应用免疫磁性分离技术检测小细胞肺癌循环癌细胞的实验研究

目的 在免疫磁性细胞分离技术的基础上探索一种能检测小细胞肺癌循环癌细胞敏感而有效的方法。方法 将微量小细胞肺癌细胞按比例加入到外周血单个核细胞悬液中混匀 ,再通过特异性单抗包被的免疫磁性微珠吸附、富集 ,免疫细胞化学鉴定 ,计算癌细胞的回收率和检测敏感性。结果 免疫磁性微珠与小细胞肺癌能敏感而特异地结合。与免疫细胞化学方法结合可检出 45 .6%混入外周血单个核细胞中的微量癌细胞 ,未有假阳性。应用此种方法 ,每 5ml外周血单个核细胞悬液中含有 5个癌细胞阳性率可达 4/5。结论 免疫磁性细胞分离技术是一项检测外周血中循环癌细胞的有效技术 。

免疫磁性分离技术在循环肿瘤细胞检测中的应用

免疫磁性分离技术是一种通过形成抗原 抗体 磁珠免疫复合物分离特定细胞的细胞分选技术 ,国外在循环肿瘤细胞检测的研究中应用较多。近年来随着纳米技术的飞速发展 ,出现了纳米免疫磁珠。由于具有高特异性、高浓缩性、高分离率 ,且不影响细胞活性等特点 ,因此 ,能从大量外周血细胞中筛选出极少量的肿瘤细胞。与常规检测技术 (如免疫细胞化学、RT PCR、流式细胞仪等 )相结合 ,弥补了常规检测技术的不足 。

免疫磁性分选系统大量分选CD34^+细胞的实验研究

CD3 4 +细胞的分离纯化在自体外周血干细胞、异基因骨髓移植 /外周血干细胞移植及干细胞研究中具有重要的应用价值。为了摸索大量分选CD3 4 +细胞的方法 ,本研究应用Isolex3 0 0i磁性分选系统富集CD3 4 +细胞 ,采用流式细胞术监测分选前后细胞表面标志 ,经CD3 4 +细胞体外增殖实验及克隆形成实验验证分选获得的CD3 4 +细胞生物学活性。结果显示 ,所完成的 5例次自体外周血富集CD3 4 +细胞时 ,先收获单个核细胞约 ( 3 .5 -6.0 )× 10 10 ,CD3 4 +细胞占单个核细胞百分率为 ( 0 .5 5 - 1.2 ) % ;收获的CD3 4 +阳性细胞总数为 ( 2 - 3 )× 10 8,纯度为 ( 75 - 85 ) % ,回收率为 ( 4 0 - 65 ) %。体外实验表明 ,在SCF +IL 3 +FL +TPO +EPO存在下 ,经过 3 - 4天培养 ,可扩增 2 - 3倍 ;经CFU GM、BFU E集落形成实验显示具有形成集落的能力 ,证实分选后细胞具有造血祖细胞生物活性。结论 :应用Isolex3 0 0iCD3 4 +细胞分选仪可以高效大量富集CD3 4 +细胞 ,适于临床应用。

应用单克隆抗体-免疫磁珠分离系统分离纯化再生障碍性贫血骨髓CD_(34)^+细胞

目的 分离、纯化再生障碍性贫血 (简称AA)患者骨髓CD3 4+ 细胞 ,探讨其发病机制。方法 对4 2例AA患者 ,以常规方法进行骨髓液采集和有核细胞分离 ,用单克隆抗体 免疫磁珠分离系统 (MACS)分离、纯化骨髓CD3 4+ 细胞 ,用碱性磷酸酶 抗碱性磷酸酶 (APAAP)法作CD3 4+ 细胞的纯度检测。结果 骨髓CD3 4+ 细胞纯度达 95 %～ 99% ,AA患者骨髓CD3 4+ 细胞多呈单个、散在分布 ,着色较淡 ;而对照组骨髓CD3 4+ 细胞多呈均匀或丛簇状分布 ,着色较深。结论 应用MACS分离AA骨髓CD3 4+ 细胞 ,特异性强、纯度高 ,是研究AA骨髓CD3 4+ 细胞功能、形态的最直接、客观。

人工免疫系统中免疫细胞的分离演化策略

免疫细胞是人工免疫系统最关键的组件,它在整个生命周期的演变过程将直接决定免疫系统的性能。文章针对免疫细胞的浓度和系统识别效率这两个相互制约的约束条件,分析了免疫细胞在不同阶段的差异,提出了一个免疫细胞的进化策略。论文采用不同的适应方法,控制细胞群体的演化方向。并充分考虑单个细胞的覆盖能力和免疫细胞群体对资源的占用问题,采用多目标优化策略,使免疫系统的有效性得到明显改善。

