宫颈癌组织IGHG1、TRIM14表达及其临床意义

目的探究宫颈癌组织免疫球蛋白G1重链恒定区(IGHG1)、三结构域蛋白14(TRIM14)的表达及其临床意义。方法收集2019年3月至2020年3月于保定市妇幼保健院收治的82例宫颈癌患者作为研究对象,术中取其肿瘤组织及癌旁组织,并根据3年随访情况分为预后良好组与预后不良组。采用免疫组化法检测宫颈癌肿瘤组织与癌旁组织中IGHG1和TRIM14的蛋白表达水平。采用多因素Logistic回归分析影响宫颈癌患者预后的因素,受试者特征工作(ROC)曲线用于分析宫颈癌患者肿瘤组织中IGHG1和TRIM14蛋白表达水平对预后的预测价值。结果与癌旁组织相比,宫颈癌肿瘤组织中IGHG1和TRIM14蛋白表达水平显著升高(t值分别为34.193、38.697,P<0.05)。IGHG1和TRIM14蛋白表达水平与患者TNM分期、肿瘤分化程度、淋巴结转移有关(t值介于2.092~20.208之间,P<0.05)。与预后良好组相比,预后不良组宫颈癌患者的肿瘤组织中IGHG1和TRIM14蛋白表达水平显著升高(t值分别为8.708、7.534,P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,IGHG1、TRIM14蛋白表达是宫颈癌患者发生不良预后的危险因素,其OR值及95%CI分别为3.547(2.364~5.322)、7.218(2.027~25.704)。ROC分析显示IGHG1、TRIM14联合预测宫颈癌患者预后的曲线下面积为0.957,灵敏度和特异度分别为78.00%和98.25%。结论宫颈癌患者肿瘤组织中IGHG1和TRIM14蛋白水平高表达,与预后有关,可能是宫颈癌预后评估的生物标志物。

IGHG1对人急性髓系白血病THP-1细胞增殖、凋亡的影响

目的:探讨免疫球蛋白G1重链恒定区(IGHG1)对急性髓系白血病(AML)细胞系THP-1细胞增殖、凋亡的影响及其可能的作用机制。方法:体外培养人AML THP-1细胞,分为对照(正常培养的THP-1细胞)、pcDNA3.1[转染IGHG1过表达(pcDNA3.1-IGHG1)阴性对照质粒的THP-1细胞]、pcDNA3.1-IGHG1(转染pcDNA3.1-IGHG1的THP-1细胞)、LY364947[转化生长因子-β(TGF-β)/信号转导蛋白(Smad)抑制剂LY36494720μmol/L处理THP-1细胞)]、si-NC[转染IGHG1小干扰RNA(IGHG1-siRNA)阴性对照的THP-1细胞]、si-IGHG1(转染IGHG1-siRNA的THP-1细胞)和si-IGHG1+LY364947(IGHG1-siRNA和LY364947共同处理THP-1细胞)共7组。荧光定量PCR法检测各组THP-1细胞中IGHG1和免疫球蛋白G(IgG)mRNA的表达;CCK-8法检测各组THP-1细胞增殖活力;流式细胞术检测各组THP-1细胞凋亡率和细胞周期变化;蛋白印迹法检测各组THP-1细胞增殖、凋亡及TGF-β/Smad信号通路相关蛋白的表达。结果:与对照组相比,过表达IGHG1后THP-1细胞中IGHG1和IgG mRNA表达、细胞增殖活力、S期的细胞比例、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、IgG、TGF-β1、磷酸化Smad3(p-Smad3)/Smad3蛋白表达均显著升高(P<0.05),细胞凋亡率、G_(0)/G_(1)期的细胞比例、p21、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达均显著降低(P<0.05)。抑制TGF-β/Smad信号通路或沉默IGHG1后THP-1细胞中IGHG1和IgG mRNA表达、细胞增殖活力、S期的细胞比例、Cyclin D1、Bcl-2、IgG、TGF-β1、p-Smad3/Smad3蛋白表达均显著降低(P<0.05),细胞凋亡率、G_(0)/G_(1)期的细胞比例、p21、Bax、Caspase-3蛋白表达均显著升高(P<0.05);且与沉默IGHG1相比,IGHG1基因沉默和TGF-β/Smad通路抑制共同处理的THP-1细胞中IGHG1和IgG mRNA表达、细胞增殖活力、S期的细胞比例、Cyclin D1、Bcl-2、IgG、TGF-β1、p-Smad3/Smad3蛋白表达均显著降低(P<0.05),细胞凋亡率、G_(0)/G_(1)期的细胞比例、p21、Bax、Caspase-3蛋白表达均显著升高(P<0.05)。结论:沉默IGHG1基因可下调IgG的表达,抑制人AML THP-1细胞增殖,阻滞细胞周期进程,并诱导细胞凋亡;其作用机制可能与抑制TGF-β/Smad通路的激活有关。

