免疫磁性分离技术在病原微生物检测中的应用

免疫磁性分离技术是通过磁场作用使得磁珠表面所吸附的靶标物从样品中分离的前处理技术。免疫磁珠捕获靶标后,免疫磁珠-靶标复合物磁吸固定在管壁,洗脱杂质即可得到靶标。免疫磁性分离技术富集效果主要受抗体特异性、磁珠直径、磁珠添加量、孵育时间和样本pH影响,其中抗体特异性是影响磁珠富集效果的关键。利用免疫磁珠可吸附抗体的特性,在酶联免疫吸附测定方法中替代包被步骤,可大幅减少检测时间;免疫磁性分离技术作为前处理方法,与其他检测方法联用后,可提高检测方法的灵敏度和检测效率。笔者从免疫磁性分离技术原理、一般分离步骤、常见影响因素,以及在酶联免疫吸附测定、免疫层析法、PCR、实时荧光定量PCR、环介导等温扩增反应、流式细胞术、电化学传感器、液相色谱法等应用方面进行阐述,为免疫磁性分离技术的研究及推广提供参考。

免疫磁性捕获ELISA技术在松材线虫检测中的应用

本研究采用种子聚合法合成聚苯乙烯磁性微球,并以兔抗松材线虫IgG致敏,制备出能特异性地捕获松材线虫蛋白抗原的免疫磁性微球。以生物素标记抗体为示踪抗体,并结合酶标亲和素检测系统,用于疫木样品的分析。利用该方法对采自不同地区的3种松树,其中松材线虫病木17株、拟松材线虫病木5株和健木3株进行检测。实验结果表明,虽然拟松材线虫病木也呈现了一定的交叉反应,但疫木中松材线虫总检出率为94.1%,灵敏度达到0.1μg.mL-1线虫蛋白抗原。研究表明免疫磁性捕获ELISA技术可直接捕获木屑中的微量线虫抗原,具有简便、快速、准确等优点,是一种实用的松材线虫的快速检疫方法。

免疫磁性捕获ELISA法检测甘草中甘草蛋白的研究

目的 制备甘草蛋白免疫磁性微球,并建立快速、精确的免疫磁性捕获ELISA法检测甘草蛋白。方法 采用种子聚合法合成聚苯乙烯磁性微球,并以兔抗甘草蛋白IgG抗体致敏,制备特异性捕获甘草特征蛋白的免疫磁性微球。以生物素标记抗体为示踪抗体,结合辣根过氧化物酶标亲和素建立ELISA检测系统,用于甘草药材和含甘草中成药中甘草蛋白的分析。结果 利用该方法对甘草药材和中成药中甘草蛋白抗原检测,检测灵敏度达到10ng/mL。结论 免疫磁性捕获ELISA检测技术方便、快速、准确,为生药的品种鉴定及中成药的质量控制提供一种新方法。

用免疫磁性微球从骨髓中分离癌细胞

用物理吸附结合化学键共价结合的方法，将抗人膀胱癌单克隆抗体连接到预先制备的聚苯乙烯磁性微球表面，构建了能特异地与靶细胞结合并赋予其以磁响应性的免疫磁性微球（ｉｍｍｕｎｏｍａｇｎｅｔｉｃｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅｓ，ＩＭＭＳ）。间接免疫荧光检测和ＩＭＭＳ与细胞的结合实验证明，所构建的ＩＭＭＳ可有效地和靶细胞结合。研究了聚苯乙烯磁性微球和抗体反应的质量比、ＩＭＭＳ与靶细胞比例对ＩＭＭＳ与细胞结合效果的影响。用ＩＭＭＳ从动物骨髓中分离癌细胞的初步实验表明，ＩＭＭＳ可有效清除癌细胞，而骨髓细胞仅有很少量的损失。

