牦牛和藏羊免疫特性试验观察

牦牛和藏羊是生活在高寒地区的典型家畜。它们生活在海拔较高、气候恶劣的地区,经常面临极端寒冷、缺氧和食物匮乏的环境。然而,牦牛和藏羊却能够在这样的恶劣条件下生存和繁衍。

肺脏的区域免疫特性及其在感染性疾病中的调控机制研究进展

肺脏是与外界环境相通的开放系统,除了肩负气体交换的生理功能外,也是众多经空气传播的病原微生物等外界抗原的主要靶器官,在防御并清除病原微生物感染过程中发挥重要调控作用。因此,肺脏兼具免疫器官的特性,并且由于其独特的结构和组织微环境,以及特定的细胞亚群和功能分子,形成了不同于全身性系统免疫的区域免疫特性,包括区域固有和适应性免疫特性及其中涉及的黏膜免疫特性。平衡的肺脏免疫调控机制对于维持肺部免疫稳态及抵抗病原微生物感染至关重要,而其失调则可导致感染性疾病的发生。因此,深入阐释肺脏区域免疫特性及其与感染性疾病的内在联系将有助于理解疾病的免疫病理机制,提供新的免疫治疗靶点和免疫防治策略,进而推进临床转化医学研究。

牛多杀性巴氏杆菌LolA蛋白的免疫特性

为研究牛多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)外膜LolA蛋白的免疫特性,对牛Pm LolA蛋白进行原核表达和纯化,再通过动物模型对重组LolA蛋白(rLolA)的免疫特性进行评估。结果表明:本试验成功表达并纯化出rLolA蛋白,其相对分子质量大小约为40 ku;不同动物源性Pm的lolA基因同源性较高,说明该基因高度保守;rLolA蛋白能够引发机体体液免疫,分泌高表达量IgG抗体;rLolA蛋白的免疫原性对小鼠的免疫保护率达55%。本试验明确了牛Pm LolA蛋白的免疫特性,为Pm免疫保护蛋白筛选以及交叉保护性疫苗研发提供了参考。

电压暂降影响下的过程参数免疫特性测试研究

研究电压暂降影响下的工业过程免疫特性,对评估工业过程抗电压波动能力、有针对性地提出应对和改进措施具有重要的指导意义。针对目前过程参数抗电压暂降手段缺乏理论指导的问题,基于敏感设备电压暂降耐受特性测试方法及过程免疫时间理论,提出了一种过程级电压暂降免疫特性的测试方法,通过搭建实验平台,模拟过程参数在电压暂降下的变化及延时特性,定量研究各类影响因素对过程参数免疫特性的影响。研究结果可为过程免疫时间(PIT)测试方案的制定及电压暂降的治理提供参考依据。

多房棘球蚴单克隆抗体的免疫特性分析

用免疫学方法对2株抗多房棘球蚴单克隆细胞株进行免疫特性分析。研究制备抗多房棘球蚴单克隆抗体1G11、1C1,亲和层析纯化并检测纯度,采用ELISA、Western blot和免疫组化法分别检测所获抗体的抗体效价、特异性以及抗体在免疫组织化学定位。结果显示,经亲和层析纯化获得的单克隆抗体1G11、1C1在分子质量约55 ku及24 ku可见清晰的重、轻链条带;ELISA与Western blot结果显示,单克隆抗体1G11、1C1与多房棘球蚴能特异性结合,与细粒棘球蚴抗原、细颈囊尾蚴抗原、多头蚴抗原不反应且无交叉反应;经免疫组化鉴定2株抗多房棘球蚴单克隆抗体均能与多房棘球蚴特异性结合。结果表明,抗多房棘球蚴单克隆抗体具有良好的免疫特性,为后期包虫病诊断试剂的研发提供了物质基础。

