及PPAR-α蛋白表达量较血小板对照组亦有较明显升高(1.600±0.145vs0.700±0.073,1.630±0.143vs0.960±0.073,均P<0.01),血小板活化组孵育液中PGE2浓度较血小板对照组明显升高[(42.46±5.57)ng/Lvs(23.73±2.53)ng/L,P<0.01],但血小板活化组PPAR-α活性较血小板对照组无明显变化;LDL本身无明显增加HUVECsCOX-2及PPAR-α的表达及活性,但其能增加免疫活化血小板的这一作用。结论:免疫活化血小板显著促进HUVECsCOX-2表达及活性增加,亦能显著促进HUVECsPPAR-α表达,但并不改变PPAR-α活性;一般浓度的LDL并不对HUVECsCOX-2、PPAR-α的表达及活性产生影响,但能促进免疫活化血小板对内皮细胞的这一作用。

HIV-1感染者免疫活化对宿主限制因子SAMHD1表达和HIV-1 DNA水平的影响

目的研究HIV-1感染者CD4;T细胞免疫活化与外周血宿主限制因子SAMHD1表达水平和HIV-1 DNA的关系。方法选取未接受抗病毒治疗的HIV-1感染者57例,接受抗病毒治疗且病毒载量低于检测限的HIV-1感染者62例,健康对照48例。分离外周血单个核细胞(PBMC)和CD4;T细胞,提取总RNA,RT-PCR法检测SAMHD1 mRNA表达水平及血浆HIV-1 RNA水平,流式细胞术检测CD4;T和CD8;T细胞数量及CD4;T细胞免疫活化水平,ELISA检测血浆干扰素α水平,PCR法检测外周血HIV-1 DNA水平。结果未接受抗病毒治疗的HIV-1感染者CD4;T细胞免疫活化水平最高,抗病毒治疗组显著降低,但仍高于健康对照组(P <0.01)。未接受抗病毒治疗组外周血HIV-1 DNA水平显著高于抗病毒治疗组(P <0.01)。HIV-1感染者PBMCs中SAMHD1 mRNA水平显著高于健康对照组(P <0.01),而CD4;T细胞中SAMHD1 mRNA表达水平显著低于健康对照组(P <0.01)。CD4;T细胞SAMHD1 mRNA表达水平与免疫活化呈负相关,但与HIV-1 DNA水平无相关性。结论 HIV-1感染者CD4;T细胞SAMHD1表达水平降低,与免疫活化水平负相关,但与HIV-1 DNA水平无直接相关。

单采血小板血浆低密度脂蛋白在保存期间对血小板免疫活化的影响

目的:探讨单采血小板血浆低密度脂蛋白(low-density lipoprotein,LDL)升高是否对血小板免疫活化产生影响。方法:选取符合国家献血标准的单采血小板献血员血小板标本35例,于血小板保存箱(22℃±2℃)振摇保存,其中LDL正常组(LDL<3.4 mmol/L)30例,LDL升高组(LDL≥3.4 mmol/L)5例,流式细胞术检测血小板表面活化指标CD63、CD36、CD40以及CD62p表达水平,比较不同LDL水平对单采血小板免疫活化的影响。结果:随着保存时间的延长,血小板CD63、CD36、CD40以及CD62p表达水平无显著改变(P>0.05),不同保存时间LDL升高组与LDL正常组比较,CD63、CD36、CD40以及CD62p表达水平的差异无统计学意义(P>0.05)。保存第2、3、4、5天的血小板经室温不同静置时间,LDL升高组与LDL正常组比较,CD63、CD36、CD40以及CD62p表达水平的差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:健康献血者单采血小板血浆LDL水平对血小板保存期间的免疫活化无显著影响,LDL水平较高的单采血小板不会激发血小板免疫活化,从而不影响临床输注效果。

调节性T细胞稳态与慢性HIV-1感染引起的异常免疫活化研究

目的本研究旨在探讨CD4+Foxp3+调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)稳态与慢性HIV-1感染者疾病进程及免疫活化的相关性。方法选择50例慢性HIV-1感染者,包括AIDS患者15例(AIDS组)、典型进展(typical progressor,TP)患者25例(TP组)、长期非进展(long-termnon-progressor,LTNP)患者10例(LTNP组),另选健康对照者(healthycontrol,HC)15例(HC组)。用流式细胞仪检测Treg的增殖标志Ki-67和凋亡标志半胱氨酰天冬氨酸蛋白酶-3,同时检测Treg的活化标志CD38和人白细胞抗原-DR。结果在HC组和慢性HIV-1感染者中,Treg的增殖和凋亡速率均显著高于CD4+Foxp3-非调节性T细胞,这种稳态的改变在TP组和AIDS组中更为明显。进一步研究发现Treg增殖和凋亡与其活化程度呈正相关。结论慢性HIV-1感染导致Treg的过度活化,进而导致Treg稳态的改变。Treg稳态可以作为预测HIV/AIDS患者疾病进展的一项指标。