免疫磁性活化细胞分选方法优化及纯化后细胞的生物学特性检测

目的:改良常规免疫磁性活化细胞分选(MACS)的分离纯化方法,提高分选后细胞的纯度并确保细胞仍具有良好活性及功能。方法:以干细胞抗原-1(Sca-1)标记的Sca-1+造血干/祖细胞(Sca-1+HSC/HPC)为例,分别用改良后和常规MACS法分选出小鼠骨髓细胞Sca-1+细胞,流式细胞术检测两种分选方法获得Sca-1+细胞纯度;计算阳性细胞回收率;台酚蓝染色检测分选细胞存活百分率;CCK-8检测细胞增殖,混合造血祖细胞(CFU-Mix)体外培养评价分选Sca-1+细胞分化能力。结果:改良MACS法分选获得的Sca-1+细胞纯度达93%以上(常规MACS法仅为87%),阳性细胞的回收率可达73%(常规法仅为62.3%);细胞存活率、细胞增殖和CFU-Mix集落形成能力两种分选方法无明显差别。结论:改良法能明显提高细胞分选纯度及回收率,细胞活性和功能保持良好,值得各种细胞免疫磁性分选参考采用。

李斯特氏菌因子血清的制备及食品检测的免疫磁性分离-PCR(MIPA)方法的建立

首先进行了李斯特氏菌因子血清的研制，制备出了可对所有李斯特氏菌分型的 １５ 个 Ｏ 抗原因子和４ 个 Ｈ 抗原因子的因子血清。利用复合因子血清的多克隆抗体包被磁性球，对食品中的单核细胞增多性李斯特氏菌进行免疫磁性分离，并与 Ｐ Ｃ Ｒ 方法相结合，建立了检测食品中单核细胞增多性李斯特氏菌的 Ｍ Ｉ Ｐ Ａ方法（免疫磁性分离—聚合酶链反应方法，ｍ ａｇｎ ｅｔｉｃ ｉｍ ｍ ｕｎｏｐｏｌｙｍ ｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ ａｓｓａｙ）。对菌液、模拟样品的检测表明，本方法能够有效地克服食品基质、培养基成分和杂菌对 Ｐ Ｃ Ｒ 检验的干扰作用。食品样品在 Ｅ Ｂ增菌液中增菌 １２ ｈ 后，检测的敏感度达 ５ Ｃ Ｆ Ｕ／ｍ Ｌ，可以在 ２０ ｈ 内完成检测。本方法对实际食品样品的检测结果，与国家标准检验方法检测的结果一致。

免疫磁性微球的研究进展

免疫磁性微球是免疫学与磁性微球结合而发展起来的一类新型材料 ,免疫磁性分离法由于具有高效、快速、低毒、操作简单等优点 ,已广泛地应用于细胞学、免疫学、分子生物学等领域。本文简要介绍了免疫磁性微球的结构、性质、分离原理和特点及其在国内外的制备现状 ,并对其在细胞分离与提纯、细胞体外扩增、免疫检测、核酸与基因工程、HLA分型。

纳米免疫磁性微球的制备和性能研究

目的:初步探讨纳米免疫磁性微球(Immunomagneticbeads,IMB)的制备方法及其性能。方法:用FeC纳米磁粉为内核,用反相乳液法制备壳聚糖磁性复合微球,用戊二醛活化复合微球并交联鼠抗人CD3单克隆抗体,制备出人CD3纳米免疫磁性微球,用人CD3纳米磁性免疫微球富集人外周血中CD3+细胞,并检测富集细胞的效果。结果:壳聚糖磁性复合微球平均粒径为560nm,粒径分布在409～710nm之间,用此微球制备的人CD3免疫磁性微球蛋白联接率达93.8%,流式细胞术检测人CD3纳米免疫磁性微球分离CD3+细胞纯度达到94.8%。结论:制备的人CD3纳米免疫磁性微球具有分离细胞纯度高,细胞损伤小,不用解离磁球即可检测等特点。

免疫磁性粒子的制备及性能初步观察

目的 :将免疫磁性分离技术应用到水和食品致病微生物检验工作中 ,达到快速地从样品中分离致病微生物的目的 ,以提高检测速度。方法 :对磁性粒子首先进行高分子物质的包被 ,继而进行了三种磁性粒子对细菌的非特异性吸附现象和免疫磁性粒子对细菌特异性结合能力的观察。结果 :未经包被的磁性粒子对细菌有很强的非特异性吸附 ,免疫磁性粒子对相应细菌特异性结合能力较强 ,并基本不受杂菌对分离效果的影响。结论 :免疫磁性分离技术比常规分离方法节省很多时间 ,可快速从样品中分离出致病微生物。