东方田鼠天然抗血吸虫感染免疫特性的研究

本文对洞庭湖区东方田鼠（MF）天然抗血吸虫感染免疫特性研究表明，其新鲜血清被动转移使小鼠EPG减少40.82％－81．53％，毛蚴孵化本降低50.67％－64．76％，肝脏虫卵数减少72．07％－74．07％，肝脏虫卵肉芽肿直径比对照组短68．46－70.39μm．对血吸虫不同阶段抗原的识别特异带显示，对SSA7条、AWA和SEA各3条及CA未见阳性带．WMF和BMF血清或／和淋巴细胞杀童虫校正死亡率为64．12％－78.83％．WMF和BMF存在天然抗血吸虫抗体以SSA＞AWA＞SEA＞CA，其抗体水平在攻击感染后（BMF_(i15)）显著增高．BMF血清C_3、C_4、IL_4水平显著高于AM，在攻击感染后分别上升了74．58％、295．49％和150.88％，显示其在抗血吸虫感染中起重要作用．

ctB和ure I双基因融合表达及其免疫特性分析

目的构建霍乱毒素B亚单位(CtB)和幽门螺杆菌尿素膜通道蛋白(UreI)融合的原核表达质粒pET32a(+)ctB/ureI,并初步研究融合蛋白CtB/UreI的表达特性和免疫特性。方法PCR从pUC18ctB中克隆ctB基因,定向在pET32a(+)/ureI的ureI基因5′端插入ctB基因,构建ctB和ureI双基因原核表达质粒pET32a(+)ctB/ureI,转该质粒于E.coliBL-21(DE3),经酶切和序列分析鉴定工程菌。IPTG诱导表达,HP-His亲和层析纯化,SDS-PAGE和Gel-ProAnalizer4分析,重组蛋白免疫BALB/c小鼠。用Westernblot和ELISA分析重组蛋白的免疫特性。结果工程菌含完整的ctB和ureI基因,与相对应基因的序列同源性分别为100%。在22℃,1mmol/LIPTG诱导4h后,重组蛋白的表达占菌体总蛋白12%,亲和层析纯化后蛋白纯度为94.3%。Westernblot表明重组蛋白分别能与相应的抗体反应,该蛋白免疫小鼠后能产生相应的IgG抗体。结论成功构建了能表达CtB/UreI蛋白的大肠杆菌表达菌株。对融合蛋白表达和纯化后,初步证明了该重组蛋白有CtB和UreI的双特异反应原性和免疫原性,为研究新型幽门螺杆菌疫苗奠定了坚实的基础。

细粒棘球蚴Eg10基因的克隆、表达及免疫特性研究

目的克隆、表达细粒棘球蚴分离株Eg10基因,并研究其重组蛋白的免疫特性。方法将细粒棘球蚴Eg10基因亚克隆于表达载体pET28a,转化重组质粒至大肠埃希菌BL21进行融合表达,His-bind树脂纯化系统纯化重组融合蛋白,以之作为抗原免疫小鼠。48只ICR小鼠随机均分为4组,A、B组为对照组,分别注射不含抗原的磷酸盐缓冲液(PBS)和福氏佐剂+PBS,每鼠皮下注射100μl。C、D组为免疫组,注射用福氏佐剂乳化的重组抗原Eg10,抗原量分别为0.1mg/μl和0.5mg/μl,每鼠皮下注射100μl。各组小鼠每隔2周免疫1次,共免疫3次。于免疫前和免疫后2、4、6、8和10周采血以获得抗血清。通过蛋白质印迹(Westernblotting)分析和ELISA检测重组抗原的免疫学特性。结果成功构建含目的片段Eg10的基因工程菌株。Westernblotting分析结果表明,免疫血清能识别重组抗原Eg10。ELISA检测结果显示,用重组蛋白免疫小鼠可诱导产生特异性抗体。统计学分析表明,免疫后C、D组抗体水平逐渐升高,至第8周抗体滴度达最高值,分别为(1.143±0.253)和(1.254±0.070);A、B组抗体一直维持在较低水平。第2、4、6、8和10周,A、B与C、D组间抗体水平差异有统计学意义(均P<0.05),C、D组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论成功表达细粒棘球蚴重组蛋白Eg10,该蛋白有一定的免疫原性。