血清免疫球蛋白G Fc段受体ⅠmRNA、白细胞介素⁃6和降钙素原、超敏C反应蛋白检测在诊断肺部感染中的应用

目的探究血清免疫球蛋白G Fc段受体Ⅰ(FCGR1A)mRNA、白细胞介素⁃6(IL⁃6)、降钙素原和超敏C反应蛋白(hs⁃CRP)水平检测在诊断病人肺部感染中的应用。方法选取2018年1—12月湖南中医药高等专科学校附属第一医院呼吸科收治肺部感染病人135例,其中61例为病毒感染,74例为细菌感染,并招募同期入该院体检的健康者50例作为对照组,分析血清FC⁃GR1A mRNA、IL⁃6、降钙素原和hs⁃CRP单独及联合检测在诊断病人肺部感染中的应用价值。结果三组受试者血清FC⁃GR1A mRNA、IL⁃6、降钙素原和hs⁃CRP水平比较差异有统计学意义(P<0.05);与对照组比较,细菌感染组和病毒感染组病人血清FCGR1A mRNA、IL⁃6、降钙素原和hs⁃CRP水平均显著升高(P<0.05),且细菌感染病人上述因子水平均高于病毒感染者(P<0.05);对照组和病毒感染组,联合检测曲线下面积(AUC)为0.791,灵敏度为70.00%,特异度为80.30%,95%CI为0.705~0.877;对照组和细菌感染组,联合检测AUC为0.879,灵敏度为90.00%,特异度为86.50%,95%CI为0.815~0.943;病毒感染组和细菌感染组,联合检测AUC为0.837,灵敏度为91.80%,特异度为82.40%,95%CI为0.760~0.913;74例细菌感染病人中36例为革兰阳性菌(G^+)感染,38例为革兰阴性菌(G^⁃)感染;G^+和G^⁃病人血清FCGR1A mRNA、IL⁃6、降钙素原和hs⁃CRP水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论应用血清FCGR1A mRNA、IL⁃6、降钙素原及hs⁃CRP联合检测对病人肺部细菌和病毒感染的诊断价值较高,但无法鉴别G^+感染和G^⁃感染。

免疫球蛋白G Fc受体1C在肝细胞癌中的表达及其临床意义

目的探究免疫球蛋白G Fc受体1C(FCGR1C)在肝细胞癌(HCC)组织中表达的临床意义及与HCC细胞白细胞介素1β(IL-1β)和恶性表型的关系。方法用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测90例HCC组织及相应癌旁组织中FCGR1C的表达水平,并用Kaplan-Meier Plotter数据库分析FCGR1C与HCC患者预后的关系。在人HCC细胞HepG2中用慢病毒转染FCGR1C siRNA表达载体及对照载体分别作为实验组及对照组,用RT-qPCR法检测细胞中FCGR1C和IL-1βmRNA的表达水平,用CCK-8实验法检测细胞的增殖能力,用Transwell实验法检测细胞的侵袭和迁移能力。结果在HCC癌组织和癌旁组织中的FCGR1C表达水平分别为(2.34±0.29)×10^(-2)和(1.40±0.19)×10^(-2),差异有统计学意义(P<0.01)。FCGR1C高表达与HCC患者预后不良显著相关(风险比=1.47,P<0.05),并与患者TNM分期呈正相关(P<0.05)。FCGR1C与IL-1β在肝癌组织中的表达呈正相关(P<0.01)。实验组和对照组的FCGR1C mRNA表达水平分别为0.23±0.03和1.00±0.08,IL-1βmRNA表达水平分别为0.54±0.04和1.00±0.10,侵袭细胞数分别为(22.00±3.93)和(53.20±3.50)个,迁移细胞数分别为(48.80±5.40)和(102.20±7.94)个,96 h增殖能力分别为17.41±1.48和23.93±1.92,差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论FCGR1C在HCC组织中高表达且不利于患者预后,其可促进HCC细胞体外增殖及转移能力,并上调IL-1β的表达水平。

