新生儿有限的免疫球蛋白重链可变区基因多样性

目的 比较正常新生儿和健康成人免疫球蛋白重链可变区 (IgH)基因的可变区基因片段 (VH)、多样化基因片段 (D)和连接区基因片段 (JH)的使用 ,VH 上的突变 ,N区 -D基因片段 -N区 (NDN)长度以及开放性阅读框 (ORF)等情况 ,探讨新生儿IgH重排基因特征及其多样性。 方法 10例正常足月新生儿脐血和 8例健康成人外周血DNA被抽提 ,IgH基因被扩增、克隆和测序。结果 ①对于VH 和D的使用 ,新生儿和成人相似 ,即VH3使用率最高、VH7使用率最低 ,D2被优先使用 ;而对于JH 的使用 ,新生儿和成人不同 ,即新生儿偏倚使用JH3 ,成人使用JH 则趋向随机化。②新生儿和成人IgH重排基因的VH-D -JH 连接点处均有N区插入 ,但新生儿的NDN长度 [(2 1.2± 5 .7)bp]短于成人 [(2 6 .6± 6 .5 )bp]。③新生儿的IgH基因序列无碱基缺失而成人存在 ;新生儿IgH基因少有体突变 (2 9.2 % ) ,而 77.1%的成人IgH基因存在体突变。④新生儿有ORF的IgH基因序列为91.7% ,而成人为 10 0 %。结论 正常新生儿和健康成人的IgH重排基因序列存在着异型性。新生儿的IgH重排基因已处于活化状态 ,但由于VH,D和JH 的偏倚使用 ,NDN短以及少有突变 ,其多样性有限。

新生儿免疫球蛋白重链可变区基因多样性分析

目的 构建不同胎龄新生儿IgH基因指纹图谱 ,探讨新生儿成熟度对IgH基因谱型多样性的影响 .方法提取 2 7～ 42周新生儿RNA、进行RT -PCR反应、6%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染显色 ,获得不同胎龄新生儿IgH基因指纹图谱 ,用Tiger凝胶图像分析仪进行曲线转化和分析 .结果 各家族指纹图谱转化后的曲线下面积积分值 ,在 2 8～ 3 2周、3 3～ 3 6周和 3 7～ 42周新生儿之间无差异 ;但胎龄 2 7周新生儿曲线下面积小于胎龄 2 8～ 42周新生儿 .结论 2 8周可能是人类IgH基因谱型发育由不完善到趋于完善的一个转折点 ,2

毛细胞白血病和毛细胞白血病变异型患者免疫球蛋白重链可变区基因分子特征分析

目的:本研究归纳毛细胞白血病(hairy cell leukemia,HCL)和毛细胞白血病变异型(hairy cell leukemia-variant,HCL-v)患者免疫球蛋白重链可变区(immunoglobulin heavy chain variable region,IGHV)基因分子特征,并探讨其与临床特征及预后的相关性。方法:回顾性分析2004年12月至2020年1月在中国医学科学院血液病医院完善IGHV检测的29例HCL患者和15例HCL-v患者临床和生存资料。结果:44例患者共检测出23种重排片段,VH4和VH4-34分别是两种疾病最常见的V区基因家族和重排片段。HCL和HCL-v患者中IGHV为突变状态的比例分别为72.4%和66.7%,发生VH4-34重排(VH4-34 rearrangement,VH4-34+)的患者IGHV突变率更低(P<0.001)。在HCL中,使用VH1基因家族患者脾大发生率更低(P=0.041);而VH4-34+或IGHV未突变状态(IGHV-unmutated,IGHV-UM)的患者具有更高的乳酸脱氢酶(VH4-34+P=0.049,IGHV-UM P=0.022)和β2微球蛋白(VH4-34+P=0.039,IGHV-UM P=0.036)水平,且VH4-34+患者BRAF V600E突变率更低(20%vs.85%,P=0.012)。单因素预后分析显示,VH4-34+是HCL患者无进展生存(progression-free survival,PFS)(P=0.001)和总生存(P=0.004)的不良预后因素,IGHV-UM则为HCL-v患者PFS(P=0.038)的危险因素。结论:HCL和HCL-v患者对VH4基因家族及VH4-34存在偏向性使用,VH4-34+和IGHV-UM间存在明显共现性。在HCL中,VH4-34+与高肿瘤负荷及更差生存相关,而IGHV-UM是HCL-v患者PFS的危险因素。

