兔抗人免疫相关鸟苷三磷酸酶基因多克隆抗体的制备与鉴定

目的:表达人免疫相关鸟苷三磷酸酶基因(IRGM)a全长融合蛋白,制备高质量的兔抗人IRGM多克隆抗体。方法:将IRGMa全长cDNA片段分别克隆到原核表达载体pGEX-4T-2和真核表达载体pCMV-myc,测序验证序列正确。在大肠埃希菌Ecoli BL21中表达IRGMa/GST融合蛋白,用纯化的可溶性IRGMa/GST融合蛋白免疫新西兰大白兔,制备兔抗人IRGM抗体,采用ELISA、免疫印迹和竞争抑制等多种方法验证其敏感度和特异度。结果:自制的兔抗人IRGM多克隆抗体的特异度和敏感度均较高,效价更高于市售抗体。结论:成功制备了兔抗人IRGM多克隆抗体,为进一步的功能研究打下基础。

黏着斑激酶相关性鸟苷三磷酸酶调节因子基因启动子甲基化特异性PCR法的建立与初步应用

目的建立甲基化特异性PCR(MSP)技术检测黏着斑激酶相关性鸟苷三磷酸酶调节因子(GRAF)基因启动子甲基化。方法设计针对GRAF基因启动子的MSP引物,建立MSP检测体系,对不同DNA模板进行检测,评价方法的特异性、重复性和灵敏度;对10例急性髓系白血病(AML)标本进行检测。结果建立的MSP方法仅能扩增出甲基化阳性模板,不能扩增出未甲基化阳性模板和未硫化处理的DNA模板;检测不同稀释度的甲基化阳性模板,其最大灵敏度可达2%;在不同时间进行MSP检测的结果均一致;对10例AML患者的初步检测发现7例存在着GRAF基因启动子甲基化。结论成功建立了检测GRAF基因启动子甲基化的MSP方法,有良好的特异性、灵敏度和重复性,可用于临床AML标本的批量检测。

基于m5C相关基因构建三阴性乳腺癌预后预测模型及药物敏感性分析

为了探讨5-甲基胞嘧啶(5-methylcytosine,m5C)相关基因在三阴性乳腺癌(triple negative breast cancer,TNBC)患者治疗及预后中的潜在价值,构建了基于m5C相关基因的预后预测模型,用于评估TNBC患者的预后和生存状况。从基因表达总库(gene expression omnibus,GEO)数据库和癌症基因组图谱(the cancer genome atlas,TCGA)数据库中下载TNBC基因表达谱和相应的临床数据。通过Pearson分析确定了99个m5C相关基因,进一步采用单因素Cox分析鉴定出5个与预后有关的m5C相关基因(SLC6A14、BCL11A、UGT8、LMO4、PSAT1)并构建了风险评分(risk score)预测模型,根据风险评分中位值将患者划分为高风险组和低风险组。使用Kaplan-Meier(K-M)生存分析、受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线、多变量Cox回归分析、构建列线图和校准曲线评估了模型的预测效能。训练集和验证集的K-M生存曲线、受试者工作特征曲线下面积(area under the curve,AUC)分析均验证了模型具有良好的预测能力。多变量Cox回归分析显示,风险评分可作为独立的预后生物标志物。使用ssGSEA、免疫评分分析和化疗药物对高低风险组患者的半最大抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50)值差异分析显示,免疫细胞和免疫检查点基因以及大多数化疗药物的IC50值在不同风险组之间的表达存在显著差异。研究结果构建了基于5个m5C相关基因的风险评分预后预测模型,这将有助于阐明TNBC中m5C相关基因的作用机制,进而提供更有价值的预后及诊断的生物标志物和潜在的治疗靶点,为TNBC患者临床个性化治疗提供理论指导。

阴道毛滴虫Rab6鸟苷三磷酸酶同源基因的cDNA克隆和序列分析(英文)

