5种鲟鱼免疫球蛋白重链恒定区序列研究

为了探讨几种鲟鱼免疫球蛋白(IgM)所包含的信息与其亲缘和进化之间的关系,分别对俄罗斯鲟(Acipenser.gueldenstaedtii)、小体鲟(A.ruthenus)、施氏鲟(A.schrenckii)、中华鲟(A.sinensis)和欧鳇(Husohuso)的IgM重链(IgH)恒定区进行了研究。采用RT-PCR的方法对IgH核酸序列进行了克隆,通过软件获得了相应的IgH氨基酸序列。在分别对这5种鲟鱼免疫球蛋白重链恒定区4个区(CH1～CH4)进行研究后发现,其CH4区氨基酸序列相似性最高。通过对CH4区序列氨基酸变异期望值(Kaa),物种分化时间(T)及物种间系统进化树(PhylogeneticTree)等参数的分析,将克隆的5种鲟鱼IgH恒定区序列与已发表的西伯利亚鲟同源序列比对(源于NCBI序列)后发现:西伯利亚鲟与俄罗斯鲟、施氏鲟与欧鳇、小体鲟各构成一个分支,并与中华鲟相对。实验结果从体液免疫系统的演化这个角度,反映了被研究的鲟鱼物种间的分类地位、地理分布及进化关系之间的联系。

鱼类免疫球蛋白重链基因与基因座的研究进展

归纳了脊椎动物中报道的所有的免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)的种类,重点阐述了鱼类免疫球蛋白重链(heavy chain,H)基因及其基因座的研究进展。硬骨鱼类中目前已发现有IgM、IgD、IgZ/IgT以及一个嵌合体IgM-IgZ,软骨鱼类中目前只报道了3种免疫球蛋白基因,即IgM、IgNAR和IgW。已报道的硬骨鱼类IgH基因座并非都是以传统的"易位子"排列方式进行排列,一般以(VH)n-(D)n-(JH)n-(Cζ)-(D)n-(JH)n-(Cμ)-(Cδ)的形式排列,不同硬骨鱼类的IgH基因座的结构特点、基因座中重链基因的数目以及基因座的拷贝数都存在一定差异。软骨鱼类中IgH基因座则是以"多簇"形式排列,即VH-D-D-JH-CH区段或VH-D-D-D-JH-CH区段在基因组中作为统一体多次复制。在不同种类的硬骨鱼类中,Ig表达器官或组织方面的研究结果并不完全相同,但一般在免疫器官如胸腺、头肾和脾脏中均有表达。目前对鱼类免疫球蛋白的研究尚不全面,要全面阐明鱼类B细胞个体发生、鱼类免疫球蛋白的结构、抗体产生的规律以及这些不同抗体在免疫反应中的作用等,都需要更进一步的研究。

免疫球蛋白重链和T细胞受体γ基因重排在淋巴细胞来源肿瘤中检测的临床意义

目的 探讨克隆性免疫球蛋白重链 (Ig H )和 T细胞受体γ(TCRγ)基因重排在淋巴细胞来源的肿瘤的检测意义。方法 用多聚酶链反应 (PCR)方法检测 15例急性淋巴细胞性白血病 (AL L )、2 5例非霍奇金淋巴瘤(NHL )、10例多发性骨髓瘤 (MM)、4例慢性 B细胞性淋巴细胞性白血病 (B- CL L )和 2 0例正常人骨髓、周围血和(或 )淋巴结中单个核细胞 (MNCs) Ig H、TCRγ基因重排。结果 Ig H和 (或 ) TCRγ基因重排在淋巴细胞来源的恶性肿瘤检出阳性率为 92 .6 % (5 0 / 5 4) ,在 NHL为 84.0 % (2 1/ 2 5 ) ,在 AL L为 10 0 % (15 / 15 )。Ig H重排在 T- NHL和 B-NHL中阳性率分别为 2 0 .0 % (2 / 10 )和 86 .7% (13/ 15 ) ,TCRγ重排在 T- NHL和 B- NHL中分别为 80 .0 % (8/ 10 )和 5 3.3% (8/ 15 )。2 2例 NHL患者骨髓形态学检查阳性率 5 0 .0 % (11/ 2 2 ) ,基因检测阳性率 81.8% (18/ 2 2 ) ,两者差异有显著性 (P<0 .0 5 )。 10例 MM和 4例 B- CL L均检出 Ig H重排。 2 0例正常人未检测出克隆性 Ig H、TCRγ基因重排。结论 Ig H、TCRγ基因重排检测可用于 NHL、AL L、MM和 CL L等淋巴细胞来源的肿瘤的诊断和鉴别诊断 ,并判断 NHL的早期骨髓浸润和临床预后。 TCRγ、Ig H基因重排在 T。