早产儿与足月儿免疫球蛋白重链可变区基因异型性

目的 :分析和比较早产儿和足月儿免疫球蛋白重链可变区 (IgH)基因中的可变区基因片段 (VH)、多样化基因片段 (D)和连接区基因片段 (JH)的使用 ,VH 上的体突变 ,在VH D和D JH 连接点插入的NDN长度以及开放性阅读框 (ORF)等特征及其差异性。方法 :7例胎龄为 2 5 30周的早产儿和 8例胎龄为 37 41周的足月儿的脐带单核细胞DNA被抽提 ,使用套式PCR扩增IgH基因 ,扩增产物被克隆筛选和测序。结果 :在早产儿 ,共有 2 0个不同的VH 被使用 ,其中DP73(V3 家族成员 )被最优先使用 ,使用率为 2 1.4% ,其次是DP75 (V1家族成员 ) ,使用率为 19.0 % ,VH 上有少数体突变 ( 16 .7% )。JH6和JH3使用率分别为 42 .8%和 41.7% ,J1未被使用。IgH重排基因的VH D JH 连接点处偶有N区插入 ,DND长度为 15 .5± 7.3bp。6 4 3%的IgH基因序列具有开放性阅读框。在足月儿 ,32个不同的VH 被使用 ,DP73和DP75的使用率分别降到 11.6 %和8.3 % ,VH 上的突变为 2 9.2 %。JH6和JH3使用率分别降至 19.3 %和 34.1% ,J1仍未被使用。IgH重排基因的VH-D -JH 连接点处有少量N区插入 ,DND为 2 2 .6± 6 .8bp。 91.7%IgH基因序列的阅读框是开放的。结论 :胎龄 2 5周以上的早产儿已有IgH重排基因 ,且大部分处于活化状态 ,但由于VH 和JH 的偏倚使用 。

新生儿免疫球蛋白重链可变区基因重排研究

目的探讨不同胎龄新生儿免疫球蛋白(Ig)重链可变区(VH)基因重排情况。方法排除宫内感染的新生儿,其中胎龄27周4例,28～32周9例、33～36周12例、37～42周13例,提取其外周血RNA、进行逆转录PCR(RT-PCR)扩增其IgVH基因、6%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染显色。结果各个胎龄VH1～VH7各家族均有多个重排条带表达,同一个VH家族重排基因的平均中分子量在各个胎龄组间差异无显著性。结论27～42周新生儿IgVH基因VH1～VH7家族重排均具有多样性;对同一个VH家族来说,28～42周各胎龄组IgVH基因重排无显著性差异。

逆转录PCR扩增杂交瘤细胞内特异性免疫球蛋白重链可变区基因

目的 利用细胞内逆转录PCR技术扩增杂交瘤细胞内的特异免疫球蛋白重链可变区基因片段。方法 用 10 %甲醛溶液固定杂交瘤细胞 ,以NP 40渗透化处理细胞后做逆转录PCR。结果 获得了大约 3 5 0bp的特异性免疫球蛋白重链可变区基因片段 ,与用同一对引物得到的常规逆转录PCR扩增产物一致。结论 此方法操作简便 ,效率高 ,可用于获得特定结构基因片段 。

