用酶联免疫吸附试验检测蚊虫嗜血性的研究──Ⅰ.抗牛IgG酶结合物的研制

作者制备兔抗牛IgG酶结合物，以提供ELISA法准确鉴定蚊胃血中的牛血，检测牛、马、羊、鸡、猪、兔、鼠7种动物及人血清。证明酶结合物具有很高的特异性及敏感性，数十次ELISA测定结果表明，牛血清稀释度为1:100时，OD值在1.2～1.9之间，平均值为1.42，其它6种动物及人血清则在0～0.08之间，平均值0.01～0.06。此稀释度不但在酶联免疫检测仪中显示出明显的特异性，而且用肉眼也很容易识别和判断。

基于免疫球蛋白G降解酶切和高效液相色谱的抗体电荷异构体分析技术

目的:探索和优化单克隆抗体电荷异构体分析的酶切预处理和高效液相色谱检测方法。方法:采用和优化基于Thermo ProPac^(TM) WCX-10色谱柱的离子交换色谱检测方法,以含10 mmol·L^(-1)磷酸盐和1 mol·L^(-1)氯化钠缓冲液(pH 6.3)为流动相进行梯度洗脱,流速0.5 mL·min^(-1),检测信号为波长280 nm吸收度,采用免疫球蛋白G降解酶(IdeS)切前后的电荷异构体检测,并对方法的专属性、线性、重复性、精密度等指标进行考察。结果:基于阳离子交换色谱(CEX)方法和酶切处理,以几种商品化抗体为例,展示该方法的应用,对完整的IgGs与IdeS酶切产生的F(ab’)_(2)和Fc区域进行比较分析提供更详细和更特异的电荷异构体信息。通过方法学验证,空白溶剂无干扰峰出现,进样量在10~80μg范围内,进样量与峰面积的线性关系良好(R^(2)=1.000);6次进样测得的峰面积RSD为0.52%;日间精密度3.3%;耐用性良好;在24 h内样本基本稳定,测得的峰面积RSD为3.5%;3批样品检测结果的峰面积RSD为2.5%。结论:该方法可用于全流程的抗体药物研发,包括早期阶段的分子筛选,中期产业化的工艺开发,直至产品上市质量标准和稳定性研究。

免疫球蛋白降解酶IdeS在大肠杆菌中的表达、纯化及功能鉴定

病原链球菌为逃避宿主的免疫反应,分泌一种可特异地裂解免疫球蛋白G的降解酶(immunoglobulin G-degrading enzyme of Streptococcus pyogenes,IdeS)。IdeS既可作为工具酶用于IgG的指纹分析,又可用于治疗与自身免疫反应相关的疾病。本研究基于质粒pCold构建了两种重组IdeS的表达载体,并在大肠杆菌Shuffle T7中进行异源表达,经亲和色谱纯化后检测其蛋白活性。结果表明N-端含有His6-标签的重组IdeS产量为4 mg·L^(-1),其与抗体IgG1以1∶200(m/m)在37℃反应30 min即可完全酶解。而N-端含有His6-标签且C-端含有硅胶亲和标签(SiBP)的重组IdeS产量为1.5 mg·L^(-1),其与抗体IgG1以1∶20(m/m)在37℃反应30 min才可反应完全。C-端融合肽对于IdeS产量与活性都有较大的影响,使其活性降低,不利于后续应用于药物研发。上述结果表明,本系统所表达的N-端含有His6-标签的IdeS重组蛋白具有较高的活性,完全能满足抗体类药物研发和作为工具酶用于IgG指纹分析的需求。

甲状腺功能异常患者827例乳糜泻患病风险研究

乳糜泻与甲状腺功能异常密切相关,血清抗组织转谷氨酰胺酶抗体免疫球蛋白A(tTG-IgA)作为乳糜泻的筛查指标与患者甲状腺功能异常具有相关性。本研究通过对2019年12月至2021年4月因胃肠道症状就诊于新疆维吾尔自治区人民医院的2914例患者进行甲状腺功能和tTG-IgA检测,对tTG-IgA检测阳性患者进行胃镜检查确诊乳糜泻,并进一步根据年龄、性别建立匹配队列,病例组和对照组各827例。分析了甲状腺功能异常患者tTG-IgA阳性率和乳糜泻患病率,同时了解乳糜泻患者甲状腺功能异常情况。结果发现甲状腺功能异常患者中tTG-IgA阳性率和乳糜泻患病率均较高,在甲状腺功能异常尤其是甲状腺功能亢进患者中,需重视乳糜泻的筛查。