不同药物对人肺巨细胞癌PGCL3细胞表面表达的血小板免疫相关抗原的影响

利用铺有 Ｍａｔｒｉｇｅｌ的 Ｂｏｙｄｅｎ小室观察抗ＣＤ９、抗ＣＤ４２ａ、抗ＣＤ ６３、抗ＴＳＰ抗体对ＰＧ－ＣＬ３细胞侵袭作用的影响；采用流式细胞术观察２．５、１０、２０ｍｇ／Ｌ的川芎嗪、丹参酮ⅡＡ和５０、５００、１０００ Ｕ／Ｉ。的水蛙素和凝血酶对 ＰＧＣＬ３细胞膜表面 ＣＤ９、ＣＤ４２ａ、ＣＤ６３、ＴＳＰ表达的影响，观察川芎嗪、丹参酮ⅡＡ、水蛭素和凝血酶对人肺巨细胞癌ＰＧＣＬ３细胞表面血小板免疫相关抗原ＣＤ９、ＣＤ４２ａ、ＣＤ６３和ＴＳＰ表达的影响，部分阐述各种药物对肿瘤粘附和侵袭影响的不同作用机制。结果抗ＣＤ９抗体明显增加 ＰＧＣＬ３细胞的侵袭，而抗ＣＤ４２ａ、抗ＣＤ６３、抗ＴＳＰ抗体不同程度减少ＰＧＣＬ３细胞的侵袭。川芎嗪可使ＣＤ９＋、ＣＤ４２ａ＋、ＴＳＰ＋细胞的数目减少，ＰＧＣＬ３细胞表面ＣＤ９的表达减少；丹参酮ⅡＡ使ＣＤ９的表达有所增加，ＣＤ６３和 ＣＤ４２ａ的表达有所下降，ＣＤ４２ａ＋、ＴＳＰ＋的细胞数目下降；水蛭素使ＣＤ９、ＣＤ６３和ＣＤ４２ａ的表达有所减弱，ＣＤ４２ａ＋、ＣＤ６３＋细胞的比例下降；凝血酶使ＣＤ９和ＣＤ４２ａ的表达有所减弱，并使ＣＤ４２ａ＋的细胞数目减少。提示川芎嗪、丹参酮ⅡＡ、水蛭?

流式细胞术对不同肿瘤细胞表面所表达血小板免疫相关抗原的检测

目的：研究不同肿瘤细胞表面血小板免疫相关抗原的表达。方法：利用流式细胞术观察了ＰＧＣＬ３、ＰＡａ、ＰＧ－３、ＰＣ－３Ｍ、ＭＧＣ８０３、ＥＳＣＬ、ＢｅＬ、ＴＣＴ、ＫＢ、Ａ２７８０、ＣＣＡ８０１共１１种人肿瘤细胞，其中包括二对高低不同转移能力的人肺癌（ＰＧＣＬ３和ＰＡａ）和人前列腺癌（ＰＧ－３和ＰＧ－３Ｍ）细胞阳性表达不同血小板免疫相关抗原的细胞数及其肿瘤细胞表面抗原表达的平均荧光强度。结果：１１种人肿瘤细胞膜表面均有ＣＤ９、ＣＤ６３、ＣＤ４２ａ和ＴＳＰ，等血小板免疫相关抗原不同程度的表达，在ＭＧＣ８０３细胞膜表面发现有ＣＬ８６较强的表达，ＣＤ４１、ＣＤ４２ｂ、ＣＤ６１和ＣＤ６２均未发现表达。１１种人肿瘤细胞系中ＣＤ９＋、ＣＤ４２ａ＋、ＣＤ６３＋、ＴＳＰ＋细胞所占的比例各不相同，不同肿瘤细胞系每个抗原阳性细胞抗原表达的荧光强度也不同。与高转移ＰＧＣＩ３和ＰＧ－３Ｍ细胞相比，ＣＤ９在低转移细胞系ＰＡａ和ＰＧ－３上有较高的表达，ＣＤ４２ａ、ＴＳＰ有相对低的表达。ＣＤ４２ａ＋和ＴＳＰ＋细胞数和表达强度在高转移ＰＧＣＬ３和ＰＧ－３Ｍ细胞系均要高于低转移的ＰＡａ和ＰＧ－３；