抗2型登革病毒特异性免疫球蛋白重链可变区基因的扩增与纯化

提取抗２ 型登革病毒单克隆抗体杂交瘤细胞ｍ ＲＮＡ 和总ＤＮＡ，反转录聚合酶链反应（ＲＴ－ ＰＣＲ） 和ＰＣＲ 扩增并纯化特异性免疫球蛋白重链可变区（ＶＨ） 基因。琼脂糖凝胶和聚丙烯胺凝胶电泳观察结果，该ＶＨ 基因约４５０ ｂｐ 。实验证明，上述两种方法均是分离和扩增ＶＨ 基因的有效方法，但提取ＤＮＡ 后进行ＰＣＲ 较提取ｍＲＮＡ 进行ＲＴ－ ＰＣＲ经济、简单。

细胞内RT－PCR扩增免疫球蛋白重链可变区基因

通常，逆转录ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）需要高质量的ｍＲＮＡ，操作过程复杂，效率低且易受到ＲＮａｓｅ的破坏，为了简化操作，提高效率，用１０％甲醛盐溶液固定杂交瘤细胞，以Ｎｐ－４０渗透化处理细胞后做ＲＴ－ＰＣＲ，获得了大约３５０ｂｐ的特异性免疫球蛋白重链可变区基因片段，与用同一对引物得到的常规ＲＴ－ＰＣＲ扩增产物一致．这项技术可用于获得特定结构基因片段，连结并扩增嵌合蛋白基因及构建多克隆免疫球蛋白文库等．

人免疫球蛋白重链可变区基因的特征分析

目的:分析五类免疫球蛋白重链可变区基因的特征.方法:收集IMGT/LIGM-DB数据库中人类五类Ig重链可变区的基因序列,利用IMGT/HighV-QUEST分析其基因取用、V区AA变化、CDR3氨基酸长度和构成以及连接多样性.结果:IgM、IgG和IgE均较多地取用IGHJ4、IGHV1-69和IGHV5-51,且在IgM、IgG、IgA与IgE中可观察到几个相似的优势V-J配对.IgD具有较高的V区突变,主要体现在FR3区的高突变(AA变化值为7.2±2.4),而IgM的每个结构域的突变均明显低于其他类Ig.此外,IgD具有较高P插入发生率和插入核苷酸数明显多于其他四类Ig.结论:本研究从基因特征上描绘了人类五类Ig相互间的相似性与差异性,这些结果可为抗体工程领域提供重要参考数据.

儿童急性B淋巴细胞白血病免疫球蛋白重链可变区基因的分子特征

目的 探讨儿童急性B淋巴细胞白血病 (B ALL)的起源及其免疫球蛋白重链可变区(IgHV)上可被细胞毒性T淋巴细胞 (CTL)识别的表位 (epitope)。方法 PCR扩增 10 8例儿童ALL的 7个IgHV基因家族 ;PCR产物直接测序并翻译成氨基酸序列 ;利用生物信息资源分析B ALLIgHV基因重排类型、胚系基因片段利用及体细胞突变情况 ,并预测CTL细胞识别的表位。结果 6 6 %的ALL患儿检测到IgHV基因重排 ,其中单等位基因重排 37例 (5 2 .1% ) ,双等位基因重排 2 6例 (36 .6 % ) ,寡克隆基因重排 8例 (11.3% )。 4 0份B ALLIgHV基因序列中 ,不含终止密码子的读码框内 (inframe)重排 8份 (2 0 0 % )。重排利用最多的VH 家族为VH3、VH4和VH1,占 75 % ;VH4 5 9和VH4 34是VH4家族中利用频率最高的片段。优先利用的D家族为D3(35 .9% )和D2 (2 8.2 % ) ,D7 2 7的利用率 (15 .4 % )明显高于正常外周血淋巴细胞 (P =0 .0 2 )。JH6是B ALL利用最多的JH 基因片段 (47.5 % ) ,JH4 (2 7.5 % )次之。2 0 %的B ALL在DJH 连接区缺乏N核苷酸的插入 ,高于正常外周血淋巴细胞 (P =0 .0 2 )。 17.5 %B ALLIgHV基因发生替代突变 ,突变碱基散布于IgHV全长 ,互补决定区替代突变与静寂突变的比例≤1。 2 6例B ALLIgHV的HLA Ⅰ类分子结合肽 80