欧洲鳗鲡免疫球蛋白M重链基因的原核表达与不同组织中表达变化的定量分析

通过RT-PCR技术从欧鳗(Anguilla anguilla)脾脏总RNA中获得了编码成熟免疫球蛋白(Ig)重链的基因序列(GenBank accession No.GQ249838),该序列长1 686 bp,编码562个氨基酸残基,分子质量为62.2 ku。将该基因片段与pET-his载体连接构建原核表达载体,在大肠杆菌BL21中诱导表达,其表达产物经SDS-PAGE和Western-blotting分析表明新增的66 ku蛋白条带与预期值相符,且能够与兔抗欧鳗IgM血清发生强烈的特异性反应,证实了欧鳗免疫球蛋白重链(IgH)基因能够在大肠杆菌中以包涵体形式高效表达;利用荧光定量PCR检测了Ig基因在欧鳗背肌注射山羊IgG前后不同组织的表达水平,结果显示欧鳗在免疫前后其肾脏与脾脏Ig基因的表达量均明显高于其它组织,在鳃、肌肉中的表达量也较高,而在肝脏、心脏中的表达量较低。此外,对同一组织免疫前后的Ig基因表达量比较发现,除肝脏外,其它组织Ig基因表达水平在免疫后均上升,在鳃和肌肉中达到显著水平,而在脾脏中达到极显著水平。

多发性骨髓瘤患者免疫球蛋白重链基因重排的检测及意义

目的 探讨免疫球蛋白重链 (IgH)基因重排在多发性骨髓瘤 (MM)诊治中的应用。方法 采用半巢式PCR技术 ,分别用MM患者的IgH基因的CDR2和CDR3区的两组引物 ,对 6 1份MM患者的骨髓和外周血单个核细胞进行扩增。结果 2 7份骨髓标本中 ,IgH基因重排Fr2A阳性率为 70 .4 % (19/ 2 7) ,34份外周血标本阳性率 5 8.8% (2 0 / 34)。骨髓标本的Fr2A阳性率略高于外周血标本 ,而Fr3A的阳性率两者无明显差异。MM患者的IgH基因重排与Ig型别、临床分期及浆细胞数有关。IgG型IgH基因重排阳性率高于IgA型及轻链型 ;III期患者IgH基因重排阳性率高于I、II期患者 ;浆细胞数大于 5 %时 ,IgH基因重排阳性率略高 ;7例达临床完全缓解的患者中 ,仅有 1例IgH基因重排Fr2A、Fr3A均转为阴性。结论 PCR技术检测MM患者IgH基因重排可作为诊断、疗效观察、预后判断及微小残留病监测的参考指标之一。

史氏鲟免疫球蛋白重链可变区序列及多样性

为了研究史氏鲟免疫球蛋白重链可变区基因的组织结构和多样性,采用RTPCR技术从史氏鲟(Acipenserschrenckii)脾脏总RNA中获得了免疫球蛋白重链可变区cDNA克隆,随机挑取31个阳性克隆进行测序。结果表明:所有序列相同率高于75%,前导肽相同率高于90%,应属于同1个VH家族。其变异主要存在于互补性决定区,特别是CDR3区。在D片段序列中发现大量保守的基因序列(motif)。并发现多个VH基因片段可以共用一个J片段的现象。在基因组DNA重排过程中,VH片段可以与任意的D和J片段结合。此外,史氏鲟免疫球蛋白重链可变区的VH,D和J片段的随机重排外,外切核酸酶作用,以及在重排位点大量N,P片段的插入现象,都大大增加了鲟鱼免疫球蛋白的多样性。

