巴氏杀菌牛乳中免疫球蛋白G含量和乳过氧化物酶活性

免疫球蛋白G和乳过氧化物酶是牛乳中2种生物活性物质,研究在巴氏杀菌牛乳加工过程中及货架期内的免疫球蛋白G含量和乳过氧化物酶活性变化。结果表明:采用65℃以下的均质温度及15~25 MPa的均质压力处理牛乳对2种生物活性物质影响较小;72~76℃、15 s处理可更好地保留2种生物活性物质;采用膜滤除菌方式比一般巴氏杀菌效果更佳。巴氏杀菌牛乳中的免疫球蛋白G含量和乳过氧化物酶活性不会随着保存时间的延长而显著降低,但采用透明包装的产品长期暴露在光照下会造成乳过氧化物酶部分失活。

免疫球蛋白G-葡萄糖脱氢酶结合物的研究

介绍一种新的酶结合物的制备方法,研究了该结合物在酶联免疫吸附测定中的初步应用。通过2-亚氨硫杂戊烷的修饰反应,在葡萄糖脱氢酶、抗体(IgG)分子上分别引入新的游离巯基。巯基化的葡萄糖脱氢酶和免疫球蛋白G之间,通过双功能试剂二马来酰亚胺甲醚(进行)偶联,偶联产物由Sephacryl S-300柱层析纯化。按非竞争性固相双抗体夹心法,将精制的IgG-葡萄糖脱氢酶(A)结合物用于人白蛋白(Ⅰ),人甲胎蛋白(Ⅱ)和牛胰岛素(Ⅲ)的定量检测。在0～10 ng/mL范围内,Ⅰ和Ⅱ与A活性均呈良好的线性相关;但Ⅲ与A活性之间没有任何相应关系。

猪血浆蛋白粉中IgG含量的酶联免疫检测方法研究

猪血浆蛋白粉已经成为断奶仔猪理想和必需的蛋白饲料来源。评价血浆蛋白粉质量的重要指标就是其中IgG的含量。研究通过制备猪IgG单克隆抗体,调试优化后建立了相应的酶联免疫检测方法。该方法最低检测浓度为10μg/g,阴性血浆蛋白粉添加10（1%）、100（10%）、200mg/g（20%）猪IgG标准品后用本方法测定回收率为73.1%～104.6%,批内、批间变异系数小于15%,可基本满足血浆蛋白粉质量监控需要。

酶联免疫吸附法测定SCID小鼠血清中IgG的含量

为判明ＳＣＩＤ小鼠繁育过程中有无“渗漏”现象，采用了酶联免疫吸附法，（双抗夹心法）测定ＳＣＩＤ小鼠血清中ＩｇＧ含量。结果表明：ＳＣＩＤ小鼠每毫升血清中ＩｇＧ含量都低于１μｇ，未出现“渗漏”。而ＢＡＬＢ／ｃ裸小鼠及杂合正常小鼠每毫升血清中ＩｇＧ含量都大于３ｍｇ。本法操作简便，较为理想。

人叶酸受体自身抗体IgG酶联免疫吸附试验检测方法的建立及评价

目的：建立血浆叶酸受体自身抗体免疫球蛋白G（immunoglobulin G，IgG）的酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay ，ELISA）检测方法，并对其进行评价。方法：从正常人的胎盘样品中提取叶酸受体蛋白并将其纯化，以纯化的人源叶酸受体蛋白为包被蛋白，以单克隆抗体为检测二抗，建立血浆叶酸受体自身抗体IgG的间接ELISA检测方法，评价其灵敏度、精密度及稳定性。随机选取24例血浆标本，同时以商品化的牛源叶酸结合蛋白与本方法中提取的人源叶酸受体蛋白作为包被蛋白，采用ELISA方法分别检测血浆中叶酸受体抗体IgG的水平，比较两种方法的检测结果。结果：标准曲线可检测的IgG浓度范围为6．25×10-4～8．00×10-2（标准品采用健康人混合血浆，IgG浓度定为1），最低检测限为3．13×10-4，批内差异为2．74％～8．07％，批间差异为4．16％～8．23％。同一样本不同稀释倍数下IgG的检测结果均在可接受范围内，结果较稳定。血浆标本的牛源包被蛋白与人源包被蛋白检测方法对比结果显示两种方法高度相关，相关系数为0．954（P＜0．001）；人源包被蛋白检测结果比牛源包被蛋白高14％。结论：成功建立以人源叶酸受体蛋白作为包被蛋白、针对血浆叶酸受体自身抗体IgG水平的ELISA检测方法，该方法检测灵敏，重复性好，可用于大样本量的人群检测。

