李斯特氏菌因子血清的制备及食品检测的免疫磁性分离-PCR(MIPA)方法的建立

首先进行了李斯特氏菌因子血清的研制，制备出了可对所有李斯特氏菌分型的 １５ 个 Ｏ 抗原因子和４ 个 Ｈ 抗原因子的因子血清。利用复合因子血清的多克隆抗体包被磁性球，对食品中的单核细胞增多性李斯特氏菌进行免疫磁性分离，并与 Ｐ Ｃ Ｒ 方法相结合，建立了检测食品中单核细胞增多性李斯特氏菌的 Ｍ Ｉ Ｐ Ａ方法（免疫磁性分离—聚合酶链反应方法，ｍ ａｇｎ ｅｔｉｃ ｉｍ ｍ ｕｎｏｐｏｌｙｍ ｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ ａｓｓａｙ）。对菌液、模拟样品的检测表明，本方法能够有效地克服食品基质、培养基成分和杂菌对 Ｐ Ｃ Ｒ 检验的干扰作用。食品样品在 Ｅ Ｂ增菌液中增菌 １２ ｈ 后，检测的敏感度达 ５ Ｃ Ｆ Ｕ／ｍ Ｌ，可以在 ２０ ｈ 内完成检测。本方法对实际食品样品的检测结果，与国家标准检验方法检测的结果一致。

免疫磁性分离技术在病原微生物检测中的应用

免疫磁性分离技术是通过磁场作用使得磁珠表面所吸附的靶标物从样品中分离的前处理技术。免疫磁珠捕获靶标后,免疫磁珠-靶标复合物磁吸固定在管壁,洗脱杂质即可得到靶标。免疫磁性分离技术富集效果主要受抗体特异性、磁珠直径、磁珠添加量、孵育时间和样本pH影响,其中抗体特异性是影响磁珠富集效果的关键。利用免疫磁珠可吸附抗体的特性,在酶联免疫吸附测定方法中替代包被步骤,可大幅减少检测时间;免疫磁性分离技术作为前处理方法,与其他检测方法联用后,可提高检测方法的灵敏度和检测效率。笔者从免疫磁性分离技术原理、一般分离步骤、常见影响因素,以及在酶联免疫吸附测定、免疫层析法、PCR、实时荧光定量PCR、环介导等温扩增反应、流式细胞术、电化学传感器、液相色谱法等应用方面进行阐述,为免疫磁性分离技术的研究及推广提供参考。

利用免疫磁性分离-PCR检测安祖花细菌性枯萎病病原菌

根据地毯草黄单胞菌花叶万年青致病变种（Xanthomonas axonopodis pv.dieffenbachiae）的RAPD序列设计特异性引物,并对羧基化磁珠的结合性能进行检验,从而建立和优化了免疫磁性分离–PCR体系,对安祖花细菌性枯萎病进行早期检测。结果表明：1mg磁珠对多克隆抗体最大吸附值为0.268mg,进行免疫磁性捕获时免疫磁珠的最佳浓度是0.566~0.741mg·mL-1。免疫磁性分离–PCR可以减少PCR反应中的抑制物质,对X.axonopodispv.dieffenbachiae的检测灵敏度可以达到10~100cfu·mL-1,比常规PCR检测灵敏至少100倍。

免疫磁性分离法检测水中隐孢子虫和贾第鞭毛虫的影响因素

隐孢子虫和贾第鞭毛虫是两种严重危害水质安全的病原性原生动物。美国国家环保总局(USEPA)制定并发布的1623方法是目前国际上最为常用的检测标准方法,其中,免疫磁性分离(IMS)是保证检测过程特异性的关键步骤。该文总结了IMS过程中回收率的主要影响因素,包括待测样品中的颗粒物质和溶解性物质,隐孢子虫和贾第鞭毛虫的浓度、育龄和活性等特征,以及磁珠添加比例、反应时间、反应体积、解离方式等操作参数。分析认为,将1623方法应用于环境样品或污水再生处理系统时,复杂的水质成分会显著影响IMS过程的回收效果,但可通过适当改进操作参数对IMS过程进行优化。

磁性分离酶联免疫技术检测人类绒毛膜促性腺激素及其临床意义分析

应用磁性分离酶联免疫检测技术 (MAIA)对 2 10名正常非妊娠妇女的血清进行HCG定量测定 ,平均值为 3 5 49mIU/ml血清。另外 ,对 10名不全流产患者、15名葡萄胎患者及 5名早孕误诊患者血清进行HCG定量测定 ,均作出准确诊断。HCG定量测定在临床诊断上有重要意义。该法具有灵敏、快速、准确、无污染等特点。是目前临床上生殖内分泌激素定量测定的好方法。