猪链球菌2型CVCC606株免疫相关抗原的纯化及其免疫保护研究

以猪链球菌2型CVCC606免疫断乳仔猪制备高免血清,纯化血清IgG,制备亲和层析柱,亲和纯化其免疫相关抗原;SDS-PAGE分析抗原的组成,研究其对猪链球菌2型CVCC606攻击的BALB/c小鼠的免疫保护作用。结果表明：以亲和层析方法纯化获得的免疫相关抗原分子量集中于29.0-97.2 kD,对5倍LD50剂量的猪链球菌CVCC606攻击的BALB/c小鼠的保护率为60%,呈现了部分的保护作用。所获得的免疫相关抗原中含有保护性抗原。

布鲁菌主要免疫抗原研究进展

布鲁菌主要免疫相关抗原有脂多糖、外膜蛋白、菌体蛋白,研究这类抗原是解决目前布病菌疫苗存在保护时间短以及布病血清学诊断无法区分免疫、感染以及毒力返强的重要突破口。生物技术的发展促进了对抗原的结构、抗原表位及其诱导的免疫应答等方面的深入研究,并在此基础上构建了多种重组融合蛋白疫苗、DNA疫苗、亚单位疫苗、包含优势表位的多价疫苗;同时免疫相关抗原的研究也为布病诊断试剂的开发奠定了基础并提供了更多选择。

细胞表面抗体相关的自身免疫性脑炎短期预后的影响因素

目的 分析细胞表面抗体相关的自身免疫性脑炎(sAE)短期预后的影响因素。方法 收集郑州大学第一附属医院2019-06—2022-10首次被诊断为sAE的患者98例,分为预后良好组和预后不良组,对sAE患者的一般资料、临床特征、脑脊液检查及短期预后进行回顾性分析。结果 预后良好组和预后不良组比较,起病状态差异有统计学意义(P<0.05);2组血-脑屏障通透性明显不同,差异有统计学意义(P=0.005);预后良好组脑脊液寡克隆蛋白和IgG商与预后不良组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。纳入多因素分析后,起病状态(OR=5.303,95%CI 1.225~22.961,P<0.05),血-脑屏障通透性改变(OR=4.485,95%CI 1.063~18.922,P<0.05)与sAE患者预后相关。结论 起病状态、血-脑屏障通透性是影响sAE患者短期预后的因素。

HGF与CTLA-4Ig双基因修饰增强脐带间充质干细胞的免疫抑制和促增殖作用

【目的】探讨人脐带间充质干细胞(hUCMSC)经肝细胞生长因子(HGF)和细胞毒性T细胞相关抗原4免疫球蛋白(CTLA4-Ig)双基因修饰后免疫调节能力的变化及其促进肝细胞增殖作用的影响。【方法】酶联合消化法提取并鉴定人脐带间充质干细胞;对照组的hUCMSC转染携带绿色荧光蛋白(EGFP)基因的Ad5-EGFP,实验组的hUCMSC转染携带HGF和CTLA-Ig双基因的腺病毒Ad5-HGF/CTLA-4Ig。流式细胞仪检测对照组hUCMSC转染Ad5-EGFP后72 h表达EGFP细胞比率;实验组Ad5-HGF/CTLA-4Ig转染hUCMSC 72 h后,CCK8检测细胞存活率,同时再次检测hUCMSC免疫表型和向成骨细胞分化的能力,ELISA检测细胞上清中HGF含量,Western blot检测细胞中CTLA4-Ig蛋白的表达水平,通过CCK8法检测双基因修饰后hUCMSC对淋巴细胞增殖的影响及其上清对L02细胞增殖的影响。【结果】携带外源基因的腺病毒可有效转染hUCMSC,不影响其干细胞特性和多向分化能力,经HGF/CTLA-4Ig基因修饰hUCMSC可分泌高浓度HGF并高表达CTLA-4Ig,同时能有效地抑制淋巴细胞增殖,其上清能明显促进肝细胞增殖。【结论】hUCMSC经HGF/CTLA-4Ig基因修饰后生物学特性无明显改变,并能高表达HGF和CTLA-4Ig,其免疫调节及促进肝细胞增殖的能力进一步加强,为肝移植术后存在的肝细胞损伤的保护治疗提供了新思路。