禽鸟免疫球蛋白重链基因研究进展

文章从禽鸟免疫球蛋白重链基因的结构、类型、多样性机制出发,总结了目前禽鸟中免疫球蛋白重链基因的研究情况,发现目前禽鸟免疫球蛋白重链基因的研究主要集中在鸡形目、雁形目、雀形目和平胸总目在内的部分代表性物种,禽鸟中:普遍存在IgM、IgA、IgY3种免疫球蛋白重链基因类型,分别由μ、α、γ基因所编码;基因座为典型的易位子结构Vn-Dn-Jn-Cμ-Cα-Cγ;禽鸟中普遍缺失编码IgD的δ基因;α基因在基因座上反向插入;免疫球蛋白的多样性主要通过基因转换进行。雁形目中额外高表达IgY(△Fc),该转录本缺失γ基因的第三、第四个外显子,可能导致雁形目特殊的免疫机制。IgY(△Fc)的产生机制及功能的全面研究将有助于开辟禽病治疗的新机制。

B细胞淋巴瘤患者外周血免疫球蛋白重链基因重排检测

目的:评价B细胞淋巴瘤(B-NHL)患者外周血免疫球蛋白重链(IgH)基因重排检测的应用价值。方法:收集慢性淋巴结炎患者(10例)、健康体检者(16例)和病理活检确诊为B-NHL的患者(28例)外周血,PCR法检测IgH基因重排,观察B-NHL患者治疗前后IgH基因重排的变化。结果:B-NHL患者IgH基因重排阳性率为67.9%(19/28),高于骨髓涂片细胞形态学检查阳性率32.1%(9/28),差异有统计学意义(P<0.05),健康体检者及慢性淋巴结炎患者均为阴性。15例外周血单克隆IgH基因重排阳性者,治疗后10例完全缓解(CR)。10例CR中,9例IgH基因重排转阴。结论:外周血IgH基因重排在B-NHL辅助诊断和预后评估等方面具有重要的临床价值。

石蜡包埋B细胞性恶性淋巴瘤组织克隆性免疫球蛋白重链基因重排检测研究

[目的]探讨克隆性免疫球蛋白重链(IgH)基因重排在B细胞性非霍奇金淋巴瘤(B鄄NHL)诊断中的价值。[方法]采用半巢式PCR方法,对81例B鄄NHL病例,36例反应性增生及12例非淋巴瘤组织样本进行克隆性免疫球蛋白重链基因重排检测,以上病例均为经福尔马林固定的石蜡包埋组织。[结果]81例B鄄NHL中68例IgH阳性(阳性率为83.95%),36例反应性增生均为多克隆性,12例非淋巴瘤组织样本结果IgH均为阴性。[结论]克隆性免疫球蛋白重链基因重排检测可以作为诊断恶性B细胞性非霍奇金淋巴瘤的有效分子标志。

间期荧光原位杂交检测多发性骨髓瘤13号染色体长臂缺失和免疫球蛋白重链基因易位

目的探讨多发性骨髓瘤（MM）患者13号染色体长臂缺失[del（13q）]和免疫球蛋白重链（IGH）基因易位[t（14q）]的临床价值。方法采用直接免疫磁珠法分选骨髓瘤细胞,应用间期荧光原位杂交（FISH）技术对24例MM患者进行del（13 q）和t（14 q）的检测。结果11例（45.83%）为del（13 q）、9例（37.50%）为t（14q）,5例（20.83%）为两个位点均异常、15例（62.50%）为至少1个位点异常。单因素分析显示,治疗有效组（n=14）del（13q）的阳性率为35.71%、无效组（n=9）为66.67%,两组比较差异无显著性（P=0.214）;治疗有效组t（14q）的阳性率为21.43%、无效组为66.67%,两组比较差异无显著性（P=0.077）。多因素分析显示,del（13q）（OR=5.761,95%CI 0.500-66.391,P=0.160）、t（14q）（OR=6.576,95%CI 0.580-74.614,P=0.129）和校正血清钙水平（OR=8.080,95%CI 0.738-88.427,P=0.087）是相对独立的、影响MM疗效的负性因素。结论间期FISH是一种检测MM患者骨髓瘤细胞突变的敏感方法,具有临床应用价值。del（13q）、t（14q）以及校正血清钙水平对判断临床疗效和预后具有指导作用。