一种复合益生菌对斜带石斑鱼生长及免疫特性影响的研究

以一种由光合细菌、短小芽孢杆菌和嗜酸乳杆菌按照20%、2%和78%质量百分比组成的复合益生菌拌喂斜带石斑鱼30 d,以探讨其对斜带石斑鱼生长及免疫特性影响的研究。结果表明,三个不同复合益生菌用量组石斑鱼的体增重率、体增长率和肥满度均有显著提高,饲料系数均显著下降;各免疫特性指标中,血清碱性磷酸酶(AKP)、酸性磷酸酶(ACP)、总抗氧化酶(T-AOC)和溶菌酶活力显著升高,总超氧化物歧化酶(SOD)活力极显著升高;复合益生菌饲料对哈维氏弧菌攻毒后石斑鱼的保护率显著提升。实验结果表明,实验复合益生菌饲料可有效促进石斑鱼的生长和体增重,降低饵料系数,显著提升石斑鱼非特异性免疫相关指标,但10、30、50 g/kg等不同用量组间差异不显著,需要进一步确定复合益生菌的合适用量。

传染性胰腺坏死病病毒分离株VP2基因抗原表位区融合表达及免疫特性的分析

利用RT-PCR方法扩增出IPNV-ZYX分离株主要结构蛋白VP2的抗原表位区基因(616bp),命名为IPNV VP2 COE,将其克隆到pCold TF表达载体中构建重组质粒pCold TF-VP2COE,在大肠杆菌BL21(DH5α)感受态表达,经SDS-PAGE电泳分析,表达蛋白约78 ku,用镍离子亲和层析柱纯化该蛋白,制备抗血清,间接ELISA结果显示,IPNV(ATCC VR-1318)细胞培养物与鼠抗VP2 COE蛋白血清发生特异性反应,效价为1∶12 800;间接免疫荧光结果显示,鼠抗VP2 COE血清可与黑龙江某渔场已知感染IPNV虹鳟肝组织产生特异性的荧光,以上两项结果表明,表达IPNV VP2 COE蛋白具有良好的免疫原性和免疫反应性,为IPNV检测方法的建立及疫苗的制备提供理论依据。

灵芝lz-8基因乳酸菌表达载体的构建与表达及免疫特性

克隆灵芝lz-8基因并进行原核表达,通过动物试验检测其生理活性。根据GenBank公布的lz-8基因的DNA序列设计引物,从灵芝菌丝中提取灵芝总DNA,PCR扩增lz-8基因并连接到乳酸菌食品级表达载体pNZ8149,转化乳酸乳球菌NZ3900,于30℃Nisin诱导3 h,SDS-PAGE进行蛋白表达分析。将工程菌菌悬液给小鼠灌胃,对其碳廓清试验等免疫指标进行检测。结果表明:扩增到的lz-8基因序列全长330 bp,构建了原核表达载体pNZ8149-lz-8,LZ-8蛋白在NZ3900中得到表达。NZ3900/pNZ8149-lz-8菌悬液对小鼠各项免疫指标有明显的调节作用。

猪繁殖呼吸综合征病毒S3毒株的分离及其免疫特性研究

从某猪场仔猪体内分离到一株 PPRSV毒株 ,该毒株能在 Marc-1 4 5细胞上增殖产生致细胞病变 ,该病变能被 PPRSV美洲型阳性血清所抑制 ,不被乙脑病毒、猪细小病毒、伪狂犬病毒阳性血清所抑制 ,经美洲型 PPRSV荧光抗体染色呈阳性反应 ,电镜观察到直径 55～ 60 nm的病毒粒子 ,接种阴性仔猪未见临床症状异常 ,但抗体检测阳性。命名该分离毒为 PPRSV-S3毒株。在 S3弱毒株分离鉴定的基础上 ,进一步在猪体上对其致病性和免疫力进行研究。S3毒株接种仔猪后 ,仔猪不表现任何症状 ,也不向外排毒。4～ 5周龄的仔猪接种 S3株后可产生坚强的免疫力 ,免疫后 4～ 6个月能抵抗强毒攻击。后备母猪配种前 2～ 3周免疫接种 S3株 ,怀孕 90～95d攻强毒 ,未发生流产、死胎、木乃伊胎、产弱仔等繁殖障碍现象。结果表明 ,S3是一株自然分离的弱毒株 ,且具有良好的安全性和免疫力。

柔嫩艾美耳球虫山西株早熟系的免疫特性

对鸡柔嫩艾美耳球虫山西株早熟系的免疫特性进行了研究。结果表明:该株的早熟系与亲本株具有相同的免疫原性,但致病性大大降低;其最佳免疫剂量和次数:首次免疫为1500个/只,14 d后以2000个/只二免,二免后免疫保护期可达90 d以上,免疫后鸡群的抗球虫能力与血清中特异性IgG的变化规律一致;提示该早熟系具备早熟疫苗株的免疫特性。