免疫磁性分离法纯化外周血CD34阳性细胞

有关造血干细胞的研究是目前实验血液学和临床血液学的核心内容。随着分子生物学、细胞生物学、免疫学、生物化学及实验动物学的不断更新发展，人们对造血干细胞也就有了更深刻的理解。造血干细胞目前在形态还不能与淋巴细胞分开，故早期对造血干细胞的性能研究是在分离单个核细胞的基础上进行的。随着各种技术的迅猛发展，近几年对造血干细胞的研究多是在对其分离纯化的基础上进行的。细胞表面CD34抗原是分子量为110～120KD的高度糖基化Ⅰ型膜蛋白，是目前公认的一个造血干祖细胞标志，利用免疫磁珠(MACS)或流式细胞仪分离出CD34阳性细胞及其亚群可得到较纯的造血干祖细胞。

李斯特氏菌因子血清的制备及食品检测的免疫磁性分离-PCR(MIPA)方法的建立

首先进行了李斯特氏菌因子血清的研制，制备出了可对所有李斯特氏菌分型的 １５ 个 Ｏ 抗原因子和４ 个 Ｈ 抗原因子的因子血清。利用复合因子血清的多克隆抗体包被磁性球，对食品中的单核细胞增多性李斯特氏菌进行免疫磁性分离，并与 Ｐ Ｃ Ｒ 方法相结合，建立了检测食品中单核细胞增多性李斯特氏菌的 Ｍ Ｉ Ｐ Ａ方法（免疫磁性分离—聚合酶链反应方法，ｍ ａｇｎ ｅｔｉｃ ｉｍ ｍ ｕｎｏｐｏｌｙｍ ｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ ａｓｓａｙ）。对菌液、模拟样品的检测表明，本方法能够有效地克服食品基质、培养基成分和杂菌对 Ｐ Ｃ Ｒ 检验的干扰作用。食品样品在 Ｅ Ｂ增菌液中增菌 １２ ｈ 后，检测的敏感度达 ５ Ｃ Ｆ Ｕ／ｍ Ｌ，可以在 ２０ ｈ 内完成检测。本方法对实际食品样品的检测结果，与国家标准检验方法检测的结果一致。

CD34^+造血细胞免疫磁性高效富集仪CMSI-100的研制及应用

根据免疫磁性分离原理 ,选用能产生高磁场强的磁性材料钕铁硼 ,其核心是将其设计成由低碳钢间隔的 4块钕铁硼 ,并且使每块钕铁硼的规格必须限制在 3.5cm× 2 .0cm× 0 .3cm ,以确保每块钕铁硼平面所具有的磁场强度平均可达 2 70 0高斯。当所切磨的钕铁硼规格达不到该标准时 ,由此产生的磁场强度 >2 70 0高斯或 <2 70 0高斯 ,对CD34+造血细胞的分离效果均不理想。经对人正常骨髓CD34+ 造血细胞的免疫磁性分离证实 ,采用CMSI 10 0富集后的CD34+ 造血细胞纯度平均 >90 % ,细胞活力 >95 % ,达到国际上最好水平 ,其性能完全可与国际通用先进的IsolexTM5

磁性细胞分离技术的原理及研究进展

磁性分离技术最早应用于工业上磁性与非磁性物质的分离,如初级铁矿的富集纯化,锅炉水中铁磁杂质的去除等.自二十世纪八十年代以来,此项技术开始推广于各种细胞的分离与纯化,并应用于生命科学各个领域的研究.本文介绍了磁性细胞分离技术(Magnetic Cell Seperation,MACS)的原理及研究进展.

免疫磁性分选骨髓干细胞亚群Thy-1^(low) Lin^- Sca-1^+

目的 采用免疫磁性细胞分选系统 (MACS)分离纯化骨髓干细胞亚群Thy 1lowLin Sca 1+ 。方法 收集小鼠股骨骨髓细胞 ,用MACS系统 ,通过三步分选步骤选择Thy 1lowSca 1+ 细胞 ,去除Lin+ 细胞 ,得骨髓干细胞亚群Thy 1lowLin Sca 1+ ,流式细胞仪分析其纯度 ,计算回收率。结果 分选出的Thy 1lowLin Sca 1+ 细胞纯度和回收率分别为 72 .3 6% ,82 .43 % ,达到MACS分选CD3 4+ 细胞水平。结论 MACS系统能有效分选骨髓干细胞亚群Thy 1lowLin Sca 1+ ,纯度和回收率高。