西伯利亚鲟免疫球蛋白M重链区mRNA的组织分布和细菌感染后的表达

根据GenBank登录的西伯利亚鲟Acipernser baerii免疫球蛋白M重链区mRNA（IgHM mRNA）设计引物,进行SYBR green实时定量。结果表明：鲟的脑、鳃、性腺、心脏、后肠、肝脏、肌肉、脾脏8种组织中,IgHM mRNA在脾脏中表达最高,在肝脏和心脏中表达较少,在脑、鳃、性腺、后肠、肌肉5种组织中几乎不表达;在水温22.6～24.5℃时,按100 g体质量注射0.1 mL菌液,给体质量为（260.2±37.8）g的西伯利亚鲟注射浓度为2.0×107CFU/mL的维氏气单胞菌Aeromonas veronii,注射后40 h鱼开始死亡,62 h后停止死亡,注射后直至62 h时,处理组脾脏IgHM mRNA表达量一直处于对照组水平,93 h时处理组脾脏IgHM mRNA显著升高（P〈0.05）,为93 h对照组含量的3.7倍,说明机体已经开始特异性免疫应答。

免疫球蛋白重链和T细胞受体γ基因重排在非霍奇金淋巴瘤中检测的临床意义

目的 :探讨免疫球蛋白重链 ( Ig H)和 T细胞受体 γ( TCRγ)基因重排在非霍奇金淋巴瘤( NHL )中的检测意义。方法 :用 PCR方法检测 2 5例 NHL和 1例反应性淋巴结炎患者 ,及 2 0例正常人骨髓、周围血和 /或淋巴结单个核细胞 ( MNCs)中克隆性 Ig H、TCRγ基因重排。结果 :克隆性Ig H和 /或 TCRγ基因重排在 2 5例 NHL 中检出为 84.0 % ( 2 1 / 2 5 ) ;克隆性 Ig H基因重排在 B-NHL和 T-NHL中检出分别为 86.7% ( 1 3 / 1 5 )和 2 0 .0 % ( 2 / 1 0 ) ,克隆性 TCRγ基因重排分别为5 3 .3 % ( 8/ 1 5 )和 80 .0 % ( 8/ 1 0 )。 1例反应性淋巴结炎和 2 0例正常人均未检测到 Ig H和 TCRγ基因重排。结论 :Ig H、TCRγ基因重排检测有助于 NHL 的诊断和鉴别诊断 ,及发现 NHL

新生儿有限的免疫球蛋白重链可变区基因多样性

目的 比较正常新生儿和健康成人免疫球蛋白重链可变区 (IgH)基因的可变区基因片段 (VH)、多样化基因片段 (D)和连接区基因片段 (JH)的使用 ,VH 上的突变 ,N区 -D基因片段 -N区 (NDN)长度以及开放性阅读框 (ORF)等情况 ,探讨新生儿IgH重排基因特征及其多样性。 方法 10例正常足月新生儿脐血和 8例健康成人外周血DNA被抽提 ,IgH基因被扩增、克隆和测序。结果 ①对于VH 和D的使用 ,新生儿和成人相似 ,即VH3使用率最高、VH7使用率最低 ,D2被优先使用 ;而对于JH 的使用 ,新生儿和成人不同 ,即新生儿偏倚使用JH3 ,成人使用JH 则趋向随机化。②新生儿和成人IgH重排基因的VH-D -JH 连接点处均有N区插入 ,但新生儿的NDN长度 [(2 1.2± 5 .7)bp]短于成人 [(2 6 .6± 6 .5 )bp]。③新生儿的IgH基因序列无碱基缺失而成人存在 ;新生儿IgH基因少有体突变 (2 9.2 % ) ,而 77.1%的成人IgH基因存在体突变。④新生儿有ORF的IgH基因序列为91.7% ,而成人为 10 0 %。结论 正常新生儿和健康成人的IgH重排基因序列存在着异型性。新生儿的IgH重排基因已处于活化状态 ,但由于VH,D和JH 的偏倚使用 ,NDN短以及少有突变 ,其多样性有限。