CTLA-4Ig对B6.MRL-Faslpr/J狼疮小鼠脾脏Th17和Treg细胞表达的影响与其对小鼠狼疮样病征干预作用的相关性研究

目的:初步探讨B7阻断剂CD28与细胞毒T淋巴细胞相关抗原4免疫球蛋白(CTLA-4Ig)对B6.MRL-Faslpr/J狼疮小鼠脾脏Th17和调节性T细胞(Treg细胞)表达的影响与其对小鼠狼疮样病征干预作用之间的相关性。方法:将4个月龄大小雌性B6.MRL-Faslpr/J狼疮小鼠16只,随机分为观察组(Ⅰ组)和对照组(Ⅱ组),分别静脉注射CTLA-4Ig及等量PBS,检测小鼠干预前后24 h尿蛋白、ANA抗体、ds-DNA抗体及干预结束2周后血清IL-17A、脾脏中Th17细胞和Treg细胞百分比。结果:末次干预2周后Ⅰ组的24 h尿蛋白、血清ANA及ds-DNA较Ⅱ组下降均有统计学意义(均P<0.05)。末次干预2周后Ⅰ组血清中IL-17A、脾脏Th17细胞比例均较Ⅱ组低,而脾脏的Treg细胞占CD4+T淋巴细胞的比例高于Ⅱ组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论:CTLA4-Ig具有减轻B6.MRL-Faslpr/J狼疮鼠狼疮样病征的作用;上调Treg细胞、下调Th17细胞可能是CTLA-4Ig减轻B6.MRL-Faslpr/J狼疮鼠狼疮样病征的重要机制之一。

CTLA4Ig抑制BMP2基因转染的MSCs诱导的免疫应答

目的通过腺病毒介导人细胞毒T淋巴细胞相关抗原4免疫球蛋白(CTLA4Ig)及人骨形态发生蛋白2(BMP2)在骨髓间充质干细胞(MSCs)中的表达,探讨CTLA4Ig对BMP2转染的异基因MSCs诱导的免疫应答的抑制作用。方法以CTLA4Ig和BMP2重组腺病毒转染MSCs。ELISA法检测包装的病毒感染MSCs后,CTLA4Ig及BMP2蛋白的表达;观察CTLA4Ig对混合淋巴细胞反应(MLR)的抑制作用。结果腺病毒载体介导CTLA4Ig和BMP2体外感染的MSCs能够分泌CTLA4Ig及BMP2蛋白,且CTLA4Ig融合蛋白可以有效抑制AdBMP2基因转染的MSCs的刺激作用。结论给予CTLA4Ig腺病毒进行基因治疗可有效的抑制AdBMP2转染的异基因MSCs引起的免疫应答,诱导MSCs移植耐受;为BMP2基因修饰的同种异体间的MSCs移植提供了实验依据。