基于免疫细胞分离进化的聚类算法研究

免疫细胞是生物免疫系统中的重要成分,它在整个生命周期的演变过程决定了免疫系统的性能。成熟免疫细胞和记忆免疫细胞的相互进化过程,体现出良好的识别、分类作用。通过借鉴免疫细胞的不同进化机理而抽取的聚类算法是一种新的聚类算法,能有效地提取数据的有用信息,表现出了其良好的应用前景。

免疫磁珠选择性清除人异基因反应性T细胞的实验研究

本研究用磁性细胞分离系统清除CD25+和CD69+人同种异体反应性T细胞,为减轻异基因骨髓移植后的移植物抗宿主病探索新的手段。对健康供者外周血单个核细胞与白血病缓解病人的骨髓单个核细胞进行单向混合淋巴细胞培养。3天后,通过磁性细胞分离系统清除CD25+和CD69+的同种异体反应性T细胞;通过3H-TdR掺入实验,观察处理后的供者外周血单个核细胞对同一病人的骨髓单个核细胞及无关者外周血单个核细胞的反应性。结果表明:与未清除组相比,清除后供者细胞对同一病人抗原的反应性降低50%,但保留了大部分对无关者抗原的反应性。结论:在体外反应中清除同种异体反应性T细胞可降低对刺激抗原反应,同时保留大部分对无关者抗原的反应。

以单克隆抗体和磁性免疫珠选择性清除骨髓中的骨髓瘤细胞(文摘)

为使自家骨髓移植成功，消灭体内残存的肿瘤细胞的同时，把混于自家骨髓移植片中的肿瘤细胞，在对造血千细胞造成损害之前就选择性地清除是重要的，最近开发的磁性免疫珠是含铁的有细胞分离作用的均一的聚苯乙烯珠。作者等报告，将它与单克隆抗体比较，用骨髓瘤细胞实验，能清除3～4log的肿瘤细胞。

小鼠CD4^+CD25^+T细胞的分离、鉴定和体外功能的检测

目的 建立CD4 + CD2 5 + T细胞的免疫磁性分离(MACS)方法,并检测其体外免疫抑制功能。方法 分离C5 7BL 6小鼠和Balb c小鼠脾脏细胞后运用MACS法分离CD4 + CD2 5 + T淋巴细胞,用台盼蓝染色法和流式细胞法检测选出细胞的活性和纯度,用淋巴细胞转化实验分析其免疫抑制功能。结果 MACS分选法分选出的CD4 + CD2 5 + T细胞活性>97% ,纯度>95 % ;此方法获得的CD4 + CD2 5 + T细胞在体外不增殖,经丝裂原活化后可以抑制同品系小鼠和异品系小鼠的CD4 + CD2 5 -T细胞增殖,这种抑制作用具有剂量依赖性。结论 MACS法可简单迅速分选出高纯度无菌CD4 + CD2 5 + T细胞,且不影响细胞活力。CD4 + CD2 5 + T调节性细胞在体外具有免疫无能和免疫抑制作用;丝裂原活化的该细胞免疫抑制功能具有剂量依赖性,但不具有抗原特异性。

免疫磁性微球的研究进展

免疫磁性微球是免疫学与磁性微球结合而发展起来的一类新型材料 ,免疫磁性分离法由于具有高效、快速、低毒、操作简单等优点 ,已广泛地应用于细胞学、免疫学、分子生物学等领域。本文简要介绍了免疫磁性微球的结构、性质、分离原理和特点及其在国内外的制备现状 ,并对其在细胞分离与提纯、细胞体外扩增、免疫检测、核酸与基因工程、HLA分型。

小鼠CD8^+记忆性T淋巴细胞的分离、纯化和体外功能检测

目的分离CD8+记忆性T淋巴细胞,检测其体外部分功能。方法建立小鼠皮肤移植模型,制备受体脾细胞悬液,采用免疫磁珠方法分离Tm细胞、台盼蓝细胞染色检测其细胞活性、流式细胞仪检测分选所得细胞纯度,ELISA方法检测不同抗原刺激Tm细胞后的IL-2和IL-10的浓度。结果小鼠皮肤移植存活率为93.0%(28/30),皮肤移植皮片平均存活时间(12.18±1.03)d;CD8+Tm的活细胞百分率为98.5%;流式细胞术检测表型CD8+CD4+细胞比例占(97.75±0.9)%,CD8+CD4-细胞比例占(96.0±1.02)%;在供体脾细胞、刀豆素A、Wistar大鼠脾细胞和无刺激物作用下,2×107mL-1的CD8+Tm液中细胞因子IL-2和IL-10的浓度分别为:(57.32±6.52),(38.34±5.21),(13.51±3.35),(11.32±2.51);(9.21±1.02),(11.52±2.15),(35.42±4.59),(39.21±7.3);差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论通过免疫磁性分离技术和流式细胞技术可分离出高纯度的CD8+Tm细胞,具有良好的细胞特性,为Tm在移植免疫方面的研究提供了技术方法。