Rab鸟苷三磷酸酶是细胞膜转运机制的关键调节分子,与原虫的分泌功能密切相关。本研究旨在克隆和分析阴道毛滴虫Rab6鸟苷三磷酸酶同源基因,以便进一步探讨其功能。作者从阴道毛滴虫cDNA表达文库中分离出2个Rab6鸟苷三磷酸酶同源基因的cDNA克隆,其中1个cDNA序列长658对碱基,读码框含597对碱基,推测蛋白质序列具198个氨基酸。序列分析表明该氨基酸序列与Rab6a蛋白亚家族的同源性最高。另一cDNA序列长764对碱基,读码框含657对碱基,推测蛋白质序列具218个氨基酸。序列比对分析显示该氨基酸序列与Rab6b蛋白有较高的同源性。2个氨基酸序列都拥有Rab鸟苷三磷酸酶家族的所有保守结构域、特异性RabF结构域和典型的异戊烯化结构域。进化树分析提示毛滴虫的这2个基因系Rab6家族的同源基因,在进化上更接近原虫和单细胞的酵母Rab6亚家族。序列分析还显示这2个基因都无内含子,其基因组DNA序列与其cDNA序列完全一致。

三(2-氯乙基)磷酸酯(TCEP)对大菱鲆(Scophthalmus maximus)免疫相关基因表达的影响

三(2-氯乙基)磷酸酯(Tris(2-carboxyethyl)phosphine,TCEP)是一种新型内分泌干扰物(Endocrine Disrupting Chemicals,EDCs),低剂量就会造成很强的生物毒性。通过研究不同质量浓度梯度的TCEP对养殖大菱鲆的胁迫,发现其在24 h、48 h、72 h和96 h的半致死浓度(LC_(50))分别为190.76 mg/L、159.94 mg/L、140.70 mg/L和110.71 mg/L;安全浓度(SC)为33.60 mg/L。24 h内不同质量浓度梯度的TCEP和不同胁迫时间对养殖大菱鲆的影响表明,高于质量浓度33.60 mg/L的TCEP对大菱鲆具有急性毒性效应。用实时荧光定量PCR技术分析TCEP急性胁迫的养殖大菱鲆体内2种细胞免疫因子−组织相容性复合体alpha(MHC-Ⅱα)和肿瘤坏死因子alpha(TNF-α)的基因相对表达水平,发现经TCEP胁迫后2种细胞免疫因子的表达量都显著上调;随TCEP的质量浓度升高,特别是达到47.69 mg/L(LC_(50))以上时表达量的变化更加明显;而胁迫时间超过12 h,基因表达量会呈现先上升后下降的趋势,说明对大菱鲆免疫系统造成急性损伤。研究结果可为大菱鲆健康养殖提供参考,并为环境污染物检测提供分子标记参考。

阴道毛滴虫Rab11鸟苷三磷酸酶cDNA克隆和序列分析(英文)

目的近年研究表明Rab11鸟苷三磷酸酶在调节各种真核细胞的膜转运通道中发挥着重要作用。但是,对于原生动物毛滴虫膜转运系统的研究仍甚少。本研究旨在克隆和分析阴道毛滴虫Rab11鸟苷三磷酸酶基因,以便进一步探讨其功能。方法使用SMARTcDNA文库构建试剂盒构建阴道毛滴虫cDNA表达文库,用生物信息学进行TvRab11同源分析,鉴定TvRab11基因,用PCR方法扩增基因组DNA,TA克隆TvRab11cDNA、测序及序列分析。结果在分离出的cDNA克隆中发现一个Rab11鸟苷三磷酸酶同源基因。该cDNA序列长710bp,读码框含636bp,推测蛋白质序列具211个氨基酸。序列分析表明该基因系Rab11亚家族的同源基因,其推测肽链与拟南芥Rab11c的同源性最高(一致性60%,相似性79%),与人类Rab11b次之(一致性58%,相似性78%)。该氨基酸序列拥有Rab鸟苷三磷酸酶家族的所有保守结构域和特异性Rab结构域(RabF1-5)。进化树分析也表明该基因系Rab11的同源基因。序列分析还显示该基因的基因组DNA序列与cDNA序列完全一致,提示该基因无内含子。结论分析表明该基因是阴道毛滴虫Rab11鸟苷三磷酸酶同源基因,其功能有待进一步研究。