免疫磁性分离技术在食源性疾病检测中的应用

免疫磁性分离技术是以特异的抗原抗体反应为基础的一种分离技术,它是免疫学和磁载体技术结合而发展起来的一项新技术,具有分离样品速度快、特异性强、操作简单、不需要昂贵的仪器设备等特点,已经广泛应用于细胞分离、病原体检测等领域,本文主要就其在细菌、病毒、寄生虫等食源性疾病检测方面的应用作一综述。

磁性分离酶免疫法在唐氏综合征产前筛查中的应用

目的 :探讨磁性分离酶免疫分析技术 (magnetic -separatedenzymeimmunoassay ,MEIA)在唐氏综合征产前筛查中的实用性。方法 :对MEIA方法测定孕中期母血清甲胎蛋白 (AFP)和游离 β -绒毛促性腺激素 (β -HCG)含量进行方法学检测 ,同时与酶联免疫吸附法 (ELISA)和放射免疫法 (RIA)相比较。并通过检测及随访 1745例孕产妇建立了青岛地区孕中期母血清各孕周AFP、β-HGC中位数值。结果 :MEIA -AFP方法的灵敏度 <0 .2 1IU/ml,批内平均变异系数 (CV)为 4.7% ,批间平均CV为 6 .8% ,平均回收率为 97.4% ,与ELISA、IRMA法高度相关 (r=0 .90 0和 0 .986 )。MEIA - β -HCG方法的灵敏度为 1mIU/ml,批内平均CV为 2 .4% ,批间平均CV为 2 .4% ,平均回收率为 99.6 % ,与ELISA、IRMA法高度相关 (r=0 .942和 0 .976 )。建立了青岛地区孕中期产前筛查各孕周中位数值 ,其随孕周变化趋势与文献报道一致。筛查中暂未发现漏检病例。结论 :MEIA方法适用于测定孕中期母血清AFP和 β -HCG含量 ,进行唐氏综合征和开放性神经管畸形的产前筛查。

免疫磁性微球的制备及对IgG的分离

采用反相悬浮包埋法制备SPA-Sepharose免疫磁性微球,并对产物的结构、粒径、磁性能进行了表征,所得产物粒径大约为5μm,表面包裹葡萄球菌蛋白A(Staphylococcal Protein A,简称SPA),分散性较好,具有超顺磁性。利用SPA对免疫球蛋白G(IgG)的特异性吸附反应及磁性微球的超顺磁性,从猪血清中分离IgG,试验结果表明:SPA免疫磁性微球对猪血清的最大吸附效率是70.12%,可反复使用29次。

磁性分离酶标免疫分析法测定孕酮、睾酮和垂体泌乳素

磁性分离酶标免疫分析技术是８０年代中期由瑞士Ｓｅｒｏｎｏ诊断中心发明的一种非同位素免疫检测先进技术，又称为磁性抗体免疫分析技术（ＭＡＩＡ）［１］。该技术使双抗体夹心酶联免疫技术在游离型标记抗体和标记抗原抗体复合物分离中具有完全和快速的优点。我们在用...

磁性分离酶联免疫测定在糖尿病中的临床应用

目的 :观察磁性分离酶联免疫测定技术水平。方法 :使用磁性分离酶联免疫测定 (IEMA )技术 ,测定糖尿病患者 C-肽、胰岛素。 1型糖尿病 (IDDM) 12例 ,2型糖尿病 (NIDDM) 90例 ,健康人正常对照 2 0例 ,做 OGTT试验 ,使用BIOCHEM IMMU NOSYSTEMS公司发明的 SEROZYME酶联免疫双抗体夹心检测系统和 BIODATA试剂测定胰岛素(INS)和 C-肽 (C-P)。结果 :IEMA批内变系数 (CV% )为 3.95 % ,批间变系数为 6 .72 % ,灵敏度分别为 0 .5 7m U / L和0 .39pmol/ L。 IEMA结果与放射免疫法 (RIA )之间有显著的直线相关性 (P<0 .0 1)。健康人 OGTT试验时 ,空腹胰岛素和 C肽分别为 (15 .76± 6 .32 ) m U/ L 和 (8.71± 16 3.38) pm ol/ L,在 30～ 6 0分钟达到峰值 ,平均为 (5 9.6 4± 7.84) m U/ L 和(2 0 73.83± 2 88.0 9) pm ol/ L。IDDM患者胰岛素和 C-肽空腹水平低 ,OGTT试验无峰值出现 ,而 NIDDM患者峰值延迟。结论 :IEMA是一种灵敏、特异、有效、可与免疫放射法相匹敌的非放射标记的免疫化学检测技术。