乌鳢免疫球蛋白M重链和免疫球蛋白轻链的克隆与特征分析

应用RACE-PCR方法克隆并鉴定了乌鳢免疫球蛋白M(i mmunoglobulin M,Ig M)重链(H)和免疫球蛋白轻链(L)全长cDNA。乌鳢IgH cDNA全长1 912个核苷酸(nt),包含1 797 nt的开放阅读框,编码598个氨基酸(aa)。IgH恒定区(CH)均包含1对保守的半胱氨酸残基形成链内二硫键,其中CH1区氨基末端存在保守的半胱氨酸残基与轻链形成链间二硫键,4个推测的N-糖基化位点(NXT和NXS)则分别位于CH1、CH2和CH4。序列比对发现乌鳢IgHCH1与CH2交界处氨基酸序列的插入使铰链区肽段较其他硬骨鱼IgH长,此外IgH CH4区羧基末端参与单体间聚合的半胱氨酸被赖氨酸替换,这反映乌鳢IgH分子结构的特异性。序列相似性比较显示乌鳢IgH与点带石斑鱼、黑鳍冰鱼、牙鲆、虹鳟的相似性依次为55%、50%、45%和36%,与斑马鱼类的相似性较低(为28%)。乌鳢IgL cDNA全长941 nt,包含729 nt的开放阅读框,编码242个aa。轻链可变区(VL)和恒定区(CL)均包含保守的半胱氨酸,形成链内和链间二硫键。序列比对分析表明乌鳢IgL与五条鰤和花狼IgL的相似性为78%和77%,而与斑点叉尾鮰和虹鳟的相似性仅为32%和31%。根据IgH和IgL恒定区氨基酸序列构建系统进化树,鱼类IgH形成硬骨鱼和软骨鱼两大分支,其中乌鳢IgH与河豚IgH的亲缘关系较近;硬骨鱼IgL系统树显示3个主要的分支:L1、L2和L3,乌鳢IgL位于L1分支的L1 A亚类。

石蜡包埋组织恶性淋巴瘤免疫球蛋白重链基因重排研究

目的探讨免疫球蛋白重链基因重排现象应用于石蜡包埋非何杰金氏淋巴瘤（NHL）病理诊断及鉴别诊断中的意义，分析影响实验结果的可能因素。方法应用B细胞性淋巴瘤细胞株Raji作为阳性对照，免疫球蛋白重链V区及J区特异性引物，单轮PCR扩增方法对存档的29例恶性淋巴瘤（B细胞性对例，T细胞性2例），6例淋巴组织反应性增生，2例上皮性肿瘤石蜡包埋组织进行了研究。结果70．4％（19／27）的B细胞性淋巴瘤免疫球蛋白重链基因存在重排现象，并均表现为单克隆性。而T细胞性淋巴瘤以及非淋巴瘤性病变无重排现象。本研究所用方法免疫球蛋白重链基因重排的阳性检出率低于半筑巢式peR扩增（80％）。结论免疫球蛋白重链基因重排在B细胞性淋巴瘤具有特异性，能够用于该类疾病诊断及鉴别诊断中。