HIV-1慢性感染者CD8^+Tscm异常免疫活化对T细胞耗竭的影响

目的探讨HIV-1慢性感染者CD8^+干细胞样记忆性T细胞(stem memory T cell,Tscm)免疫活化水平的变化特点及其活化对CD8^+T细胞功能耗竭的影响。方法选取24例未经治疗的HIV-1慢性期感染者和41名健康对照者,采用流式细胞术分别检测健康对照者和HIV-1感染者CD8^+Tscm的比例、CD8^+Tscm的免疫活化水平、CD8^+T细胞表面抑制性分子(CD160、PD-1、TIGIT、TIM-3和LAG-3)表达水平及CD8^+T细胞功能(分泌细胞因子IL-2、IFN-γ和TNF-α的能力);分析CD8^+Tscm的免疫活化水平与CD8^+T细胞抑制性分子表达及CD8^+T细胞功能的相关性。结果与健康对照者相比,HIV-1慢性期感染者CD8^+Tscm的比例显著下降,CD8^+Tscm免疫活化水平(CD38^+HLA-DR^+CD8^+Tscm比例)显著升高。HIV-1慢性期感染者CD8^+Tscm免疫活化水平与CD8^+T细胞分泌IL-2和TNF-α水平呈负相关。HIV-1慢性感染引起CD8^+T细胞抑制性分子(CD160、PD-1、TIGIT和LAG-3)上调,但活化的CD8^+Tscm仅与CD8^+T细胞抑制性分子TIGIT表达水平呈正相关。CD8^+T细胞抑制性分子TIGIT表达水平与CD8^+T细胞分泌IL-2和TNF-α水平呈负相关。结论 HIV-1慢性感染引起CD8^+Tscm的异常免疫活化,活化的CD8^+Tscm通过上调CD8^+T细胞抑制性分子TIGIT抑制CD8^+T细胞功能。

肠道中发现免疫活化的细胞

据美国BIOCOMPARE科技新闻网（2006／5／29）报道，明尼苏达大学的研究人员在小鼠的肠道系统中发现一组细胞，经证实它们可以活化对抗感染的T细胞，这项研究发表在2006年5月的《免疫性》（Immunity）中。

抗PD-L1单抗促免疫细胞活化参与动脉粥样硬化

目的研究抗PD-L1单抗对高脂饮食诱导的ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)发生发展的影响。方法将32只ApoE^(-/-)小鼠随机分为正常组、高脂组、正常+抗PD-L1单抗组和高脂+抗PD-L1单抗组,通过高胆固醇饲料喂养建立AS模型。实验动物饲养10周后,分离各组实验动物血管(主动脉根部至胸主动脉),进行油红O染色。酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中总胆固醇(CHO)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白(HDL-c)、低密度脂蛋白(LDL-c)和炎症因子(IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-13、IL-1β)水平。流式细胞计数检测淋巴细胞(CD3^(+)T、CD4^(+)T和CD8^(+)T)、NK和NKT细胞比例。结果与高脂组相比,给予抗PD-L1单抗后促血管壁脂质累计并上调血清CHO、TG和HDL-c含量,但是对LDL-c无影响。高脂饲养条件下给予抗PD-L1单抗促CD3+、CD4+和CD8+T细胞活化。除此之外,高脂饲养条件下给予抗PD-L1单抗还具有活化NK和NKT细胞的作用。ELISA检测发现,高脂饲养条件下给予抗PD-L1单抗上调血清中炎症因子含量(IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-13、IL-1β)。结论高脂饲养条件下给予抗PD-L1单抗促AS发生发展的机制与免疫活化有关。

