免疫磁性分选系统大量分选CD34^+细胞的实验研究

CD3 4 +细胞的分离纯化在自体外周血干细胞、异基因骨髓移植 /外周血干细胞移植及干细胞研究中具有重要的应用价值。为了摸索大量分选CD3 4 +细胞的方法 ,本研究应用Isolex3 0 0i磁性分选系统富集CD3 4 +细胞 ,采用流式细胞术监测分选前后细胞表面标志 ,经CD3 4 +细胞体外增殖实验及克隆形成实验验证分选获得的CD3 4 +细胞生物学活性。结果显示 ,所完成的 5例次自体外周血富集CD3 4 +细胞时 ,先收获单个核细胞约 ( 3 .5 -6.0 )× 10 10 ,CD3 4 +细胞占单个核细胞百分率为 ( 0 .5 5 - 1.2 ) % ;收获的CD3 4 +阳性细胞总数为 ( 2 - 3 )× 10 8,纯度为 ( 75 - 85 ) % ,回收率为 ( 4 0 - 65 ) %。体外实验表明 ,在SCF +IL 3 +FL +TPO +EPO存在下 ,经过 3 - 4天培养 ,可扩增 2 - 3倍 ;经CFU GM、BFU E集落形成实验显示具有形成集落的能力 ,证实分选后细胞具有造血祖细胞生物活性。结论 :应用Isolex3 0 0iCD3 4 +细胞分选仪可以高效大量富集CD3 4 +细胞 ,适于临床应用。

免疫磁性分选骨髓干细胞亚群Thy-1^(low) Lin^- Sca-1^+

目的 采用免疫磁性细胞分选系统 (MACS)分离纯化骨髓干细胞亚群Thy 1lowLin Sca 1+ 。方法 收集小鼠股骨骨髓细胞 ,用MACS系统 ,通过三步分选步骤选择Thy 1lowSca 1+ 细胞 ,去除Lin+ 细胞 ,得骨髓干细胞亚群Thy 1lowLin Sca 1+ ,流式细胞仪分析其纯度 ,计算回收率。结果 分选出的Thy 1lowLin Sca 1+ 细胞纯度和回收率分别为 72 .3 6% ,82 .43 % ,达到MACS分选CD3 4+ 细胞水平。结论 MACS系统能有效分选骨髓干细胞亚群Thy 1lowLin Sca 1+ ,纯度和回收率高。

免疫磁性活化细胞分选方法优化及纯化后细胞的生物学特性检测

目的:改良常规免疫磁性活化细胞分选(MACS)的分离纯化方法,提高分选后细胞的纯度并确保细胞仍具有良好活性及功能。方法:以干细胞抗原-1(Sca-1)标记的Sca-1+造血干/祖细胞(Sca-1+HSC/HPC)为例,分别用改良后和常规MACS法分选出小鼠骨髓细胞Sca-1+细胞,流式细胞术检测两种分选方法获得Sca-1+细胞纯度;计算阳性细胞回收率;台酚蓝染色检测分选细胞存活百分率;CCK-8检测细胞增殖,混合造血祖细胞(CFU-Mix)体外培养评价分选Sca-1+细胞分化能力。结果:改良MACS法分选获得的Sca-1+细胞纯度达93%以上(常规MACS法仅为87%),阳性细胞的回收率可达73%(常规法仅为62.3%);细胞存活率、细胞增殖和CFU-Mix集落形成能力两种分选方法无明显差别。结论:改良法能明显提高细胞分选纯度及回收率,细胞活性和功能保持良好,值得各种细胞免疫磁性分选参考采用。

免疫磁性细胞分选技术净化乳腺癌自体造血干细胞的实验研究

目的 评价免疫磁性细胞分选技术对乳腺癌患者的自体外周血干细胞 (APBSC)的净化效果。方法 对混有 1%MCF 7细胞系的非乳腺癌患者的APBSC以及 10份乳腺癌患者的APBSC同时进行免疫磁珠正净化、负净化和 - / +联合净化 ,比较CD34+ 细胞纯度、CD34+ 细胞回收率以及造血干细胞集落形成单位 (CFC)的富集倍数。建立免疫细胞组织化学方法 (ICC)和流式细胞术 (FCM)两种乳腺癌细胞的检测方法 ,评价三种净化方法的效果。比较细胞冻存时间对净化效果的影响。结果 10份乳腺癌患者的APBSC经正净化后 ,CD34+ 细胞纯度为 5 5 1% (2 5 9%～ 99 5 % )、回收率为 39 4 %(34 0 %～ 80 0 % ) ,乳腺癌细胞得到 2 1log(1 1log～ 2 7log)的净化。对 6例ICC检测阳性的APBSC进行 - / +联合净化后 ,CD34+ 细胞纯度为 6 4 3% (34 0 %～ 86 4 % )、回收率为 35 0 % (2 4 0 %～5 2 5 % ) ,乳腺癌细胞得到 3 0log(1 8log～ 3 9log)的清除 ,粒 /单系集落形成单位 (CFU GM)和爆式红系集落形成单位 (BFU E)分别得到 2 2倍和 3 1倍的富集。净化前全部肿瘤细胞阳性的APBSC ,经- / +联合净化后 ,ICC法检测仅有 1例表达阳性 ,FCM法检测肿瘤细胞数量明显减少。结论 免疫磁性分选APBSC是一种高效、快捷、简便的净化手段 ,- / +净?

抗体修饰抑制性Ly49受体对小鼠NK细胞功能的影响

目的:观察单克隆抗体修饰小鼠NK细胞的抑制性Ly49受体对NK细胞功能的影响。方法:免疫磁性分选近交系小鼠C57BL/6J脾脏NK细胞,以小鼠肿瘤细胞YAC-1和M1细胞为研究对象,观察单克隆抗体封闭NK细胞的抑制性受体Ly49C/I后,对YAC-1和M1细胞的杀伤作用和对M1细胞克隆形成的影响,并观察抗体修饰对C57BL/6J小鼠脾脏NK细胞与BALB/C小鼠脾单个核细胞之间单向混合淋巴细胞反应的影响。结果:抗体修饰后,NK细胞对M1细胞的杀伤能力增强(10.7%±0.5%vs84.4%±2.9%),并与抗体浓度呈现量效关系(P<0.05);而对YAC-1细胞的杀伤作用则无明显的变化,仅0μg/ml组与60μg/ml组有统计学差异(P<0.05)。抗体作用后,对M1细胞克隆形成的抑制率增高(8.2%±2.2%vs94.0%±3.3%),并与抗体浓度呈现量效关系(P<0.05)。混合淋巴细胞反应中反应细胞的增殖指数降低(0.398±0.025vs0.128±0.014),并具有统计学差异(P<0.05)。结论:以抗体修饰抑制性Ly49受体有助于活化NK细胞,提高抗肿瘤能力。