人C-反应蛋白磁微粒化学发光酶免疫测定法的建立

人C-反应蛋白(C-reactive protein,CRP)是炎症以及各种相关疾病如病毒感染、心血管疾病等诊断、治疗和预后的临床检测指标。为了建立一种快速、准确的CRP定量免疫测定方法,将表达纯化的重组CRP作为抗原免疫小鼠,获得了5株稳定分泌抗体的单克隆抗体细胞株,采用双抗体夹心酶联免疫吸附测定法(double antibody sandwich enzyme-linked immunosorbent assay,DAS-ELISA)初步鉴定筛选的抗人CRP单克隆抗体,并分别选择mAb 9D6和mAb 9G4作为捕获抗体与检测抗体,建立用于人CRP检测的化学发光酶免疫测定法(chemiluminescence enzyme immunoassay,CLEIA),最后通过测定分析临床血清CRP样本,评价CLEIA的性能。结果显示,基于9D6/9G4-AP单克隆抗体对的CLEIA测定范围为0.1767~500μg/L(可扩展至100 mg/L);所建立的CLEIA与医院采用的免疫散射比浊法(R^(2):0.9496,P<0.0001)表现出良好的相关性,且Bland-Altman分析中96.36%(106/110)的点在95%一致性界限范围内显示两种检测方法具有较好的一致性。结果初步表明,建立的分析方法在临床诊断中具有较好的应用前景。

肝癌患者血清GGT免疫测定法的建立及其在肝癌诊断中的应用

研究建立了肝癌特异GGT免疫测定法。结果阳性OD值≥0．267（—2S）；阴性OD值≤0．065（x＋2S）；肝癌病人血清OD值比正常人高4～11倍。批内及批间CV分别为4．85％和6．27％。初步应用结果显示，对原发性肝癌（PHC）诊断阳性率为86．79％；特异性为94．72％；对继发性肝癌（MHC）诊断阳性率为42．86％；早期诊断阳性率为57．14％。

滴金免疫测定法用于检测囊虫病患者循环抗原的研究

目的 建立一种敏感、快速、简便的囊虫病诊断方法。方法 应用两株抗猪囊尾蚴囊液抗原的单克隆抗体(McAb) ,一株滴于硝酸纤维素膜上 ,另一株与胶体金结合为探针 ,建立了检测囊虫病患者血清中循环抗原 (CA)的滴金免疫测定法 ,抗原、抗体通过渗滤在膜上进行反应 ,10min内即可用肉眼观察结果。对不同稀释度的猪囊尾蚴囊液抗原进行检测 ,确定本法的最低抗原检出量 (0 .4 5ng/ml)。将本法与ELISA作了比较。 结果 对 78例囊虫病患者血清进行检测 ,循环抗原阳性率为 87.18%。其中活动型脑囊虫病患者 5 2例 ,循环抗原阳性率为 98.0 8% ;非活动型脑囊虫病患者 2 0例 ,循环抗原阳性率为 6 5 .0 0 % ;单纯皮肌型囊虫病患者 6例 ,循环抗原阳性率为 6 6 .6 7%。 4 0份健康人血清仅有 1例 (2 .5 0 % )出现假阳性 ,与10例华支睾吸虫病患者血清、15例血吸虫病患者血清及 2 3例非囊虫病的脑部疾病患者血清均无交叉反应。该方法检出最低猪囊尾蚴囊液抗原量为 0 .4 5ng/ml。本法与ELISA的符合率为 98.19%。结论 DIGFA简便、快速 ,结果客观 ,对囊虫病特别是活动型脑囊虫病敏感性高 ,特异性强 ,值得进一步推广应用。

滴金免疫测定法在检测日本血吸虫抗体中的应用

滴金免疫测定法(DIGFA)是以胶体金作为标记物的快速斑点免疫结合试验,抗原、抗体通过渗滤在膜上进行反应,阳性结果出现红色斑点。本文用血吸虫虫卵浸出液为抗原,金标记A蛋白为显示剂,建立了检测血吸虫抗体的DIG-FA。以本法检测血吸虫病患者血清81份,阳性卒92.6％;献血者血清50份,特异性为98％;42份产前检查的孕妇血清均为阴性;6例华枝睾吸虫患者未出现交叉反应;6例并殖吸虫患者中4例出现不同程度的阳性反应,其中3例环卵反应亦为阳性,环沉率8～15％。提示本法的敏感性和特异性与环卵反应相近。