黄芪皂苷对不同证型C57BL/6小鼠血清IL-2、IL-4、IgG1、IgG2水平的影响

目的:观察黄芪皂苷对不同证型C57BL/6小鼠血清中白细胞介素(IL)-2、IL-4、Ig G1、Ig G2水平的调节作用,探讨黄芪皂苷的作用机制。方法:将84只C57BL/6小鼠(雌雄各半)随机分为正常组、肺气虚模型组、肺气虚治疗组、脾气虚模型组、脾气虚治疗组、肾阳虚模型组、肾阳虚治疗组各12只。除正常组外,其余各组小鼠复制3种不同证型的小鼠模型,分别摘眼球取血,采用ESILA法检测各组小鼠血清中IL-2、IL-4、Ig G1、Ig G2水平。结果:肺气虚治疗组小鼠的IL-2、Ig G1、Ig G2水平高于肺气虚模型组,IL-4水平明显低于肺气虚模型组(P均<0.05);脾气虚治疗组小鼠的IL-2、Ig G1水平高于脾气虚模型组,IL-4水平低于脾气虚模型组(P均<0.05);肾阳虚治疗组小鼠的IL-2水平高于肾阳虚模型组(P<0.05)。结论:黄芪皂苷可调节不同证型小鼠血Ig G1、Ig G2水平,提高小鼠对细菌、病毒等外来病原体的抵抗力,能调节小鼠的IL-2/IL-4平衡,使免疫因子水平朝着更有利于机体状况的方向变化。

sTNFRII-gAD-Fc融合蛋白在CHO细胞中的高效表达

构建了人肿瘤坏死因子受体II胞外区、人脂联素球部与人IgG1 Fc的融合基因sTNFRII-gAD-Fc的真核表达载体,在CHO-S细胞中快速高效表达,探索了无血清悬浮流加培养工艺。应用重组PCR将人IgG1 Fc基因片段与sTNFRII-gAD基因片段融合,构建pMH3-sTNFRII-gAD-Fc表达载体,电转染至CHO-S细胞,挑选G418抗性的高表达单克隆,斑点杂交半定量分析和Western blot分析sTNFRII-gAD-Fc的表达,Protein A-Agarose纯化,以及拮抗TNFα的生物活性测定。最后在摇瓶、转瓶及生物反应器中进行了逐级放大的无血清悬浮批次及流加培养,即:2.0 &#215;106 cells/mL的接种密度,当达到4.0 &#215;106 cells/mL以上时开始流加培养并以每日葡萄糖的残余量2 g/L左右作为流加体积的控制参数。成功构建pMH3- sTNFRII-gAD-Fc表达载体,检测到sTNFRII-gAD-Fc在CHO-S细胞培养上清中以二聚体和多聚体形式表达,获得了高表达(75 μg/mL)单克隆细胞株,且该蛋白具有显著抑制TNFα杀伤L929细胞的活性。在摇瓶中无血清批次培养和转瓶及生物反应器中流加培养时产量分别为10.0 mg/L、18.3 mg/L和20.5 mg/L。利用CHO-S细胞系统成功实现了sTNFRII-gAD-Fc 融合蛋白的快速高效表达,为建立一套高密度、高效表达该融合蛋白的悬浮流加培养中试工艺打下了良好基础。

苗药香囊对小鼠肺泡灌洗液及肺组织中免疫球蛋白的影响

目的观察苗药香囊对正常小鼠肺泡灌洗液中分泌型免疫球蛋白A(SIgA)、免疫球蛋白G1(IgG1)及肺组织中免疫球蛋白A(IgA)、IgG1的影响。方法雄性昆明小鼠50只,随机分为5组(每组10只):空白对照组、玉屏风颗粒组(阳性对照组)、苗药香囊持续吸入组、苗药香囊间断吸入组、苗药香囊持续吸入+玉屏风颗粒组(香+玉组)。实验小鼠连续用药4周后,采用ELISA法检测肺泡灌洗液中SIgA、IgG1的含量,Western blot分析检测肺组织中IgA、IgG1蛋白的表达。结果与空白对照组相比,苗药香囊持续吸入组小鼠肺泡灌洗液中SIgA和IgG1含量显著升高,分别为(255.83±94.96)ng/ml和(165.37±54.59)ng/ml,差异具有统计学意义(P<0.05);苗药香囊持续吸入组小鼠肺组织中IgA、IgG1的相对含量分别为3.90±0.29和2.69±0.89,显著高于空白对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论苗药香囊能够增加正常小鼠呼吸道中IgA、SIgA和IgG1的含量,进而提高其呼吸道黏膜的免疫功能。