重组日本血吸虫14-3-3蛋白的纯化和免疫特性分析

目的 :纯化日本血吸虫信号蛋白质 14 3 3编码基因的原核表达产物 ,分析纯化产物的免疫学特性。方法 :SDS PAGE鉴定重组日本血吸虫 14 3 3(rSj14 3 3)蛋白包涵体 ,超声破碎细胞收集包涵体 ,尿素溶解包涵体 ,NiSO4平衡层析柱 ,亲和层析纯化rSj14 3 3,Western blot鉴定纯化产物的免疫学特性。结果 :rSj14 3 3是以包涵体形式在大肠埃希菌中表达 ,通过亲和层析在 32 .5kDa附近得到单一蛋白条带 ,Western blot证实纯化产物为rSj 14 3 3,且具有与天然Sj 14 3 3相同的抗原表位。结论 :成功纯化了rSj14 3 3蛋白 ,为研究 14 3 3在血吸虫信号转导中的作用奠定了基础。

益生菌的营养和免疫特性及其应用

目前,益生菌剂在使用过程中还存在着一些问题,一是在完全替代抗生素过程中,其抗病原菌感染效果不明显;二是在污染较为严重的养殖环境中使用,其促生长效果不理想.特别是在目前国内以农户散养占重大比重的养殖模式中,养殖环境的控制非常困难,造成了养殖户对抗生素的依赖,同时也为益生菌剂的推广带来了困难.为了提高益生菌剂的应用效果,适应当前的养殖环境现状,选用免疫特性强的菌株与产酶、产酸、产维生素等营养特性强的菌株联合应用,可以提高益生菌剂的抗感染、促生长的综合使用效果,为其在更大程度上取代抗生素奠定了基础.

植物乳杆菌B02012对酸面团小麦蛋白结构和免疫特性的影响

本实验以植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)B02012和消化乳杆菌(Lactobacillus alimentarius)20998两株具有相近产酸速率和酸化性能的乳酸菌制备长时发酵酸面团(分别简称为SLB02012和SL20998),并以传统酵母菌长时发酵酸面团(SY)和可食性有机酸化学酸化面团(SCA)为对照,通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)、傅里叶变换红外光谱(Fourier transforminfrared spectrophotometer,FTIR)、内源性荧光扫描(intrinsic fluorescence scanning,IFS)、竞争性酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)并结合层次聚类分析(agglomerative hierarchical clustering,AHC)等方法研究不同发酵面团中小麦蛋白分子二、三级结构及麦醇溶蛋白免疫性的变化和相关性。SDS-PAGE结果显示,乳杆菌的添加对降解面团蛋白质起主导作用;与面团SL20998相比,面团SLB02012的高分子质量麦谷蛋白及部分麦醇溶蛋白发生了更明显降解。FTIR和IFS进一步验证,面团SLB02012的蛋白分子柔韧性增加,α-螺旋含量下降最明显,α-螺旋含量/β-折叠含量的比值最小;面团SY、SLB02012和SYLB02012的λmax发生蓝移,而SL20998的λmax发生红移,蛋白质三级结构得到伸展。ELISA结果表明,对比空白组,面团SLB02012麦醇溶蛋白的免疫性下降了35%,且与面团SCA差异不显著,而SL20998麦醇溶蛋白的免疫性增加了29.5%。AHC结果表明,不同发酵条件获得的发酵面团中麦醇溶蛋白的二、三级结构及其免疫性呈现良好的聚类关系。本研究结果表明,植物乳杆菌B02012可作为制备低敏发酵制品的优势菌,为进一步深入研究乳酸菌降敏机理提供理论支撑。

冬虫夏草菌丝体免疫特性测试

以发酵生产的冬虫夏草菌丝体为研究材料,通过测试其对荷瘤小鼠超氧化物歧化酶(SOD)和脂质过氧化物(LPO)水平的影响和观察小鼠组织细胞的病理变化,测试冬虫夏草的免疫功能。试验表明,冬虫夏草菌丝体能显著增加荷瘤小鼠脑组织和全血中SOD含量,从而提高机体免疫力,明显减少荷瘤小鼠S180癌细胞面积,降低癌细胞重量,促进癌细胞高度分化,致使癌细胞坏死,对肿瘤生长表现出较强的抑制力。