化学发光标记免疫测定法检测卵巢上皮癌患者血清CA125水平

目的 评价化学发光标记免疫测定法 (CLIA)在检测卵巢上皮癌者血清CA12 5水平中的价值。方法 应用化学发光标记免疫测定法对 2 0 3例卵巢上皮癌患者进行血清CA12 5的检测 ,其中浆液性癌 72例 ,粘液性癌 3 7例 ,宫内膜样癌 3 8例 ,透明细胞癌 13例 ,未分化癌 2 5例 ,混合性上皮癌 18例。对照组选健康女性共 63 8例。结果 2 0 3例患者中阳性 184例 ,敏感度为 90 .6%,特异性为 94.5 %,准确度为 93 .6%。结论 化学发光标记免疫测定法是目前检测卵巢上皮癌患者的最好方法 ,CA12

尿Ⅳ型胶原酶免疫测定法的建立及其在糖尿病肾病中的应用

目的 通过建立一种简便、灵敏的双抗体夹心酶联免疫吸附法 (ELISA)检测尿Ⅳ型胶原 (ⅣC) ,探讨糖尿病 (DM )患者肾小球基底膜代谢状况以及尿ⅣC对糖尿病肾病 (DN)的诊断价值。方法 检测 5 0名正常人和 12 7例DM患者的血清ⅣC及尿ⅣC。并将 12 7例DM患者根据其 2 4h尿白蛋白 (Alb)排泄率 (UAE)分成 3组 :UAE <30mg/ 2 4h(A组 )、30mg/ 2 4h <UAE <30 0mg/ 2 4h(B组 )、UAE >30 0mg/ 2 4h(C组 )。 结果 双抗体夹心ELISA检测尿ⅣC ,灵敏度为 1.2ng/ml;批内变异系数 (CV)为 5 .4 %～ 10 .6 % ,批间CV为 7.8%～18.5 %。在 3组DM患者中 ,A组患者血清、尿ⅣC的阳性率分别为 2 8.3%、31.7% ,明显高于对照组 (P <0 .0 1) ;C组 19例DM患者中有 18例已发展为DN ,尿ⅣC的阳性率 (6 3.2 % )显著高于A组 (2 8.3% ) (P <0 .0 1) ,C组血清ⅣC的阳性率 (36 .8% )与A组 (31.7% )比较差异无显著性 (P >0 .0 5 )。结论 本研究建立了一种简便、灵敏的检测尿ⅣC的ELISA方法 ,该法对DN的诊断具有较高的敏感性和特异性。

用酶免疫测定法检测鱼害粘球菌的试验

本文介绍了不标记抗体酶免疫测定法检测鱼害粘球菌烂鳃病的试验结果。试验表明,鱼害粘球菌不同菌株的菌体都能与其各特异抗血清交叉反应,用酶标记显示棕色,获得阳性反应,其细长弯曲的菌体形态在光学显微镜下清晰可见。用正常兔血清或含吐温20 0.1M,pH7.4的磷酸缓冲液或吸收血清,或用Cg25和 Cg27菌株代替鱼害粘球菌的对照组,酶标记都呈阴性反应,菌体不呈棕色,在光学显微镜下观察有明显差别。以健康草鱼鳃上的粘液作对照试验,粘液本身呈淡黄色,只有红血球呈深棕色。 这种检测法对粘细菌病的流行病学调查或用于诊断鱼病有一定实际意义。这一检测技木对其他鱼类的病毒病的病原定位、传染源、传染途径的探索,以及对细菌性鱼病或寄生虫鱼病的研究也可能是适用的。

以合成多肽为抗原检测EB病毒抗体的酶免疫测定法

用固相合成肽方法合成了３ 个ＥＢＶ多肽抗原， 建立了测定ＥＢ病毒抗体的酶免疫测定法。共测定４５ 份鼻咽癌病人血清标本， 阳性率为８９％ 。本方法观察结果方便， 操作简单， 试剂稳定。

快速检测布鲁氏菌抗体的滴金免疫测定法的建立及应用

目的:建立一种快速诊断布鲁氏菌感染的方法。方法:将布鲁氏菌可溶性菌体抗原结合于硝酸纤维膜上,以胶体金颗粒结合的羊抗人IgG作为标记抗体,建立滴金免疫测定法,检测布鲁氏菌感染者血清抗体,通过布鲁氏菌抗原抗体渗滤在硝酸纤维膜上反应,2 m in后肉眼观察结果。并与试管凝集试验比较。结果:滴金免疫测定法的敏感性为95.35%(41/43),特异性为98.99%(98/99),其他病患者血清反应均为阴性,Youden′s指数为0.9434。滴金免疫测定法与试管凝集试验的符合率为97.89%(139/142),两法无显著性差异(P>0.05)。结论:滴金免疫测定法可用于布鲁氏菌病的临床检测和流行病学筛查,具有推广应用价值。