直接酶联免疫吸附法检测猪血清IgG的影响因素

直接酶联免疫吸附法检测猪血清中G型免疫球蛋白（IgG），最小检测量为10ng，最适检测范围纯IgG为10～60ng，猪血清IgG为10～40ng。酶标抗体最适稀释度为1／3500。酶标板内与酶标板间平行测定变异系数均小于5％。

IgG3酶联免疫分析方法的建立及初步应用研究

目的：建立IgG3酶联免疫分析（ELISA）方法，探讨IgG3在炎症性疾病患者血清中的水平变化。方法：用兔抗人IgG3的多克隆抗体包被成固相酶标板，以识别结合待测标本中的IgG3，再用此多克隆抗体标记生物素（Bio-Ab），用亲和素标记辣根过氧化物酶（HRP-A），向固相酶标板中加入标准品或待测品，反应、洗涤后，加入Bio-Ab，反应、洗涤后，加入HRP-A，反应、洗涤后，酶标板上形成Ab-Ag-Ab-Bio-A-HRP复合物，加酶底物显色，用酶标仪在相应波长下测定光密度（OD值），根据标准曲线，计算出待测标本中的IgG3含量。结果：该法测定范围为（1．875-60）ng／ml，最低检出量1．5ng／ml，批内和批间误差分析〈8％和10％。用该法测得正常青年人血清IgG3含量为（12.91±4．25）ng／ml（n=64），风湿病患者为（11．23±4．64）ng/ml（n=64），肺部感染患者为（9．32±2．00）ng／ml（n=24），后两组血清IgG3水平均显著低于正常青年人（P〈0．05）。结论：我们建立的IgG3 ELISA方法稳定、简便，特异性和灵敏度高，适于检测人血清ISG3水平的变化。

单克隆抗体酶联免疫吸附抑制试验测定G2m(n)因子及成都地区汉族频率调查

作者应用单克隆抗体,首次建立了检测人类免疫球蛋白同种异型 G2m(n)因子的酶联免疫吸附抑制试验。并调查了成都地区汉族群体 G2m(n)因子的频率。在被调查的517份血清中,G2m(n)因子阳性率为79.69%。由此计算出 G2m(n)基因频率为0.5493,方差为0.0004。

抗幽门螺杆菌牛初乳IgG酶解特性的研究(in Vitro)——抗幽门螺杆菌牛初乳IgG抗胃蛋白酶及胃酸屏障的研究

采用幽门螺杆菌全菌抗原免疫妊娠母牛,取牛初乳,离心、过柱得到纯化的免疫球蛋白G(IgG),经非还原态的SDS-PAGE(十二烷基磺酸钠聚丙烯凝胶电泳)和HPLC(高效液相色谱)分析,达到电泳纯和HPLC纯。纯化后的IgG在体外经胃蛋白酶和胃酸处理后,经还原态的SDS-PAGE,HPLC和间接ELISA法检测,结果表明在pH4.5以上的环境中,牛初乳中的抗幽门螺杆菌IgG对胃蛋白酶和胃酸屏障有一定的抗性。