免疫磁性分离技术在食品微生物快速检验中的应用

免疫磁性分离技术不但广泛用于医学的各个领域，而且在食品卫生检测方面的应用也见端倪。由于食品检样常为固液多相混合体，采用常规方法难以将少量的致病微生物分离出来。借助免疫磁性分离技术，可以达到快速分离的目的。免疫磁性分离方法，是将特异性抗体偶联在磁性颗粒表面，与样品中被检致病微生物发生特异性结合，载有致病微生物的磁性颗粒在外加磁场的作用下，向磁极方向聚集，弃去检样混合液，使致病微生物不但得到分离，而且也得到浓集。免疫磁性分离技术以其特有的性能，在食品卫生检测和研究中取得了较好的结果。

磁性分离酶联免疫激素在女性生殖内分泌中的应用

目的 : 引进磁分离酶联免疫测定 (IEMA)新技术 ,应用于女性生殖内分泌原发不孕患者的临床检测。方法 将患者分为 3期 :卵泡期、排卵期、黄体期。正常对照采用北京医院妇产科。使用北京倍爱康生物技术有限公司提供加拿大BiochemImmunoystems公司生产的SEOZYME I型内分泌定量测定仪及与之配套试剂盒 ,测定FSH、LH、PRL、E2、P、T6项激素。结果 与正常参考值对照 ,卵泡期FSH、PRL、E2、P、T有显著性差异 ;排卵期FSH、LH、E2、T有显著性差异 ;黄体期LH、PRL、P有显著性差异 ,有统计学意义。结论 IEMA方法稳定可靠 ,特异性高 ,无放射性污染的免疫化学检测技术 ,在生殖内分泌检测中有较大的应用价值。

免疫磁性分离技术在循环肿瘤细胞检测中的应用

免疫磁性分离技术是一种通过形成抗原 抗体 磁珠免疫复合物分离特定细胞的细胞分选技术 ,国外在循环肿瘤细胞检测的研究中应用较多。近年来随着纳米技术的飞速发展 ,出现了纳米免疫磁珠。由于具有高特异性、高浓缩性、高分离率 ,且不影响细胞活性等特点 ,因此 ,能从大量外周血细胞中筛选出极少量的肿瘤细胞。与常规检测技术 (如免疫细胞化学、RT PCR、流式细胞仪等 )相结合 ,弥补了常规检测技术的不足 。

免疫磁性技术分离提纯酵母样真菌的研究

用包被有羊抗鼠ＩｇＧ的磁珠结合鼠抗白念单抗后，对白念珠菌、类星形念珠菌、热带念珠菌、新生隐球菌、光滑念珠菌菌悬液及白念珠菌与新生隐球菌两菌混悬液进行分离纯化研究。结果：免疫磁珠和白念珠菌、类星形念珠菌结合尤为明显，与热带念珠菌少量结合，而不和新生隐球菌，光滑念珠菌结合。通过此种方法能去除非念珠菌部分，而达到纯化菌种之目的。获得的纯化菌种仍有生物活性。

嗜硫性磁性微球技术特异性分离人免疫球蛋白G

利用微悬浮聚合技术,以二乙烯基苯、醋酸乙烯酯为单体,制备了微米级的顺磁性的聚合物微球,磁含量高于24%,饱和磁强度为16.7emu/g,平均粒径介于0.6~20μm,并在其表面修饰二乙烯基砜和2-巯基苯并噻唑。所制备的磁性聚合物微球,在低盐浓度下,依靠配基对抗体的电子-供电子（EDA）效应,可以实现磁性微球对人血清中的免疫球蛋白G（IgG）的特异性吸附行为。在解吸附过程中,洗提液中的盐种类对分离过程产生重要影响。温度对其吸附行为的影响较小,整个分离过程可以在室温条件下进行。利用这种嗜硫性磁球分离技术,条件温和,效率较高,分离出的抗体纯度较高,且生物活性没有损失。