CTLA4-Ig基因修饰骨髓间充质干细胞抑制大鼠肝移植排斥反应

目的探讨细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4免疫球蛋白(CTLA4-Ig)基因转染骨髓间充质干细胞(MSC)在抑制大鼠原位肝移植排斥反应的作用及机制。方法采用重组腺病毒(Ad)5-CTLA4-Ig转染MSC。转染72 h后,提取细胞总蛋白,采用蛋白质印迹法检测转染后MSC中CTLA4-Ig的蛋白表达。采用细胞计数试剂盒(CCK)-8方法检测未转染和转染后的MSC对外周血淋巴细胞增殖的抑制作用。以雄性Lewis大鼠为供体(40只);以雄性Brown Norway(BN)大鼠为受体(40只)。采用改良的Kamada两袖套法进行原位肝移植,建立大鼠原位肝移植急性排斥反应模型。40只受体大鼠随机分为4组,每组10只。其中对照组(A组),于肝移植时门静脉输注生理盐水;MSC治疗组(B组),于肝移植时门静脉输注MSC;转基因MSC治疗组(C组),于肝移植时门静脉输注转基因MSC;免疫抑制剂治疗组(D组),于肝移植时门静脉输注生理盐水,术后即给予环孢素(CsA)1.5 mg/(kg·d)肌内注射,连续8 d。每组大鼠取5只观察生存情况。每组其余5只于术后第9日处死,检测外周血细胞因子白细胞介素(IL)-2、IL-4、干扰素(IFN)-γ水平,光学显微镜下观察肝组织病理学变化和排斥反应程度。结果重组Ad5-CTLA4-Ig转染MSC 72 h后,蛋白质印迹法可检测到转染后的MSC中有CTLA4-Ig的蛋白表达。当未转染的MSC∶外周血单核细胞比例为1∶10、1∶20时,MSC抑制淋巴细胞增殖的作用分别为85.60%、76.69%。重组Ad5-CTLA4-Ig转染MSC 72 h后,在相同的数量比下,其抑制淋巴细胞增殖的作用分别为90.50%、84.20%;与未转染的MSC比较,转染后抑制淋巴细胞增殖的作用增强(P<0.05)。A、B、C、D组大鼠肝移植术后存活时间分别为(13±3),(41±6),(90±15),(102±18)d。A、B、C组的大鼠术后存活时间比较差异有统计学意义(P<0.05),C组和D组的大鼠术后存活时间比较差异无统计学意义(P>0.05)。与A组比较,B组和C组的IL-4水平明显升高;与B组比较,C组的IL-4水平明显升高,差异均有统计学意义(均为P<0.05);C组和D组的IL-4水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与A组比较,B组和C组的IL-2、IFN-γ水平明显降低,C组的IL-2、IFN-γ水平亦低于B组,差异均有统计学意义(均为P<0.05),C组和D组的IL-2、IFN-γ水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。大鼠肝组织病理检查结果显示,A组移植肝发生重度排斥反应,B组移植肝亦发生排斥反应,但与A组比较程度较轻。C组与D组移植肝有轻度排斥反应。结论重组Ad-CTLA4-Ig转染MSC可抑制肝移植排斥反应,其效果优于MSC单独应用。

CTLA-4Ig融合蛋白对病毒性心肌炎小鼠Foxp3+调节性T细胞的影响

目的探讨细胞毒T淋巴细胞相关抗原4免疫球蛋白(CTLA-4Ig)对柯萨奇B3病毒(CVB3)病毒性心肌炎(VMC)小鼠的病死率、心肌病理改变、病毒复制和心肌组织中Foxp3+调节性T细胞(Tregs)的影响。方法 106只4～6周龄健康雄性Balb/c小鼠,体质量为12～16 g,随机分为CTLA-4Ig组16只、病毒组40只、IgG组40只及正常对照组10只,CTLA-4Ig组、病毒组和IgG组小鼠腹腔注射半数组织细胞感染量(TCID50)为10-3/L的CVB3 0.15 ml,正常对照组小鼠接种0.15 ml不含病毒的Eagle液。CTLA-4Ig组、IgG组小鼠于接种病毒后6、72 h分别注射CTLA-4Ig(0.1 mg/kg)及IgG(0.1 mg/kg)。接种病毒后第7天处死所有小鼠在光镜下观察心肌病理变化并计算心肌组织病理积分;采用实时荧光定量PCR(RQ-PCR)检测心肌组织中CVB3 mRNA的表达;采用免疫组织化学法检测Foxp3分子在心肌组织中的表达,并计算Foxp3+Tregs所占浸润细胞数的百分率。结果与病毒对照组相比较,CTLA-4Ig组小鼠病死率降低(80%比50%,P<0.05),心肌组织病理积分下降(1.78±1.05比1.00±0.72,P<0.05),心肌CVB3 mRNA表达减少(3.48±2.89比0.81±1.06,P<0.05);CTLA-4Ig组小鼠心肌组织中Foxp3+Tregs所占浸润细胞数的百分率较病毒组明显增加(9.22±2.28)%比(5.42±1.59)%,(P<0.05)。结论 CTLA-4Ig可减轻VMC小鼠心肌炎症,降低心肌病毒复制及病死率,其机制可能与上调Foxp3+Tregs比、抑制T细胞活化有关。