T细胞活化免疫球蛋白抑制V型结构域在幼年特发性关节炎中作用的初步研究

目的分析T细胞活化免疫球蛋白抑制V型结构域(V-domain Ig suppressor of T cell activation,VISTA)在幼年特发性关节炎(juvenile idiopathic arthritis,JIA)患儿外周血的表达情况,探讨其在发病中的作用。方法前瞻性收集不同亚型JIA患儿(47例)及健康儿童(10例)的外周血,利用流式细胞术检测CD14+单核细胞、CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞上VISTA、干扰素-γ(interfern-γ,IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的表达情况。结果VISTA在JIA患儿中的表达水平比健康儿童低(P<0.05);不同亚型JIA患儿VISTA表达差异有统计学意义,以全身型表达水平最低(P<0.05);不同免疫细胞表达VISTA差异有统计学意义,单核细胞表面VISTA表达水平更高(P<0.05)。相关性分析发现CD4+T细胞上VISTA与IFN-γ(r=-0.436,P<0.05)、TNF-α(r=-0.382,P<0.05)表达呈负相关,CD8+T细胞上VISTA与IFN-γ(r=-0.348,P<0.05)、TNF-α(r=-0.487,P<0.05)表达呈负相关;CD14+单核细胞上VISTA与IFN-γ(r=-0.582,P<0.05)、TNF-α(r=-0.603,P<0.05)表达呈负相关。结论VISTA表达不足可能与JIA发病相关,增强VISTA的免疫调节作用可能是未来治疗JIA的途径之一。

HSP65-MUC1/HSP65抗体免疫复合物对人树突状细胞的活化作用

目的 :探讨免疫复合物能否诱导树突状细胞的活化与成熟。方法 :用免疫复合物刺激来自人外周血经细胞因子 IL - 4和 GM- CSF诱导的未成熟的树突状细胞 ,观察免疫复合物对未成熟树突状细胞的活化与成熟的影响。结果 :HSP6 5 - MUC1/ HSP6 5免疫复合物与 HSP6 5 - MU C1抗原或 HSP6 5抗体相比较 ,能够显著地活化树突状细胞 ,使其表面的协同刺激分子 CD86的表达显著上调 ,为激活细胞毒性 T淋巴细胞提供第二信号 ,这一结果说明免疫复合物具有交叉递呈的作用 ;同时 ,加入免疫复合物的树突状细胞培养上清中 IL - 6和 TNFα分泌量明显增加。结论 :免疫复合物能够诱导树突状细胞的活化与成熟 ,免疫复合物具有交叉递呈的作用。

肿瘤免疫活化剂沙培林的研究

本文应用沙培林诱导人外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）对胃癌（ＳＧＣ－７９０）、肺癌（ＳＰＣＡ－１）以及白血病细胞（ＨＬ－６０）能进行有效的杀伤。个体不同，ＰＢＭＣ对沙培林的应答不同，如对胃癌有的Ｓ．Ｉ、值达４．８６，有的无应答。在实验浓度下，对肝癌（７７２１）的杀伤作用较差。将小鼠肝癌（ＨＡＣ）细胞接种于小鼠腹腔，经腹腔连续给药后于不同时间测定小鼠脾及腹水单个核细胞的杀伤活性。结果表明治疗组的杀伤活性明显升高，并能非特异地提高对Ｌ９２９细胞的杀伤。腹腔接种ＨＡＣ经腹腔给药，单个核细胞杀伤ＨＡＣ的效应更强。上述结果表明，国产沙培林在体内能有效地激活单个核细胞。

基于PI的二线抗逆转录病毒治疗对HIV/AIDS患者异常免疫活化的影响

目的观察以非核苷类逆转录酶抑制剂(NNRTI)为基础的一线高效抗逆转录病毒治疗(HAART)失败的HIV/AIDS患者更换为以蛋白酶抑制剂(PI)为基础的二线HAART后对体内免疫活化的影响。方法收集以NNRTI为基础的一线HAART失败后的患者共30例,更换为以PI为基础的二线HAART方案,对患者进行0、12、24、36和48周的队列随访研究。检测患者血浆病毒载量和外周血CD4+T细胞计数,评价抗病毒治疗效果;进一步检测外周血CD8+T淋巴细胞免疫活化指标CD38、人类白细胞抗原DR(HLA-DR)的动态变化,评价以PI为基础的二线HAART方案对异常免疫活化的影响。结果患者接受以PI为基础的二线HAART后,血浆病毒复制得到有效抑制,CD4+T细胞计数增加;入组HIV/AIDS患者基线CD38+CD8+T细胞百分比高于正常,经过二线HAART后恢复正常;HLA-DR+CD8+T细胞百分比基线水平高于正常对照,治疗48周后无显著下降。结论以PI为基础的二线HAART方案具有强大的免疫重建功能,能够有效地抑制病毒复制,恢复CD4+T细胞计数水平,并可在一定程度上降低体内免疫活化水平,延缓疾病进展。

新型免疫检查点分子VISTA的研究进展

T细胞活化V结构域免疫球蛋白抑制因子(VISTA)是一种新型免疫检查点蛋白,具有与B7家族相似但独特的结构。VISTA在多种细胞中表达,包括髓系细胞和肿瘤细胞。在肿瘤中,VISTA可能通过调节髓系细胞和T细胞起到免疫抑制的作用。临床研究发现,VISTA在多种癌症中表达并与患者预后相关,可能是癌症治疗的潜在靶点,已有多种VISTA拮抗剂正在研发中。然而对VISTA分子机制和在免疫治疗中的确切作用仍需进一步研究。VISTA最新研究进展包括其与配体的相互作用以及其在肿瘤免疫治疗中的应用可能是免疫检查点抑制剂治疗实体肿瘤的新理论依据。