食物不耐受免疫球蛋白G抗体检测结果观察与分析

目的探讨血清中14种食物不耐受特异性免疫球蛋白G(IgG)抗体与临床疾病的关系。方法用酶联免疫法检测2010年373例变态反应性皮肤病患者14种特异性IgG抗体水平。结果患者检测出特异性IgG抗体阳性为337例,阳性率为90.35%,其中以鸡蛋、牛奶阳性率为最高,分别占24.3%和20.8%,与其他组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论测定食物不耐受特异性IgG抗体对找出和发现引起疾病的发病原因,在临床疾病诊断和避免食入不耐受食物有重要意义。

下调肿瘤源性免疫球蛋白G表达对胃癌细胞增殖的影响及其机制研究

目的探索肿瘤源性免疫球蛋白G(IgG)表达对胃癌细胞增殖的影响和Na^(+)-K^(+)-ATP酶在其中所扮演的角色。方法用siRNA干扰技术下调胃癌细胞SGC-7901和HGC-27中IgG表达后:①用免疫印迹和RT-qPCR技术在蛋白水平和mRNA水平检测IgG表达情况;②分别用CCK-8法和镜下细胞拍照计数法检测以上胃癌细胞的增殖能力;③建立稳定表达Control shRNA和IGHG1 shRNA的HGC-27胃癌细胞系,完成裸鼠成瘤实验;④用比色法检测以上细胞中总ATP酶和Na^(+)-K^(+)-ATP酶的活性。结果体内外实验表明,IgG表达下调使胃癌细胞增殖受到抑制,胃癌细胞中总ATP酶和Na^(+)-K^(+)-ATP酶活性显著降低(P<0.05)。结论肿瘤源性IgG可能通过增强Na^(+)-K^(+)-ATP酶活性促进胃癌细胞增殖。

渗入脑内的免疫球蛋白G与外周脂多糖引起大鼠脑内Toll样受体4的表达

目的探讨从血循环中渗入到脑内的自体内源性免疫球蛋白G(IgG)对外周脂多糖(LPS)刺激引起的中枢神经系统内Toll样受体4(TLR4)表达的作用。方法将SD大鼠20只随机分为4组,每组5只。LPS+生理盐水组:腹腔注射LPS100μg/kg,6h后尾静脉给予生理盐水15μg/kg;AD组:尾静脉给予盐酸肾上腺素(AD)15μg/kg;LPS+AD组:先腹腔给予LPS,6h后静脉注射AD;对照组大鼠静脉注射生理盐水作为对照。最后一次注射后30min处死动物,取脑,分别用免疫荧光染色和RT-PCR方法检测脑内TLR4的表达。结果免疫荧光染色显示,单独给予AD的动物中IgG免疫阳性产物呈斑片状分布于脑实质。LPS+生理盐水组的IgG免疫阳性产物仅限于血管周围;在LPS+AD组,IgG渗出区域内可见TLR4免疫阳性产物与小胶质细胞标志物Iba-1共存,双标的细胞分散于脑实质及血管附近,而LPS+盐水组TLR4阳性细胞呈内皮细胞样。RT-PCR结果显示,LPS+AD组TLR4的表达显著高于LPS+生理盐水组、AD单独注射组以及生理盐水对照组。结论大鼠血循环中的IgG渗入脑内可促进外周LPS引起的脑内TLR4表达。

牛初乳中免疫球蛋白G双抗夹心ELISA检测方法的建立

将牛免疫球蛋白G（immunoglobulin G,Ig G）作为免疫原免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合、筛选获得分泌抗牛Ig G单克隆抗体的细胞株。制备小鼠腹水抗体,进一步纯化获得抗牛Ig G单克隆抗体。建立双抗夹心酶联免疫吸附法检测牛初乳中Ig G质量浓度,该方法在7.8~1 000 ng/m L范围内有良好的线性关系,最低检出限为7.06 ng/m L,批内变异系数为4.52%,批间变异系数为4.94%,回收率为91.85%~102.45%。此法操作简便、准确度高、稳定性好,可用于实际牛初乳样品的快速检测。