中国人群慢性淋巴细胞白血病免疫球蛋白重链可变区基因组成及突变分析

目的 研究中国慢性淋巴细胞白血病（chronic lymphocytic leukemia，CLL）患者免疫球蛋白重链可变区（immunoglobulin variable heavy chain region，IGVH）基因各个片段的组成以及突变情况。方法 应用多重PCR技术扩增64例CLL患者的IGVH基因片段，纯化PCR扩增产物后直接测序，应用IMGT／V-QUEST及IGBlast数据库分析，明确VH基因有无突变和突变位置，以及VH、DH、JH家族各个成员组成情况。结果 64例CLL患者中，VH3家族31例（48％）、VH4家族26例（41％）、VH1家族4例（6％）、VH2家族2例（3％）、VH7家族1例（2％）。44例患者发生体细胞突变，占CLL患者的69％；20例无突变，占CLL患者的3l％，其中6例（9％）VH基因的同源性为100％。VH4家族中有9例无突变（9／26，35％）；VH3家族中8例无突变（8／31，26％）；VH1家族中1例无突变（1／4，25％）。在所检测的CLI，标本中，VH4—34是最常见的VH基因片段，检测出8例（13％），其中无突变3例；其次为VH4—59，检测出7例（11％），无突变者3例。DH基因中DH3家族最常见，有25例（39％）；其中11例（11／20，55％）出现在无突变组中。无突变组中最常见的DH基因片段为DH3—10和DH3—22，各为4例（4／20，20％）。JH基因中JH6家族最常见，检测出23例（36％），其中9例出现在无突变组中（9／20，45％）。结论 中国CLL患者IGVH基因家族表达比例和突变情况与西方国家存在显著差异，推测可能与不同的种族和环境中的抗原选择有关，其预后意义有待进一步探讨。

抗ORFV免疫球蛋白重链可变区基因序列的RT-PCR扩增及其多样性

利用RT-PCR方法从羊传染性脓疱病毒（Orf virus,ORFV）感染绵羊脾脏总RNA中扩增获得免疫球蛋白（immunoglobulin,Ig）重链可变区cDNA克隆,随机挑选52个阳性克隆进行测序,获得49条完整的不重复序列。序列比对结果显示,49条序列的核苷酸同源性分别为84.3%（H7与H38）-100%（H5与H6）不等;绵羊IgH可变区V片段氨基酸聚类结果显示,克隆H1-H49的VH区段自动聚类为2个相对独立的单位。通过BLAST-N程序在GenBank数据库在线搜索,并结合其他参考序列进行比较分析,分析数据显示,D片段从9到46个碱基长度不等,无论是在核苷酸还是氨基酸序列上,其同源性均存在高度的变异性;结合其亲水性分布图可知,可变区的亲水性氨基酸主要分布在VH区域和D高变区,对照抗原指数图和表面可能性图,亲水性强的VH区域和D高变区易形成抗原决定簇。

史氏鲟免疫球蛋白重链可变区序列及多样性

为了研究史氏鲟免疫球蛋白重链可变区基因的组织结构和多样性,采用RTPCR技术从史氏鲟(Acipenserschrenckii)脾脏总RNA中获得了免疫球蛋白重链可变区cDNA克隆,随机挑取31个阳性克隆进行测序。结果表明:所有序列相同率高于75%,前导肽相同率高于90%,应属于同1个VH家族。其变异主要存在于互补性决定区,特别是CDR3区。在D片段序列中发现大量保守的基因序列(motif)。并发现多个VH基因片段可以共用一个J片段的现象。在基因组DNA重排过程中,VH片段可以与任意的D和J片段结合。此外,史氏鲟免疫球蛋白重链可变区的VH,D和J片段的随机重排外,外切核酸酶作用,以及在重排位点大量N,P片段的插入现象,都大大增加了鲟鱼免疫球蛋白的多样性。