滴金免疫测定法检测抗体在血吸虫病传播阻断地区的应用

目的探讨滴金免疫测定法检测抗体在血吸虫病传播阻断地区的应用价值。方法在已建立的滴金免疫测定法的基础上，应用该法检测原血吸虫病重度流行区、中度流行区和轻度流行区而现已阻断传播地区的人群以及现血吸虫病中度流行区人群的抗血吸虫抗体。结果原血吸虫病重、中和轻度流行区人群的阳性检出率分别为６．１８％、３．３１％、１．４７％，三者间有非常显著差异（Ｐ＜０．０１）；现血吸虫病中度流行区人群的阳性检出率为 ３９．３３％，与传播阻断地区人群的检出率间也有非常显著差异（Ｐ＜０．０１）。结论摘金免疫测定法检测抗体可作为考核该类地区血吸虫病防治效果的一种方法。

克隆酶供体免疫测定法在环孢菌素A浓度监测中的应用

目的 评价用自动生化分析仪测定全血环孢菌素A(cyclosporineA ,CsA)浓度的克隆酶供体免疫测定 (CEDIA)方法。方法 分析测定CEDIA方法的精密度、灵敏度、线性、准确性 (回收实验 )以及与荧光偏振免疫分析法 (FPIA/TDx)和酶扩大免疫测定法 (EMIT)之间的相关性。结果 CEDIA测定的批内CV分别为 1.8% (4 5 5 .7μg/L)、2 .2 9% (2 70 .5 μg/L)和 7.0 % (73.8μg/L) ;最低检出限为 7.0 μg/L ;测定线性范围可达 180 0 μg/L ;平均回收率为 99.4 % ;CEDIA法与FPIA/TDx和EMIT法进行对比 ,相关系数分别为 0 .931和 0 .94 5。结论 CEDIA方法测定CsA血液浓度具有操作简便、标本不需繁琐的前处理、精密度好和较宽的分析范围等特点 。

人粒细胞弹性蛋白酶的酶免疫测定法及其临床意义

近几年来发现,中性粒细胞在多种疾病的发病学中有广泛的作用。粒细胞弹性蛋白酶(neutrophil elastase, NE)是粒细胞嗜天青颗粒中的一种作用范围广、水解能力强的蛋白水解酶,与急慢性炎症及多种组织损伤性疾病的发生有密切关系。我们建立了一种测量人血浆NE的酶免疫——生物素法,需血浆量为20μl。正常不吸烟成人血浆NE含量为33.7±6.7ng/ml((?)±SD);慢性阻塞性肺疾患病人为48.0±10.9ng/ml;皮肤化脓性感染病人为69.1±15.7ng/ml,系统性红斑狼疮病人为61.0±13.9ng/ml;而再生障碍性贫血病人仅12.3±5.3ng/ml,这些结果与正常人相比均有显著差异。作者认为;本方法特异性好,灵敏度可达毫微克水平,可望作为探讨NE在疾病发生中的作用及监测某些疾病变化的较好指标。

时间决定性荧光免疫测定法用于水溶性血型物质定量的研究

将时间决定性荧光免疫测定法（ＴＲ－ＦＩＡ）用于水溶性血型物质的检测，并以人工合成的血型物质作为参照，对一个体的部分体液、分泌液中的血型物质进行了定量分析。结果表明，ＴＲ－ＦＩＡ法敏感度高，重复性好，对唾液、鼻汁、精浆、粪便、尿液、汗液及泪液中的血型物质均能进行定量检测。