免疫磁性分离法检测水中隐孢子虫和贾第鞭毛虫的影响因素

隐孢子虫和贾第鞭毛虫是两种严重危害水质安全的病原性原生动物。美国国家环保总局(USEPA)制定并发布的1623方法是目前国际上最为常用的检测标准方法,其中,免疫磁性分离(IMS)是保证检测过程特异性的关键步骤。该文总结了IMS过程中回收率的主要影响因素,包括待测样品中的颗粒物质和溶解性物质,隐孢子虫和贾第鞭毛虫的浓度、育龄和活性等特征,以及磁珠添加比例、反应时间、反应体积、解离方式等操作参数。分析认为,将1623方法应用于环境样品或污水再生处理系统时,复杂的水质成分会显著影响IMS过程的回收效果,但可通过适当改进操作参数对IMS过程进行优化。

免疫磁性微珠的研制及其在免疫检测中的应用

应用材料科学和免疫学的新技术，我们在国内首次研制成功免疫磁性微珠（IMB）。在对一些临床常用血清指标以及两种激素标准品的免疫学定量检测中，自制IMB与瑞士Serono公司同类产品所获的结果十分接近（P＜0.01）,而且与放射免疫法的结果也有可比性(P＜O.01）。自制IMB在用于免疫学检测时的特异性、精密度、重复性、准确性均符合质量控制要求。

用于生物探测的PAMAM树形高分子增强免疫磁性微球

采用悬浮聚合的方法制备羧基修饰的聚苯乙烯磁性微球(CMM),研究了CMM和CMM PAMAM(第5代)两者与牛血清蛋白(BSA)的结合状况。结果显示:CMM与BSA的结合量为22.2μg/mg。PAMAM偶联在磁性微球表面后,提高了磁性微球表面官能团的密度,因而CMM PAMAM(第5代)与BSA的结合量可达54.4μg/mg。

精子蛋白17抗体免疫磁性颗粒活性分析及细胞成像研究

目的:制备精子蛋白17(Sp17)抗体免疫磁性纳米颗粒,以期用于卵巢癌的磁共振成像靶向诊断。方法:在偶联剂EDC/NHS作用下,将壳聚糖修饰磁性氧化铁纳米颗粒与抗人Sp17抗体结合,制备抗Sp17抗体免疫磁性纳米颗粒(IMNPs)。透射电镜观察颗粒的形貌特征,非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳评价抗体与磁性颗粒的结合效果,ELISA检测免疫磁性颗粒的免疫活性。将IMNPs与转染人Sp17的卵巢癌HO-8910细胞共孵育,进行体外磁共振成像检测。结果:成功实现了抗体与磁性纳米颗粒的偶联,并且IMNPs保持良好的抗体活性。磁共振显示该颗粒成功靶向Sp17阳性的细胞,没有发生明显的非特异吸附。结论:该免疫磁性纳米颗粒特异性良好,可进一步用作卵巢癌的靶向治疗研究。

免疫磁性分离技术在食源性疾病检测中的应用

免疫磁性分离技术是以特异的抗原抗体反应为基础的一种分离技术,它是免疫学和磁载体技术结合而发展起来的一项新技术,具有分离样品速度快、特异性强、操作简单、不需要昂贵的仪器设备等特点,已经广泛应用于细胞分离、病原体检测等领域,本文主要就其在细菌、病毒、寄生虫等食源性疾病检测方面的应用作一综述。

比较两种方法修饰的免疫磁性纳米探针在小鼠体内肿瘤磁共振成像中的作用

目的评价两种免疫磁性纳米探针(Anti-Sp17-Silane@MNPs和Anti-Sp17-CS@MNPs)对小鼠体内肿瘤MRI的靶向效果。方法分别将硅烷和壳聚糖修饰的磁性纳米粒与抗Sp17单克隆抗体交联,形成两种免疫磁性纳米探针(An-ti-Sp17-Silane@MNPs和Anti-Sp17-CS@MNPs),对荷瘤裸鼠注射后进行MR扫描,并解剖实验鼠,取器官组织(肺、肝和肿瘤)进行普鲁士蓝染色,观察铁粒子聚集情况。结果两种探针注射2 h后,肿瘤感兴趣区均可见T2信号明显降低,Anti-Sp17-CS@MNPs组降低更为显著。组织学检查见Anti-Sp17-Silane@MNPs注射组在肺、肝均有明显铁粒子聚集,而Anti-Sp17-CS@MNPs注射组各个器官组织铁粒子非特异聚集明显减少。结论 MRI中,对于小鼠体内肿瘤,Anti-Sp17-CS@MNPs探针比Anti-Sp17-Silane@MNPs特异性更好。