哈维氏弧菌Bfr蛋白的原核表达及免疫特性研究

Bfr(Bacterioferritin)是细菌主要的储铁蛋白和重要的免疫相关蛋白。为探索哈维氏弧菌Vibrio harveyi Bfr蛋白的免疫特性,本研究利用大肠杆菌Escherichia coli表达系统表达哈维氏弧菌Bfr重组蛋白(rBfr),并进行纯化,进一步通过动物模型评估rBfr的免疫特性。结果显示,成功表达了哈维氏弧菌Bfr蛋白,Bfr蛋白分子量大小约为25 ku;表达的重组蛋白主要以可溶性形式存在;免疫小鼠结果显示,rBfr蛋白能激发小鼠产生高水平的特异性抗体,rBfr具有较好的免疫原性;利用斑马鱼Danio rerio建立哈维氏弧菌感染模型,表明哈维氏弧菌对斑马鱼无致病性。本研究证实了哈维氏弧菌Bfr具有免疫原性,为进一步研制哈维氏弧菌亚单位疫苗和核酸疫苗提供了参考和借鉴。

抗蝰蛇毒卵黄抗体的制备及其免疫特性研究

目的制备一种新的抗蝰蛇毒卵黄抗体,并研究其免疫特性。方法将产卵母鸡分为低剂量(A组)和高剂量(B组)免疫组。以甲醛减毒法制备的蝰蛇毒抗原免疫母鸡;以水稀释法联合硫酸铵沉淀和超滤法分离纯化卵黄抗体;总蛋白质通过改良Lowry法测定;以ELISA法测定卵黄抗体的效价、总卵黄抗体与特异抗体含量、交叉反应。结果低、高剂量组均诱导母鸡产生有效免疫应答。高剂量组免疫效价高于低剂量组(P<0.05),高剂量组于免疫后约40d抗体效价达高峰,持续约4周;而低剂量组在免疫后约50d抗体效价达高峰,持续约2周。免疫过程中,两组总卵黄蛋白无显差异(P>0.05),但高剂量组卵黄中平均特异性抗体(0.29±0.04)mg/ml明显高于低剂量组(0.21±0.03)mg/ml(P<0.05).制备的抗蝰蛇毒IgY与蝰蛇毒抗原具有较高特异性,但与五步蛇(54.3%)、蝮蛇(47.5%)及竹叶青蛇(43.1%)有明显交叉反应,与眼镜蛇(11.7%)有轻度的交叉反应。结论研究证实蝰毒抗原易诱导母鸡产生良好的免疫应答,并成功制备了抗蝰蛇毒的卵黄抗体,为蛇伤防治提供新的途径。

微小隐孢子虫重组蛋白CP21的免疫特性

采用微小隐孢子虫CP21基因的原核表达蛋白的抗血清对微小隐孢子虫感染HCT-8细胞进行了体外阻断试验,检测不同浓度抗血清对HCT-8细胞感染隐孢子虫感染率的影响。同时应用纯化的重组CP21蛋白对小鼠进行免疫,检测体液免疫水平和细胞免疫水平的变化。对免疫后的小鼠接种微小隐孢子虫,检测重组CP21蛋白对微小隐孢子虫感染的保护效果。体外阻断试验结果显示,在培养基中分别加入1%、2%、5%和10%的抗重组CP21蛋白鼠血清时,HCT-8细胞感染隐孢子虫的平均感染率由82.0%分别下降到41.1%、35.2%、30.6%和23.5%;动物保护性试验体液免疫水平检测发现,试验组血清中IgG滴度随免疫次数增加而逐渐升高,第3次免疫后IgG滴度与对照组相比差异均极显著(P<0.01);细胞免疫水平检测证明CD4+/CD8+T淋巴细胞数值与对照组相比差异均极显著(P<0.01);攻虫保护试验结果表明试验组与对照组相比卵囊排出量显著减少(P<0.05),卵囊排出持续时间平均缩短4 d,减虫率达38%。体内外试验结果表明:CP21基因可用于作为预防和治疗隐孢子虫病的有效靶位点基因。