采用体外酶免疫测定法对重庆地区40例哮喘患者进行过敏原的检测分析

目的 采用体外酶免疫检测方法测定哮喘患者的过敏情况 ,以了解重庆地区过敏性哮喘患者常见过敏原的发生情况。方法 抽取哮喘病人静脉血 2ml,30 0 0rpm 10min分离血清 ,吸取 0 4 μl血清入反应管 ,室温孵育 10 0min后 ,去除管内血清 ,用 1ml清洗液清洗 ,再加入结合液孵育 16h ,去除结合液 ,再用清洗液清洗 ,加入底物 /指示剂 ,0～ 90min观察颜色变化。结果 对重庆地区 4 0例支气管哮喘病人进行 7种抗原的检查 ,过敏原的阳性检出率 95 % ,32名患者均对 2种以上的过敏原出现阳性反应。 4 0例患者中有 38例IgE呈阳性升高 ,占 95 % ;屋尘阳性 14例 ,占 35 0 % ,尘螨 /粉螨阳性 17例 ,占 4 2 5 % ,霉菌 (点青霉、交链孢霉、黑根霉 ) 11例 ,占 2 7 5 % ;秋季花粉 (普通豚草、巨大豚草 ) 5例 ,占 12 5 % ,秋季花粉 2 (蒿属植物、艾蒿 ) 13例 ,占 32 5 % ,春季花粉 (榆树、柳树、杨树 )阳性 5例 ,占 12 5 %。结论 过敏性哮喘患者IgE普遍升高 (95 % ) ,重庆地区致敏原以“螨类”引起的哮喘最为常见 ,其次为屋尘和蒿属类。这可能与重庆地区地处盆地 ,气候温暖潮湿 。

磁珠分离酶联免疫测定法在检测人血清肌红蛋白中的应用

目的 建立一种宽范围的定量检测人血清肌红蛋白(Mb)的磁珠分离酶联免疫测定法。方法 使用 国产聚苯乙烯磁珠,经碳化二亚胺活化表面自由羧基,得以与抗Mb单抗偶联,用此抗体包被磁珠作为固相,另 一Mb单抗标记辣根过氧化物酶,做双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)检测人血清Mb,共检测临床血清标 本50份,并与常规板式ELISA作对比。结果 磁珠酶免疫定量检测方法用于人血清Mb定量检测范围可从常 规板式ELISA的5～200μg/L扩展到5～1000μg/L。结论 利用国产磁珠建立的磁珠分离酶免疫定量检测 Mb方法优于常规板式ELISA。

免疫测定法检测重金属技术的进展

作为检测重金属的一种新型方法,免疫测定法有其特点和优势。免疫测定法的技术构成包括重金属单克隆抗体的获得、单克隆抗体灵敏性的提高和免疫检测,其中重金属单克隆抗体的获得是基础。我们对该方法进行了简要介绍,并就其所面临的一些问题和发展趋势进行了探讨。

胰岛素化学发光免疫测定法的建立

目的建立化学发光免疫法测定胰岛素及临床糖尿病患者胰岛素治疗跟踪与稳定性的可行性评估.方法 CLIA采用竞争法.结果该方法的灵敏度为1.24 mIU/L,在2.5～160 mIU/L的范围内线性良好.CLIA测定胰岛素的批内与日间变异系数分别为3.05%,4.61%和4.80%,4.92%.在血红蛋白浓度〈2.4 g/L、总胆红素浓度〈342 μmol/L、甘油三酯〈9.9 mmol/L时的干扰率无临床意义.与放射免疫分析法有较好的相关性（r=0.915 6）.结论 CLIA法测定胰岛素能及时有效地满足糖尿病患者的临床需要,有助于进一步对检测试剂盒的研制.

酶标免疫测定法（EIA）在检测动物性食品中氯霉素残留的应用

酶标免疫测定法（ＥＩＡ）在检测动物性食品中氯霉素残留的应用刘智宏（中国兽药监察所，北京１０００８１）众所周知氯霉素（ＣＡＰ）是较有效的广谱抗生素，它常用于动物各种传染性疾病的治疗。但是氯霉素有着严重的副作用，它能引起人类的再生障碍性贫血、粒状白细胞缺...

游离甲状腺素免疫测定法的检测偏差

目的研究血清甲状腺素结合能力对游离甲状腺素免疫测定法检测偏差的影响。方法以平衡透析法为基准,以16位孕期超过6个月的孕妇和32位住院患者为对象,研究免疫测定法的检测偏差。结果16位孕期超过6个月的孕妇具有高血清甲状腺素结合能力,15位住院患者具有正常血清甲状腺素结合能力,另外17位住院患者具有低血清甲状腺素结合能力。对于正常血清甲状腺素结合能力组和高血清甲状腺素结合能力组,各种免疫测定法与平衡透析法的检测结果之间不存在显著性差异(P>0.05或P>0.01)。对于低血清甲状腺素结合能力组各种免疫测定法与平衡透析法的检测结果之间存在显著性差异(P<0.01)。平均偏差均为负值。结论血清甲状腺素结合能力影响游离甲状腺素免疫测定法的检测偏差。