CD34^+造血细胞免疫磁性高效富集仪CMSI-100的研制及应用

根据免疫磁性分离原理 ,选用能产生高磁场强的磁性材料钕铁硼 ,其核心是将其设计成由低碳钢间隔的 4块钕铁硼 ,并且使每块钕铁硼的规格必须限制在 3.5cm× 2 .0cm× 0 .3cm ,以确保每块钕铁硼平面所具有的磁场强度平均可达 2 70 0高斯。当所切磨的钕铁硼规格达不到该标准时 ,由此产生的磁场强度 >2 70 0高斯或 <2 70 0高斯 ,对CD34+造血细胞的分离效果均不理想。经对人正常骨髓CD34+ 造血细胞的免疫磁性分离证实 ,采用CMSI 10 0富集后的CD34+ 造血细胞纯度平均 >90 % ,细胞活力 >95 % ,达到国际上最好水平 ,其性能完全可与国际通用先进的IsolexTM5

^(125)I标记抗体法优化免疫磁性微球的构建条件

目的：研究磁性微球与单克隆抗体结合的条件，以构建具有良好性能的免疫磁性微球。方法：以同位素标记的单克隆抗体和微球的结合率为指标。用均匀设计法研究影响免疫磁性微球构建的因素。结果：ｐＨ值、抗体加入量和反应时间是影响免疫磁性微球构建的主要因素。结论：通过控制条件，可以构建具有良好性能的免疫微球。

抗癌胚抗原单抗免疫磁性纳米微粒的制备及其与^(188)Re的放射性标记

目的:将抗CEA单抗与磁性纳米微粒偶联制备免疫磁性纳米微粒用于肿瘤的靶向治疗,并对其进行188Re标记。方法:采用氨基硅烷化修饰的磁性纳米微粒,选择不同的酸度经戊二醛活化后,在不同的酸度下与抗CEA单抗交联制备免疫磁性纳米微粒,并对188Re标记免疫磁性纳米微粒的实验条件进行探索。结果:以抗坏血酸作为抗体的还原剂,以SnC l2-柠檬酸还原188ReO4-溶液进行抗体的直接标记,结果表明,反应3h的标记率为90%,188Re-免疫磁性纳米微粒的免疫活性是188Re-抗CEA单抗的95%,188Re标记物的体外稳定性24h为91%、48h为85%。结论:188Re-免疫磁性纳米微粒的标记率及标记稳定性可满足于进一步的肿瘤靶向治疗的体内研究。

免疫磁性微球的制备及对IgG的分离

采用反相悬浮包埋法制备SPA-Sepharose免疫磁性微球,并对产物的结构、粒径、磁性能进行了表征,所得产物粒径大约为5μm,表面包裹葡萄球菌蛋白A(Staphylococcal Protein A,简称SPA),分散性较好,具有超顺磁性。利用SPA对免疫球蛋白G(IgG)的特异性吸附反应及磁性微球的超顺磁性,从猪血清中分离IgG,试验结果表明:SPA免疫磁性微球对猪血清的最大吸附效率是70.12%,可反复使用29次。

具有靶向抗癌功能的纳米高分子材料───阿霉素免疫磁性毫微粒的体内磁靶向定位试验

首次设计出同时在给药部位近端和远端进行９９ＭＴｃ４＋标记的阿霉素免疫磁性毫微粒（ＡＩＭＮ）的体内磁靶向定位试验，该试验从兔耳缘静脉给予９９ＭＴｃ４＋标记的ＡＩＭＮ后，采用国际最先进的ＥＣＴ显像技术，动态观察了ＡＩＭＮ在体内的磁靶向定位情况。结果表明，ＡＩＭＮ具有超顺磁特性，在给药部位近端和远端磁区均能产生放射性富集，富集强度为给药量的６０～６５％，同时其在脏器的分布显著减少，从而证实了ＡＩＭＮ具有较强的磁靶向定位功能，为靶向治疗肿瘤奠定了结实的基础。