罗非鱼免疫球蛋白(IgM)重链基因全长cDNA序列分析

从已经构建的罗非鱼白细胞cDNA文库中测定获得罗非鱼免疫球蛋白(IgM)重链的cDNA序列,全长1885bp,有一个完整ORF阅读框长1770bp,5′-UTR为29bp,3′-UTR为86bp,编码588个氨基酸。罗非鱼与大黄鱼、斜带石斑鱼、南极鳕鱼、乌鳢、鳜鱼、伯氏豚鰕虎鱼、牙鲆、花狼鱼、硬头鳟的IgM重链氨基酸序列有较高的同源性,最高达到69%,表明已经获得罗非鱼IgM重链基因;对所得氨基酸进行二级结构预测发现,罗非鱼IgM重链基因全长cDNA序列所编码的氨基酸分子量为41453.94 Da。该试验结果为罗非鱼IgM重链基因功能的实验性鉴定工作奠定了基础。

应用原位PCR检测小儿急性白血病免疫球蛋白重链重排

目的 :探讨间期细胞原位 PCR方法在小儿急性白血病研究中的临床应用价值。方法 :采用 dig- 11- d U TP标记免疫球蛋白重链 (Ig H)第三互补决定区 (CDR- )的引物 ,建立直接原位 PCR方法 ,检测小儿急性白血病患儿间期淋巴细胞。结果 :2 2例淋巴细胞性白血病初诊患儿中 ,18例外周血间期淋巴细胞可检测到 Ig H基因重排 ;3例骨髓完全缓解 ,外周血间期淋巴细胞原位 PCR仍有阳性细胞 ,3个月复发。结论 :间期细胞原位 PCR技术能敏感、准确地检测小儿 B细胞系急性淋巴细胞性白血病 。

免疫球蛋白重链和T细胞受体(γ)基因重排与慢性粒细胞白血病预后相关性探讨

目的探讨IgH和TCRγ基因重排与慢性粒细胞白血病(CML)预后的相关性。方法采用PCR法对53例不同时期CML患者免疫球蛋白重链(IgH)和T细胞受体(TCR)γ基因重排进行研究。结果检出IgH基因重排阳性27例,TCRγ基因重排阳性3例,其中IgH Fr3A克隆性重排在CML慢性期(42.3％)远较加速期为少(76.6％),二者差异有显著意义(P<0.05)。结论CML各期出现免疫球蛋白重链(IgH)和T细胞受体(TCR)γ基因重排与预后有一定相关性。

荧光定量PCR分析弥漫大B细胞淋巴瘤免疫球蛋白重链基因重排表达

背景与目的:大多数B细胞淋巴瘤患者综合治疗后可以达到完全缓解,但是一半以上的患者终究要复发。复发来源于体内残留的耐药淋巴瘤细胞,即微小残留病变。但临床上发现IgH基因重排阳性患者并非都出现复发或远处浸润。因此,推测阳性患者是否复发,可能与IgH基因重排的表达量有关。本研究探讨荧光染料标记的即时定量PCR方法检测弥漫大B细胞淋巴瘤免疫球蛋白重链基因(IgH)重排的可行性及临床意义。方法:44例DLBCL患者的57份新鲜骨髓标本用于检测IgH基因重排,Namalwa细胞系作阳性对照,U-937细胞系作阴性对照。β-actin作内参照,SYBRGreen荧光染料标记的实时荧光定量PCR方法分别检测IgH基因重排CDRIII。结果:分析融解曲线可以确定IgH基因重排产物的特异性。荧光定量PCR检测IgH基因重排的阳性率63.2%。IgH/β-actin阳性表达量在0.01～4131.69,中位数0.42。Ⅰ/Ⅱ期患者IgH基因重排表达量中位数为0,Ⅲ、Ⅳ期患者IgH基因重排表达量中位数为0.35,经统计学检验,两组患者之间差异有显著性(P=0.018)。LDH值高于正常组,IgH基因重排表达量为0.39,LDH值低于正常组,IgH基因重排表达量为0.01,经非参数检验,两组患者之间差异有显著性(P=0.046)。结论:荧光染料标记的定量PCR方法可用于弥漫大B细胞淋巴瘤的骨髓微小残留病变的检测。检测骨髓IgH基因重排,可以协助分期。