H_2O_2对人淋巴细胞8-羟基-2'-脱氧鸟苷三磷酸酶表达及端粒长度的影响

目的:探讨人外周血淋巴细胞遭受H2O2损伤时,8-羟基-2'-脱氧鸟苷三磷酸酶(8鄄oxo鄄dGTPase)的表达及端粒长度的变化,评估氧化应激对端粒长度的影响。方法:体外培养人外周血淋巴细胞,分为正常对照组、氧化组和抗氧化组,采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT鄄PCR)及凝胶成像技术,测定8鄄oxo鄄dGTPase的mRNA表达水平,并应用Southern杂交技术检测端粒长度的变化。结果:①随着H2O2作用时间的延长,8鄄oxo鄄dGTPasemRNA的相对含量也增加,尤以氧化组增加最显著(P<0.05),而抗氧化组与对照组相比较则差异无显著性(P>0.05);②端粒长度则随着时间的变化表现为缩短,且3组之间均有差异(P<0.05)。结论:①8鄄oxo鄄dGTPase的表达随着氧化应激的程度加深而显著增加;②维生素C具有一定的抗氧化作用,它能明显减低过氧化损伤,抑制8鄄oxo鄄dGTPase的生成,同时能减缓端粒缩短的速率;③氧化应激在一定程度上可以引起人淋巴细胞端粒长度的缩短。

人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因蛋白及卵巢癌相关抗原在宫颈癌中的表达及其临床意义

宫颈癌是女性生殖道常见的恶性肿瘤之一，难以早期诊断。而早期诊断影响着肿瘤患者的治疗效果与预后。本研究拟应用免疫组织化学方法，检测正常宫颈、癌前病变宫颈、癌性宫颈中人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因（PTEN）及卵巢癌相关抗原（CA）125的蛋白表达，分析其基因表达与宫颈癌生物学行为的关系，为临床进行早期诊断、病情监测和评估预后提供依据。

IRGM基因多态性与结核病发病相关性的Meta分析

目的系统评价免疫相关鸟苷三磷酸酶(IRGM)基因rs10065172位点多态性与结核病发病风险的相关性。方法通过计算机检索PubMed、万方全文数据库、中国期刊全文数据库(CNKI)、中国生物医学文献数据库(CBM)、维普数据库等数据库,查找关于IRGM基因rs10065172位点多态性与结核病发病风险相关性的病例对照研究,检索时限为各个数据库建库至2017年3月。由两名评价员独立对文献进行筛选及数据提取,运用RevMan 5.3和Stata 12.0软件进行Meta分析。结果共纳入文献8篇,9个病例对照研究,包括3 956例结核病病人,4 896例健康对照。Meta分析结果显示,在总体人群合并分析中,IRGM基因rs10065172位点多态性与结核病之间的相关性在隐性基因模型(TT vs TC+CC:OR=0.87,95%CI=0.78~0.97,P=0.01)、共显性基因模型(TT vs CC:OR=0.89,95%CI=0.78~1.01,P=0.08;TT vs TC:OR=0.85,95%CI=0.76~0.96,P=0.007)中有统计学意义。在亚洲人群中,IRGM基因rs10065172位点多态性与结核病之间的相关性在共显性基因模型(TT vs CC:OR=0.80,95%CI=0.67~0.95,P=0.01;TT vs TC:OR=0.80,95%CI=0.68~0.94,P=0.007)、等位基因模型(T vs C:OR=0.91,95%CI=0.84~0.99,P=0.03)、隐性基因模型(TT vs TC+CC:OR=0.80,95%CI=0.69~0.93,P=0.005)中均具有统计学意义。高加索人群及非洲人群因纳入文献较少,未发现IRGM基因多态性与结核病发病风险之间的相关性。结论在亚洲人群中IRGM基因rs10065172位点多态性与结核病发病风险有相关性,其中野生型等位基因C与结核病发病风险增高相关。

兰州大学发现蛋白磷酸酶TOPPs参与植物免疫途径

兰州大学生命科学学院侯岁稳课题组通过对蛋白磷酸酶TOPPs家族的显性负效应突变体topp4J的深入研究,发现正常(22℃)培养条件下topp4-l中多种防御相关基因被激活,并出现细胞死亡及活性氧积累等免疫自激活表型;高温(28℃)条件下这些免疫自激活表型可以被恢复。进一步研究发现,topp4-l中水杨酸积累,对丁香假单胞菌Pst DC 3000的抗病性增强。

自噬相关免疫相关性三磷酸鸟苷基因多态性与克罗恩病的相关性

CD是炎症性肠病的一种，主要表现为慢性反复发作的胃肠道黏膜非特异性炎性反应，其发病机制目前尚不明确。近年来研究发现有多个遗传易感基因和单核苷酸多态性（singlenucleotidepolymorphism，SNP）与CD有关，由于多种遗传易感基因编码的蛋白与免疫有关，目前多认为CD是一种自身免疫性疾病。自噬相关免疫相关性三磷酸鸟苷基因（immunity—relatedGTPasefamilyM，IRGM）编码三磷酸鸟苷结合蛋白，在细胞内病原体引发的机体免疫反应中起重要作用。本课题组前期研究发现IRGM基因第2号外显子上有4个位点（rs9637876、rs9637870、rs72553867、rs10065172）存在SNP，但国内有关这4个位点的SNP与CD的相关性尚不清楚，故本研究旨在探讨IRGM基因这4个位点的SNP与CD的相关性。

