口蹄疫病毒免疫活性串联片段FB的表达及免疫原性测定(英文)

将口蹄疫病毒 (FMDV)免疫串联片段FB克隆至原核表达载体pBAD/TOPO中 ,经鉴定后得到重组质粒pBAD FB ,将此重组质粒转化到受体菌TOP10中 ,用诱导剂阿拉伯醛糖分别以不同的浓度进行诱导 ,并在不同诱导时间进行采样 ,经处理后做SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)、蛋白质印迹分析 .结果发现以终浓度为 0 0 0 2 %的阿拉伯醛糖进行诱导 ,4h后表达可达到高峰 ,其大小约为 2 6ku ,软件扫描结果显示 ,FB融合蛋白的表达量占细菌总蛋白的 2 8 9% ,能与抗FMDV抗体发生特异性反应 ,融合蛋白以包涵体和可溶形式存在 .将融合蛋白的可溶性组分用 5 0 %Ni NTA树脂过柱纯化并抽提融合蛋白的包涵体 ,经过洗涤后分别制成油乳剂疫苗 ,经皮下注射免疫豚鼠 ,用乳鼠中和试验测定豚鼠血清中和指数 ,并用口蹄疫病毒对豚鼠进行攻毒 .结果表明 ,用此融合蛋白的纯化产物和包涵体免疫豚鼠能诱导产生高滴度的中和抗体 ,对病毒的攻击提供 10 0

FMDV免疫活性串联片段FA的表达及免疫原性测定

将口蹄疫病毒免疫串联片段FA克隆至原核表达载体pBAD/TOPO中 ,经鉴定后得到重组质粒pBAD_FA ,将此重组质粒转化到受体菌TOP10中 ,用诱导剂阿拉伯醛糖分别以不同的浓度进行诱导 ,并在不同诱导时间进行采样 ,经处理后做SDS_PAGE、Westernblot分析。结果发现以终浓度为 0 0 0 2 %的阿拉伯醛糖进行诱导 ,4h后表达可达到高峰 ,其大小约为 2 3kD ,软件扫描结果显示 ,FB融合蛋白的表达量占细菌总蛋白的 2 9 3% ,能与抗FMDV抗体发生特异性反应 ,融合蛋白以包涵体和可溶形式存在。将融合蛋白的可溶性组分用 5 0 %Ni_NTA树脂过柱纯化并抽提融合蛋白的包涵体 ,经过洗涤后分别制成油乳剂疫苗 ,经皮下注射免疫豚鼠 ,用乳鼠中和试验测定豚鼠血清中和指数 ,并用口蹄疫病毒对豚鼠进行攻毒。结果表明 ,用此融合蛋白可溶部分的纯化产物和包涵体免疫豚鼠能诱导产生高滴度的中和抗体 ,对病毒的攻击分别提供 10 0 %和 75

以免疫活性串联片段FB为抗原检测FMDV抗体的间接ELISA方法

将口蹄疫病毒免疫串联片段FB克隆至原核表达载体pBAD/TOPO中,得到重组质粒pBAD-FB,将此重组质粒转化到受体菌TOP10中,以不同浓度的阿拉伯醛糖进行诱导,并在不同诱导时间进行采样,经处理后做SDS-PAGE、Western-blotting分析。结果发现以终浓度为0.02g/L的阿拉伯醛糖进行诱导,4h后表达量可达高峰,其大小约为26ku,扫描结果显示,FB融合蛋白的表达量占细菌总蛋白的28.9%,能与抗FMDV抗体发生特异性反应,融合蛋白以包涵体和可溶形式存在。将融合蛋白的可溶性组分用500g/LNi-NTA树脂过柱纯化后作为包被抗原,成功地建立了检测血清中FMD抗体的间接ELISA方法。融合蛋白的最佳包被浓度是40μg/mL;标准阳性血清的最适稀释倍数为1∶160;最佳封闭液为50g/L脱脂奶粉和PBS;最佳封闭时间为1h。用建立的ELISA方法对采集的118份样品进行检测,并与全病毒包被抗原ELISA、间接血凝诊断试剂盒和UBIVP1抗体检测ELISA试验盒的检测结果比较,证明所建立的方法具有良好的特异性、敏感性和可重复性。

FMDV免疫活性串联片段FB与T4噬菌体SOC基因的融合表达

将FM DV免疫活性串联片段FB的cDNA片段插入表达质粒pSOC的E coRⅠ位点,获得重组质粒pSOC-FB。用pSOC-FB转化E.coli BL 21(DE 3),获得表达FB蛋白的工程菌BL-SOC-FB。在1μg/m l IPTG诱导之下,BL-SOC-FB表达了融合蛋白SOC-FB,其分子量为19 ku。SDS-PAGE检测表明,融合蛋白SOC-FB的最大表达量为细菌总量的24.5%。W estern b lot分析表明,大肠杆菌表达的SOC-FB能与FM DV阳性血清发生特异性反应。