免疫球蛋白κJ区重组信号结合蛋白对CD133阳性室管膜细胞增殖与分化的影响

目的 探讨免疫球蛋白κJ区的重组信号结合蛋白(RBP-Jκ)对CD133阳性室管膜细胞增殖与分化的影响及可能的机制。方法 分离孕12 d的美国癌症研究所(ICR)胚胎小鼠(3只)侧脑室室管膜细胞进行原代培养,并使用RBP-Jκ-siRNA干扰RBP-Jκ,以及选用2~3月龄体重为20~25 g的CD133-CreER^(TM)::ROSA26-LacZ::RBP-Jκ^(flox/flox)小鼠(3只),通过腹腔注射他莫昔芬(TAM)敲除RBP-Jκ,通过免疫荧光双标染色检测CD133阳性室管膜细胞的增殖和分化变化的情况,最后通过Real-time PCR、Western blotting检测RBP-Jκ及其上下游相关分子表达情况。结果 干扰或敲除RBP-Jκ后,无论是细胞还是动物水平CD133或β-半乳糖苷酶(β-GAL)/双肾上腺皮质激素(DCX)/β-微管蛋白Ⅲ(β-tubulinⅢ)、CD133或β-GAL/微管相关蛋白2(MAP-2)或神经元核抗原(NeuN)、CD133或β-GAL/增殖细胞核抗原(PCNA)双阳性细胞数目均明显增加。同时Real-time PCR和Western blotting结果表明,在干扰或敲除RBP-Jκ后RBP-Jκ-和Splity多毛增强子1(Hes1)mRNA及蛋白表达量均显著下降,而Notch1 mRNA及蛋白的表达量反而显著增加。结论 干扰或敲除RBP-Jκ,通过Notch1表达上调、Hes1表达下调,最终引起CD133阳性室管膜细胞的增殖与分化增加。

RBP-J调控病理性Th17细胞在肝纤维化进展中的作用

目的探讨重组信号结合蛋白Jκ(RBP-J)对病理性Th17(pTh17)细胞的调控以及RBP-J/pTh17轴在肝纤维化进展中的作用。方法收集5例正常人(供者)和5例肝纤维化病人(受者)的肝组织及外周血样本。应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、免疫组织化学和Western blot方法,检测肝组织RBP-J和白细胞介素23受体(IL-23R)的表达,应用流式细胞术方法检测外周血中pTh17细胞的频率。结果与健康对照组相比,肝纤维化病人肝组织中RBP-J和IL-23R蛋白表达量以及IL-23R基因表达水平显著增加(t=5.70~83.34,P<0.05)。与健康对照组相比,肝纤维化病人外周血中pTh17细胞频率也明显增加(t=18.88,P<0.01)。结论肝损伤时,RBP-J可能通过驱动IL-23R表达促进pTh17细胞分化,从而促进肝纤维化的进程,提示RBP-J/pTh17轴可能是治疗肝纤维化的一个潜在靶点。