PR方案治疗慢性丙型肝炎患者ITPA基因rs1127354位点多态性与利巴韦林相关性溶血关系探讨

目的探讨应用标准抗病毒(PR)方案治疗慢性丙型肝炎(CHC)患者三磷酸次黄嘌呤核苷(ITPA)基因多态性对抗病毒疗效及其对利巴韦林(RBV)相关性溶血的影响。方法2016年3月~2018年3月我院收治的CHC患者235例,给予聚乙二醇化干扰素α-2a联合RBV治疗24~48 w。采用基因测序法检测血ITPA基因rs1127354位点多态性。结果经检测,发现ITPA基因型rs1127354位点为CC型193例和AA/AC型42例;在完成24周疗程的188例(CC型152例和AA/AC型36例)CHC患者中,AA/AC型患者快速病毒学应答和早期病毒学应答率分别为44.4%和47.2%,与CC型的42.1%和42.7%比,无显著性差异(P>0.05),而持续病毒学应答率为72.2%,显著高于CC型的53.3%(P<0.05);在治疗4周、8周、12周和24周,AA/AC型患者Hb水平分别为(138.2±14.7)g/L、(130.5±12.6)g/L、(123.7±12.5)g/L和(118.0±10.2)g/L,显著高于CC型【分别为(132.3±13.9)g/L、(113.1±10.5)g/L、(108.4±9.4)g/L和(106.7±11.3)g/L,P<0.05】。结论在PR方案治疗的慢性丙型肝炎患者,ITPA基因(rs1127354)CC基因型较AA/AC基因型更易发生RBV相关性溶血,而ITPA基因型与抗病毒效果密切相关,临床应加以重视和预防性处理。

IRGM-4958847 A/G基因多态性与克罗恩病易感性的关系

目的：评价免疫相关鸟苷三磷酸酶基因（IRGM）多态性与克罗恩病（CD）易感性的关系。方法用主题词或关键词检索Cochrane图书馆、Pubmed、Embase、ISI数据库、中文科技期刊数据库、中国期刊全文数据库，万方数据库以获得相关研究，检索时间从建库至2012年10月。根据纳入和排除标准由两名研究者独立进行文献质量评价，使用Review Manager 5.2.6统计软件进行Meta分析，效应量为比值比（OR）。结果共有9个病例-对照研究和队列研究纳入分析。Meta分析结果显示在IRGM-4958847 A/G多态性位点，杂合子AG与野生型相比，合并效应量OR=1.17，95%CI（1.01～1.35）， P=0.03。结论 IRGM-4958847位点AG型基因可能与CD遗传易感性相关。

三疣梭子蟹血细胞全长cDNA文库构建及EST初步分析

三疣梭子蟹是我国沿海重要养殖品种之一,近年来养殖病害呈逐年上升趋势,制约了三疣梭子蟹养殖产业的健康可持续发展。为大规模克隆三疣梭子蟹免疫相关基因,研究其免疫基因的功能和免疫机制,奠定三疣梭子蟹病害防治理论基础,采用SMART技术构建了三疣梭子蟹血细胞全长cDNA文库。经测定,文库滴度为1.14×107pfu/mL,文库总容量为5.7×107pfu,重组率达到98%,插入片段平均长度为817.5 bp。文库随机测序获得的70个全长cDNA,从中发现18个已知基因和5个未知基因。已知基因主要为多肽/蛋白质合成相关基因,共9个;免疫相关基因4个,分别是抗菌肽hyastatin、C-reactive prote in-1、profilin和m asquerade-like prote in,且4个免疫相关基因共有48个克隆,占测序总克隆的68.6%,表明血细胞中免疫相关基因表达非常活跃。研究结果证实,构建血细胞全长cDNA文库是大规模克隆三疣梭子蟹免疫相关基因的可靠途径,并为深入研究免疫相关基因的功能和免疫机制奠定基础。