犬免疫球蛋白IgM重链恒定区基因序列研究

为了探讨犬免疫球蛋白IgM所包含的生物学信息及其与其他物种的亲缘和进化关系,对犬IgM重链恒定区进行了研究。采用3′RACE及RT-PCR方法,获得了犬IgM重链恒定区全长基因（包括分泌型和跨膜型）,犬具有哺乳动物IgM的典型特征,其恒定区包括CH1-CH4 4个区,其中CH3与CH4区序列相对保守,分泌尾的同源性更高,靠近分子的羧基端同源性有增加的趋势。种系发生树分析发现,犬与大熊猫及猫等食肉目动物位于一个进化树分支上。DNAMAN软件分析显示,犬与大熊猫和猫的核酸序列同源性分别为87.88%和81.58%。

哺乳动物免疫球蛋白重链恒定区基因研究进展

免疫球蛋白分子是由2条相同的重链和2条相同的轻链所构成的多肽链结构,其中重链有5种,与之相应的免疫球蛋白分子为5类,整个免疫球蛋白分子可分为恒定区和可变区2部分。由于免疫球蛋白重链恒定区在免疫过程中起多种效应作用,目前已对多种动物的免疫球蛋白重链恒区基因进行了研究,如哺乳动物、鱼类、两栖类、爬行类、鸟类等。了解哺乳动物免疫球蛋白的结构、功能起到了重要的作用,也对了解免疫系统的起源和进化提供依据。

套细胞淋巴瘤中免疫球蛋白重链可变区基因突变状态与预后的关系

推荐理由：套细胞淋巴瘤（MCL）是一种侵袭性8细胞恶性肿瘤，但新近发现部分MCL患者临床呈惰性。MCL特征性染色体异常时t（11；l4）（q13：q32），这一易位将第11号染色体的cyclin D1基因置于第14号染色体免疫球蛋白（Ig）重链转录增强子下游，导致cyclin D1蛋白高表达。

应用原位突变技术构建免疫球蛋白K链可变区基因克隆及表达载体

设计并合成了一对聚合酶链反应（ＰＣＲ）的通用引物，可以从小鼠杂交瘤的ｃＤＮＡ中扩增出免疫球蛋白（Ｉｇ）Ｋ链可变区（ＶＫ）基因。利用这一对引物和原位突变技术，在小鼠的一个ｇｅｎｏｍｉｃＶＫ基因的两端分别引入一个ＤＮＡ限制性内切酶的酶切位点，构建成一个ＩｇＶＫ基因的通用型克隆载体。并将ＶＫ基因片段同人ｋ链基因区基因片段重组，构建成人－鼠嵌合ｋ链基因表达载体。

5种鲟鱼免疫球蛋白重链恒定区序列研究

为了探讨几种鲟鱼免疫球蛋白(IgM)所包含的信息与其亲缘和进化之间的关系,分别对俄罗斯鲟(Acipenser.gueldenstaedtii)、小体鲟(A.ruthenus)、施氏鲟(A.schrenckii)、中华鲟(A.sinensis)和欧鳇(Husohuso)的IgM重链(IgH)恒定区进行了研究。采用RT-PCR的方法对IgH核酸序列进行了克隆,通过软件获得了相应的IgH氨基酸序列。在分别对这5种鲟鱼免疫球蛋白重链恒定区4个区(CH1～CH4)进行研究后发现,其CH4区氨基酸序列相似性最高。通过对CH4区序列氨基酸变异期望值(Kaa),物种分化时间(T)及物种间系统进化树(PhylogeneticTree)等参数的分析,将克隆的5种鲟鱼IgH恒定区序列与已发表的西伯利亚鲟同源序列比对(源于NCBI序列)后发现:西伯利亚鲟与俄罗斯鲟、施氏鲟与欧鳇、小体鲟各构成一个分支,并与中华鲟相对。实验结果从体液免疫系统的演化这个角度,反映了被研究的鲟鱼物种间的分类地位、地理分布及进化关系之间的联系。