特异性免疫球蛋白G抗体检测在支气管哮喘诊治中的意义

目的探讨食物特异性免疫球蛋白G(IgG)抗体检测在支气管哮喘临床诊治中的意义。方法支气管哮喘诊断标准的患者76例为试验组,69例健康体检者为对照组,分别抽取静脉血并用酶联免疫吸附试验(ELISA)半定量检测血清中14种食物特异性IgG抗体水平。结果试验组患者血清食物特异性IgG抗体检测阳性率(42.11%)明显高于对照组(8.69%)(P<0.05),但不同年龄组患者存在不同食物特异性IgG抗体阳性,且不同年龄组间比较差异具有统计学意义(P<0.05)。结论支气管哮喘与食物特异性IgG抗体的阳性程度存在一定联系,通过检测特异性IgG抗体水平,有助于对支气管哮喘患者进行饮食干预,指导预防。

甲状腺自身抗体联合免疫球蛋白G4检测在自身免疫性甲状腺疾病诊断中的应用

目的 探讨甲状腺自身抗体联合免疫球蛋白G4(IgG4)在自身免疫性甲状腺疾病(AITD)诊断中的应用。方法 选择徐州医科大学第二附属医院2017年1月—2019年10月收治的90例确诊AITD患者作为研究对象,其中桥本甲状腺炎(HT)和Graves病(GD)患者各45例;另外选择同期该院45名健康体检者作为对照组。采用化学发光法检测所有入组人员血清促甲状腺激素受体抗体(TRAb)、甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)、甲状腺球蛋白抗体(TGAb),采用免疫散射比浊法检测IgG4水平;比较各组上述指标的差异。绘制受试者工作特征曲线(ROC曲线)并计算ROC曲线下面积(AUC),评估各指标单独及联合检测对HT、GD的诊断及鉴别效能。结果 HT组和GD组的血清TRAb、TPOAb、TGAb、IgG4水平均明显高于对照组[TRAb(kU/L):4.14(3.27,5.41)、22.19(3.43,29.26)比1.03(0.80,1.36),TPOAb(kU/L):413.85(23.42,537.55)、571.21(28.43,767.12)比22.31(19.43,27.26),TGAb(kU/L):462.08(10.77,580.12)、162.85(10.17,205.45)比35.21(10.44,71.48),IgG4(g/L):2.50(0.43,3.14)、2.24(0.33,2.86)比0.61(0.31,1.46),均P<0.05]。HT组的血清TGAb水平明显高于GD组,TRAb和TPOAb水平均明显低于GD组,差异均有统计学意义;HT组和GD组的血清IgG4水平比较差异无统计学意义。ROC曲线分析表明,TPOAb诊断HT的AUC(0.918)、敏感度(84.4%)和特异度(84.4%)均高于其他单一指标;各指标联合检测诊断HT的AUC(0.969)、敏感度(93.3%)和特异度(93.3%)均高于单一指标。TRAb诊断GD的AUC(0.955)、敏感度(84.4%)和特异度(84.4%)均高于其他单一指标;各指标联合检测诊断GD的AUC(0.980)、敏感度(93.3%)和特异度(93.3%)均高于单一指标。结论 血清TRAb、TPOAb、TGAb和IgG4联合检测相较单独指标检测具有更高的诊断效能,其中血清TPOAb、TGAb和IgG4在HT诊断中具有较高的特异度和敏感度,血清TRAb对GD具有较高的诊断效能,可为AITD的早期临床诊疗提供参考。