IgG1型重组单克隆抗体的肽图分析方法优化

目的建立一种快速的IgG1型重组单克隆抗体(单抗)药物反相-超高效液相色谱肽图分析方法,用于IgG1型单抗专属性鉴别、质量控制和批检验放行。方法选取4种IgG1型单抗(贝伐珠单抗、阿达木单抗、曲妥珠单抗、利妥昔单抗),经变性、还原、烷基化、Lys-C蛋白酶解后,终止反应,离心取上清用反相-超高效液相色谱法检测,评价方法的专属性、重复性、耐用性,并通过Xevo G2-XS QTof质谱进行方法确认及鉴定。结果确定流动相为0.1%三氟乙酸/水和0.1%三氟乙酸/乙腈,色谱柱为Agilent Poroshell 120SB-C18型色谱柱(2.1 mm×150 mm,2.7 μm),检测波长214 nm,柱温40 ℃,样品室温8 ℃,梯度洗脱时间为65 min。方法学验证结果显示空白对照无干扰峰存在,专属性良好;各特征峰的6次重复性相对保留时间的相对标准偏差为0.00%~0.19%;不同仪器、不同色谱柱、不同酶量及样品稳定性研究的结果显示各特征峰相对保留时间的相对标准偏差均<2.0%,耐用性较好。结论建立的单抗药物肽图分析方法可用于IgG1型重组单抗的专属性鉴别及质量控制和批检验放行。

特发性膜性肾病患者肾小球IgG1沉积与临床病理特征的关系

目的 分析特发性膜性肾病(IMN)患者肾小球IgG1沉积与临床病理特征的关系。方法 经皮肾活检穿刺病理确诊为IMN的86例患者,根据IgG1免疫荧光结果分为阳性组75例和阴性组11例,采用免疫荧光检测IgG、IgA、IgM、补体C3、补体C1q、IgG4、磷脂酶A2受体沉积强度及肾小管萎缩程度、肾小球节段硬化比例和肾小球球性硬化比例,分析IgG1沉积与患者临床病理特征的相关性。结果 两组年龄、IgG、IgM、补体C3、补体C1q、IgG4沉积强度以及肾小管萎缩程度和肾小球球性硬化比例均有统计学差异(P<0.05)。Spearman相关性分析显示,IMN患者IgG1沉积强度与患者年龄、肾小管萎缩程度和肾小球球性硬化比例呈负相关(r=-0.227、-0.214和-0.246,P<0.05),与补体C1q和IgG4沉积强度呈正相关(r=0.229和0.603,P<0.05)。结论肾小球IgG1沉积与IMN患者的临床病理特征有一定相关性,提示IgG1可能参与IMN发生、发展过程。

荨麻疹新型治疗药物--Ligelizumab

Ligelizumab(研发代号:QGE031)是诺华制药公司研发的新一代高亲和力抗免疫球蛋白E(IgE)人源化单克隆免疫球蛋白G1(IgG1)抗体。Ligelizumab的作用机制和临床研究表明,该药可通过阻断IgE/Fcε受体Ⅰ(FcεRⅠ)信号通路,达到治疗慢性自发性荨麻疹、重度哮喘等疾病的目的。Ligelizumab在多项临床试验中表现出比奥马珠单抗(Omalizumab)更好的缓解荨麻疹效果,且未出现明显安全性问题。目前Ligelizumab处于Ⅲ期临床试验阶段。美国食品药品管理局(FDA)已授予Ligelizumab突破性药物资格,用于治疗对H_(1)抗组胺治疗应答不足的慢性自发性荨麻疹患者。本文对Ligelizumab的作用机制、药物代谢动力学、临床前研究、临床疗效及安全性等进行综述。