双氢青蒿素体外抑制免疫恢复不理想者T细胞免疫活化

目的阐明双氢青蒿素(DHA)对免疫恢复不理想者T细胞免疫活化、耗竭、增殖和分化的影响。方法入组免疫恢复不理想患者(n=17),分离外周血单个核细胞(PBMCs),体外用不同浓度DHA(1000μM、500μM、100μM和0μM)处理细胞,培养48 h后,流式细胞术检测T细胞免疫活化、耗竭、增殖和分化。结果与未处理组(DHA0μM)相比较,500μM和1000μM DHA处理后CD38-HLA-DR^(+)CD4^(+)T细胞和CD38^(+)HLA-DR^(+)CD8^(+)T细胞的比例降低(P<0.05)。此外,500μM DHA处理后,PD-1^(+)CD4^(+)T细胞和PD-1^(+)CD8^(+)T细胞的比例较未处理组降低(P<0.05)。不同浓度DHA处理后,Ki67^(+)PD-1^(+)CD4^(+)T细胞和Ki67^(+)PD-1^(+)CD8^(+)T细胞的比例较未处理组显著降低。然而,DHA处理并不影响CD4^(+)T细胞和CD8^(+)T细胞的分化。结论DHA在体外可抑制免疫恢复不理想者T细胞免疫活化、耗竭和增殖。

急性冠脉综合征患者多种免疫细胞超活化的特征研究

目的:心肌梗死发生过程常伴随宿主免疫细胞的激活和炎症反应的发生。目前尚不清楚心肌梗死发生、进展过程中哪些免疫细胞被激活并参与其中。本研究旨在探讨心肌梗死发生、进展过程中免疫细胞激活及其作用。方法:系统分析12例健康个体和55例心肌缺血患者,包括稳定性心绞痛患者(SA,n=13)、不稳定性心绞痛患者(UA,n=25)以及急性心肌梗死患者(AMI,n=17)外周静脉血CD3 T细胞、CD4 T细胞、CD8 T细胞、NK细胞、CD4+NKT细胞、CD4-NKT细胞、CD3-CD56+NK细胞以及B细胞亚群的频率及其活化标志CD38的表达情况。结果:研究发现,上述细胞亚群频率在各组之间无显著变化,但急性冠脉综合征患者(ACS,包括UA和AMI患者)外周CD8 T细胞、NKT细胞以及NK细胞表达CD38水平显著高于SA组患者及对照组,提示ACS患者多种免疫细胞被明显激活,可能参与了ACS的病理过程。结论:ACS患者体内多种免疫细胞激活,可能与疾病的进展和转归密切相关。也为发现新的可能预测ACS进展的免疫标志物提供了一定的依据。

趋化因子RANTES对人外周血单个核细胞的免疫活化作用

目的 探讨趋化因子RANTES刺激对人外周血单个核细胞 (PMNC)的免疫活化作用及其内在机制。方法 分离人外周血 ,应用不同终浓度的人重组RANTES(rhRANTES)以及抗CD3单克隆抗体 (抗CD3mAb)进行体外刺激 ,并对增殖反应显著者给予吡咯啉烷二甲基硫脲 (PDTC)或CTLA4Ig进行干预。采用3 H 胸腺嘧啶核苷掺入法检测PMNC增殖程度 ,流式细胞仪检测淋巴细胞表型的变化。结果 rhRANTES终浓度为 10 0ng/ml和 5 0 0 0ng/ml时 ,诱导PMNC增殖反应出现两次峰值 ;rhRANTES(10 0ng/ml)刺激产生的增殖反应显著高于抗CD3mAb(5 0ng/ml)的刺激 (P <0 .0 5 ) ,但两者无拮抗或协同作用 ;PDTC和CTLA4Ig对rhRANTES(10 0ng/ml)诱导的增殖反应均能产生抑制作用 ,并呈现剂量依赖性 ;rhRANTES刺激后 ,淋巴细胞CD2 5表达率显著增加 (P <0 .0 5 ) ,而人RANTES的受体CCR5表达率显著降低 (P <0 .0 5 ) ,CD2 8表达率及CD4 /CD8比值无明显改变(P >0 .0 5 )。结论 RANTES趋化信号具有不依赖于CD3信号的独特的诱导PMNC免疫活化的功能。