髓过氧化物酶-抗中性粒细胞胞质抗体相关性血管炎患者血清IgG4及Th1/Th2细胞因子检测分析

目的了解髓过氧化物酶(MPO)-抗中性粒细胞胞质抗体相关性血管炎(AAV)患者血清中IgG4及辅助性T细胞(Th)1/Th2细胞因子的表达情况。方法收集苏州大学附属第二医院50例AAV患者及40例同期健康体检者的血清样本,采用免疫比浊法测定IgG水平,采用ELISA法测定IgG4水平,采用流式细胞术微球阵列(CBA)技术检测血清中Th1/Th2细胞因子的水平,比较两组样本上述指标的差异,分析不同指标之间的相关性。结果共收集到50例AAV患者血清样本,其中MPO-AAV患者40例(80.0%)。MPO-AAV组血清IgG4水平为(1.13±0.33)g/L,IgG4/IgG比值为0.094±0.032,IL-4水平为(2.54±0.68)pg/mL,IL-6水平为15.22(8.83,59.52)pg/mL,均高于健康体检者[IgG4水平为(0.80±0.27)g/L,IgG4/IgG比值为0.070±0.028,IL-4水平为(1.96±0.60)pg/mL,IL-6水平为4.95(2.82,13.25)pg/mL],差异均有统计学意义(P均<0.01),且MPOAAV患者血清IgG4水平与IL-6水平呈正相关(r_(s)=0.508,P<0.05)。结论我院AAV患者中MPO-AAV比例较高。MPO-AAV患者血清中IgG4水平及IL-4、IL-6水平均升高,且IgG4升高与IL-6升高呈正相关,提示IgG4的升高与MPO-AAV患者Th1/Th2细胞因子平衡失调有关。

牙周炎患者治疗前后唾液sIgA、IgG和溶菌酶水平的变化

采用单向免疫扩散法及琼脂平板打孔法分别测定了５２例成人牙周炎患者治疗前后唾液ｓＩｇＡ、ＩｇＧ及溶菌酶水平．观察其中３６例中、重度牙周炎非手术治疗和手术治疗术后３月的牙周指数以及远期疗效．结果表明：牙周炎患者治疗前ｓＩｇＡ低于、而ＩｇＧ和溶菌酶高于正常对照组；治疗后１月ｓＩｇＡ、ＩｇＧ与正常组已无差异，溶菌酶反低于正常组．手术治疗降低牙周指数大于非手术治疗．结果提示：ＩｇＧ水平与成人牙周炎牙周指数呈正相关．

酶标SPA-Western-blot法鉴定猪IgG的研究

用健康二花脸母猪的新生仔猪，随机分为两组：出生后即刻隔离人工哺喂葡萄糖盐水（ＧＳ组）及自然哺乳组（ＰＣ组）。采集出生后２４小时的仔猪血清样品，用酶标ＳＰＡ－Ｗｅｓｔｅｍ－ｂｌｏｔ法鉴定其中的ＩｇＧ。结果，ＰＣ组仔猪出现阳性反应，在非还原状态ＳＰＡ与ＩｇＧ结合，在还原状态下，ＳＰＡ与ＩｇＧ的重链结合；ＧＳ组仔猪呈阴性反应。表明，酶标ＳＰＡ－Ｗｅｓｔｅｒ－ｌｂｏｔ法鉴定猪ＩｇＧ具有简便、省时、省力、灵敏、准确的优点。

兔抗仓鼠IgG酶结合物的制备

兔抗仓鼠ＩｇＧ酶结合物的制备赵雅静魏天文宁磊吴晓梅（卫生部兰州生物制品研究所７３００４６）张永兴景志忠（中国农业科学院兰州兽医研究所）仓鼠作为一种实验动物，已大量用于狂犬病疫苗、乙型脑炎疫苗的生产和其他科学实验，为提高生物制品的品质，在生产中必须定期...

兔抗大鼠IgG酶标记物的制备

大鼠ＩｇＧ经饱和硫酸铵粗提后，再经ＤＥＡＥ－纤维素柱进一步提纯。用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳鉴定所提纯的ＩｇＧ纯度，凝胶板上只出现两条带（其一为ＩｇＧ的轻链，另一条为ＩｇＧ的重链）。用提纯的ＩｇＧ经皮内免疫日本大耳兔，以琼脂扩散试验试血，效价为１∶３２。分离抗血清，用上述方法提纯兔抗大鼠ＩｇＧ，以过碘酸钠改良法标记。将所标记的兔抗大鼠辣根过氧化物酶结合物用于微生物学检测（工作浓度为１∶８００），并与ＳＰＡ－ＨＲＰ比较。结果证明：此标记物准确可靠，比ＳＰＡ－ＨＲＰ敏感。