磁性分离免疫法检测T3、T4、TSH的评价

目的用Serozyme-IEMA分析仪检测血清T3、T4、TSH,进行临床和实验室考核。方法将本分析仪与放免法(RIA)进行对比研究。结果健康人(N=482)血清T3、T4、TSH水平(x±s)分别为1.2±0.4ng/ml、92.0±18.1μg/dl、1.7±1.6μIU/ml;初诊甲亢组T3、T4水平明显升高TSH水平明显下降,随着治疗,T3、T4降低TSH升高;甲减组T4水平降低TSH水平明显升高;甲状腺瘤、甲状腺肿、甲状腺结节等各疾病组与正常对照组无明显差异。仪器精密度和准确度均良好:T3、T4、TSH的批内和批间变异系数(CV%)分别为2.5～5.5%、1.6～4.4%、1.1～2.6%和5.5～9.5%、4.6～7.4%、3.1～7.6%;回收率分别为91～105%、91～107%、91～109%。T3、T4、TSH联合检测对甲亢和甲减诊断的敏感性和特异性分别为93.6%、94.6%和98.1%、97.8%。结论本分析仪对甲状腺功能的检测敏感、特异,完全可替代RIA,作为基层实验室检测甲状腺功能的良好仪器。

免疫磁性糊精微球的制备及快速分离检测单增李斯特菌

研究免疫磁性糊精微球的制备及在快速分离检测单增李斯特菌中的应用。将磁性糊精微球由环氧氯丙烷活化后,与抗体交联制得免疫磁性糊精微球,通过单因素和正交试验对合成条件进行优化。再利用合成好的免疫磁性糊精微球捕获单増李斯特菌,在外加磁场的作用下,富集免疫磁性糊精微球,提取细菌DNA,经过PCR扩增后,进行琼脂糖凝胶电泳。结果表明:活化反应的最佳条件,环氧氯丙烷用量0.4 mL/g,NaOH浓度2.0 mol/L,最佳反应时间5 h;制备免疫磁性糊精微球的最优合成条件:抗体质量浓度1.0 mg/mL,反应温度28℃,反应时间2.5 h;捕获单增李斯特菌时,免疫磁性糊精微球的最佳用量100μL、最佳捕获时间1 h。通过研究得出免疫磁性糊精微球可以快速捕获单增李斯特菌,并能扩增出特异性产物,检出限达到每mL菌液中10个单增李斯特菌。

免疫磁性分离法纯化外周血CD34阳性细胞

有关造血干细胞的研究是目前实验血液学和临床血液学的核心内容。随着分子生物学、细胞生物学、免疫学、生物化学及实验动物学的不断更新发展，人们对造血干细胞也就有了更深刻的理解。造血干细胞目前在形态还不能与淋巴细胞分开，故早期对造血干细胞的性能研究是在分离单个核细胞的基础上进行的。随着各种技术的迅猛发展，近几年对造血干细胞的研究多是在对其分离纯化的基础上进行的。细胞表面CD34抗原是分子量为110～120KD的高度糖基化Ⅰ型膜蛋白，是目前公认的一个造血干祖细胞标志，利用免疫磁珠(MACS)或流式细胞仪分离出CD34阳性细胞及其亚群可得到较纯的造血干祖细胞。

磁性分离酶免疫法在唐氏综合征产前筛查中的应用

目的:探讨磁性分离酶免疫分析技术(magnetic-separated enzyme immunoassay,MEIA)在唐氏综合征产前筛查中的实用性。方法:对MEIA方法对孕中期母血清甲胎蛋白(AFP)和游离β-绒毛促性腺激素(β-hCG)含量进行方法学检测,同时与酶联免疫吸附法(ELISA)和放射免疫法(RIA)相比较。并通过检测及随访1 745例孕产妇建立青岛地区孕中期各孕周母血清AFP、β-hCG中位数值。结果:MEIA-AFP方法的灵敏度<0.2IU/ml,批内平均变异系数(CV)为4.7％,批间平均CV为6.8％。平均回收率为97.4％,与ELISA、RIA方法高度相关(r=0.900,r=0.986)MEIA-β-hCG方法的灵敏度为1IU/L,批内平均CV为2.4％,批间平均CV为4.2％,平均回收率为99.6％,与ELISA、IRMA方法高度相关(r=0.942,r=0.976)。建立了青岛地区争中期各孕周母血清 AFP、β-hCG中位数值,其中位值随孕周变化趋势与文献报道一致。筛查中暂未发现漏检病例。结论;MEIA方法适用于测定孕中期母血清AFP和β-hCG含量,进行唐氏综合征和开放性神经管畸形的产前筛查。