CTLA4Ig基因重组腺病毒载体的构建及其体外表达

【目的】构建表达人CTLA4Ig的非复制型重组腺病毒载体并检测其在真核细胞中的表达。【方法】分离人外周血单个核细胞，提取细胞总RIgA，经RT-PCR分别扩增含抑瘤素M信号肽的CTLA4胞外段及IgG恒定区（含绞链区-CH2-CH3）基因片段。将PCR产物克隆入pCDNA3，阳性重组子以双酶切和测序鉴定。将目的基因CTLA4-Ig亚克隆入腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV，与5型腺病毒骨架质粒pAdeasy-1共转染BJ5183，经细菌内同源重组构建重组腺病毒载体。采用脂质体法转染293细胞包装产生重组腺病毒，进一步感染HepG2细胞，采用RT-PCR及ELISA测定CTLA4Ig表达情况。【结果】构建了表达人CTLA4Ig基因的重组腺病毒，病毒滴度可达6×10^9pfu／mL，并能在HepG2和骨髓间充质干细胞中表达CTLA4Ig。【结论】成功构建表达CTLA4Ig的重组腺病毒载体，为进一步研究肝细胞移植排异及自身免疫性疾病的免疫调节治疗提供有力的手段与工具。

CTLA4Ig基因修饰BMSCs对异种胰岛移植排斥反应的影响

目的探讨细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4免疫球蛋白(CTLA4Ig)基因修饰骨髓间充质干细胞(BMSCs)在异种胰岛移植排斥反应中的作用。方法构建携带CTLA4Ig基因的重组腺病毒载体,用其感染BMSCs并和人胰岛细胞移植到糖尿病大鼠肾包膜下,建立人-大鼠异种胰岛移植模型。观察胰岛移植后糖尿病大鼠血糖变化、生存情况以及移植物病理形态学改变,检测移植物胰岛素和CTLA4Ig的表达以及移植糖尿病大鼠白细胞介素2(IL-2)和肿瘤坏死因子(TNF-α)的水平变化。结果①糖尿病大鼠血糖在移植后2～3 d恢复正常,对照组血糖平均在移植后7 d升高,单纯干细胞组和干细胞转染组血糖分别在22 d和46 d升高。②对照组、单纯干细胞组和干细胞转染组移植物存活时间分别为(10±2.8)d、(27±6.5)d和(52±8.7)d,各组间比较差异有统计学意义(F=6.459,P<0.05);移植大鼠生存时间分别为(25±7.6)d、(55±9.8)d、(98±16.3)d,各组间比较和移植物存活时间相似(F=7.365,P<0.05)。③对照组在移植后1周内,IL-2、TNF-α的水平均急剧上升,较移植前显著升高(P<0.01)。④各治疗组移植物见成片的胰岛细胞团,未见淋巴细胞浸润,转染组移植物可见胰岛素和CTLA4Ig的表达。结论 CTLA4Ig基因修饰骨BMSCs可抑制异种胰岛移植排斥反应,延长胰岛移植物的存活时间。

CTLA4Ig基因转染猪皮敷料治疗烧伤临床疗效的Meta分析

目的系统分析细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4免疫球蛋白(CTLA4Ig)基因转染猪皮敷料对烧伤创面的治疗效果。方法计算机检索中文科技期刊数据库(维普)、中国期刊全文数据库(中国知网)、中国学术期刊数据库(万方)、PubMed、The Cochrane Library等数据库建库至2020年12月公开发表的CTLA4Ig基因转染猪皮敷料治疗烧伤创面的相关文献,并根据纳入与排除标准筛选符合标准的文献进行质量评价及Meta分析。结果共纳入符合标准的文献5篇,包含烧伤患者368例。Meta分析结果显示,创面行CTLA4Ig基因转染猪皮敷料治疗的烧伤患者创面愈合时间明显短于其他疗法(MD=-4.01,95%CI为-5.08~-2.95,P<0.001)、色素沉着/脱失发生率明显低于其他疗法(RR=0.16,95%CI为0.08~0.33,P<0.001),而创面感染率和瘢痕增生情况与其他疗法无明显差异(RR=0.14、0.61,95%CI为0.02~1.10、0.37~1.01,P=0.060、0.050)。结论与其他疗法相比,CTLA4Ig基因转染猪皮敷料更能有效缩短烧伤创面愈合时间、减少色素沉着/脱失。