子宫内膜癌组织S期激酶相关蛋白2及磷酸酶和张力蛋白基因表达相关性分析

目的探讨S期激酶相关蛋白2(Skp2)及磷酸酶和张力蛋白基因(PTEN)在不同子宫内膜组织中的表达及其与子宫内膜癌发生、发展的关系。方法选取中国医科大学附属盛京医院2008-2010年手术切除的59例子宫内膜腺癌标本。患者年龄36～70岁,平均54岁。另选取30例不典型增生子宫内膜和30例增生期子宫内膜标本,应用免疫组织化学SP法和免疫印迹法(western blotting)检测Skp2和PTEN蛋白的表达水平,分析其表达水平与临床病理参数的关系以及二者的相互关系。结果 Skp2在子宫内膜癌中表达高于不典型增生和正常增生期内膜,差异有统计学意义(P<0.05),在晚期子宫内膜癌、低分化组和有淋巴结转移组较早期、高中分化组和无淋巴结转移组表达增高,差异有统计学意义(P<0.05)。PTEN在子宫内膜癌中的表达低于不典型增生和正常增生期内膜,差异有统计学意义(P<0.05),在晚期子宫内膜癌和低分化组表达低于早期和高中分化组,差异有统计学意义(P<0.05)。在子宫内膜癌中Skp2表达增高,PTEN表达下降,二者呈负相关。结论 Skp2和PTEN可能参与子宫内膜癌的发生发展过程。

PTEN、p53和BAG-1在三阴乳腺癌中的表达及意义

为了研究PTEN、p53和BAG-1在三阴乳腺癌中的表达情况及临床病理意义,并讨论三者之间的关系。采用免疫组织化学SP法检测89例三阴乳腺癌中PTEN、p53、BAG-1的表达,其阳性表达率分别为44.9%、47.2%、73.0%,三者的表达均与患者的病理组织学分级、淋巴结转移情况有关(P<0.05)。PTEN的表达与p53、BAG-1表达呈负相关;BAG-1与p53的表达呈正相关,提示三者在三阴乳腺癌中的表达存在一定关联性,临床上联合检测三者可能为TNBC预后评估、患者的个体化治疗提供一定的参考。

自动化学发光免疫分析法测定血清T_3、T_4和TSH的评价

目的 评价以碱性磷酸酶作为标记物的IMMULITE和ACCESS全自动化学发光免疫分析仪测定血清三碘甲腺原氨酸(T3 )、四碘甲腺原氨酸(T4)和促甲状腺激素(TSH)的价值。方法 对两种仪器的灵敏度、干扰性、回收率、批内误差、批间误差及其与放免法的相关性进行了研究。结果 IMMULITE的灵敏度分别为T3 :0 .616nmol·L-1,T4:13nmol·L-1,TSH :0 .0 0 2mIU·L-1;ACCESS的灵敏度分别为T3 :0 .15nmol·L-1,T4:6.5nmol·L-1,TSH :0 .0 0 3mIU·L-1;与放免法均有良好的相关性。结论 全自动化学发光免疫分析法检测迅速,灵敏度高,准确性、特异性强,重复性好,适合于临床应用。

胎儿期RAS信号通路相关综合征的研究进展

RAS/丝裂原激活蛋白激酶(RAS/mitogen-activited protein kinase,RAS/MAPK)信号通路参与调控细胞增殖、分化、存活、凋亡、免疫应答等行为,编码RAS/MAPK信号通路蛋白的基因发生突变,可引起RAS信号通路相关综合征(RASopathies)[1],其发病率约为1/1000。RAS基因包含NRAS(neuroblastoma-RAS)、HRAS(harvery-RAS)、KRAS(kirsten-RAS)等,编码由上游调节子激活的小三磷酸鸟苷(guanosine triphosphate,GTP)酶单体,激活多种信号通路,传递胞外信号启动下游信号通路,包括RAS/MAPK通路[2]。

自身免疫性甲状腺疾病相关基因研究进展

自身免疫性甲状腺疾病（autoimmune thyroid disease，AI-TD）是一组器官特异性的自身免疫性疾病，其发病已影响到全球5％的人口，并且主要发生在30-50岁的女性，其发病被认为是遗传易感性、外来基因的影响及环境因素相互作用引起的甲状腺破坏。尽管目前仍在强调环境因素对AITD的影响，但遗传因素对AITD的影响在分子水平上逐渐被破解，这对于进一步理解AITD的发病机制将有更大的帮助。