新生大鼠中枢神经系统不同区域细胞生长的形态学比较研究

目的分离培养新生sD大鼠的中枢神经系统不同区域细胞并观察其生长情况．方法分离出生后1～3dSD大鼠大脑皮质、小脑皮质、海马、脑室下区、脑干、脊髓细胞，加入含有10％小牛血清的DMEM／F12培养基进行培养，在倒置相差显微镜下观察其生长情况并进行对比研究，于第10天将细胞固定后采用免疫细胞化学技术检测特异性神经元抗原NSE和特异性星形胶质细胞抗原GFAP的表达．结果经观察和免疫细胞化学鉴定后发现各区域均有神经元和星形胶质细胞生长至第10天，细胞生长旺盛，神经元胞体呈三角形或椭圆形，体积较大，四周晕光明显，神经突起多而粗大，分枝互成网络；星形胶质细胞细胞核为椭圆形，常偏于胞体的一侧，胞突丰富，分支多．结论我们培养成活了新生SD大鼠中枢神经系统各区域细胞．对比研究了各区域细胞的生长情况．并鉴定了各区域中的神经元和星形胶质细胞．

胎鼠纹状体神经干细胞分离培养方法的改进

目的:利用有血清和多聚赖氨酸培养液中加入SD14d胚胎大鼠纹状体区神经干细胞,探讨其分离、纯化神经干细胞操作技术的改进。方法:实验于2003-03/2004-11在广州第一军医大学珠江医院神经外科实验室完成。①选用SD大鼠20只,取孕13～14d的SD大鼠胚胎纹状体,吸管吹打(不超过10次)后,用组织剪剪成1mm3块状,以1.25mL/L的胰酶,在37℃下消化20min,以S-Dulbecco改良的Eagle培养基-F12中止消化,采用1000r/min离心10min,显微镜下细胞记数,以1×104/cm2接种到改良的有血清和多聚赖氨酸铺被的12孔培养板上,培养液为Dulbecco改良的Eagle培养基-F12加上B27,加入血清和20μg/L表皮生长因子。7d后用吸管吸取漂浮的细胞球,机械吹打成单细胞悬液,按每培养孔1×104/cm2细胞行传代再培养,此后5～7d再传代,方法同前。②利用神经干细胞与星形胶质细胞、神经细胞以及成纤维细胞贴壁之间的差异,使细胞分为贴壁和漂浮的两层细胞,分离去掉贴壁的神经细胞、成纤维细胞、星形胶质细胞以及部分的神经干细胞,得到漂浮的细胞球。③机械吹打后制成单细胞悬液,再传代培养,细胞重新增殖成细胞球,应用免疫细胞化学技术特异性抗原巢蛋白检测最初的细胞球、吹打后的单细胞和重新增殖的细胞球巢蛋白抗原的表达和分化后特异性成熟神经细胞抗原的表达。巢蛋白为神经干细胞特异性标记物,其阳性表达表明神经干细胞的存在。结果:①原代培养的纹状体细胞第2天可见贴壁生长的神经细胞、星形胶质细胞和增殖的细胞球(约10～16个细胞大小),漂浮的细胞开始出芽并增殖;第3天贴壁的细胞球继续增殖(约50个细胞大小),漂浮的细胞则增殖成4～8个大小的细胞球;第4～7天贴壁的细胞球开始分化,漂浮的细胞则继续增殖成约30个细胞大小的细胞球,巢蛋白染色阳性。②漂浮的细胞,吹打后行传代培养,加入表皮生长因子、血清和多聚赖氨酸,细胞仍漂浮生长,1周后增殖成约70～80个细胞大小的细胞球,吸管吹打继续再培养,细胞仍漂浮增殖成细胞球,巢蛋白抗原表现阳性。③免疫细胞化学染色显示原代培养中贴壁的细胞球、吹打后的单细胞、漂浮的细胞球巢蛋白染色阳性,吹打后的细胞若不加入表皮生长因子,则细胞染色显示胶质纤维酸性蛋白和神经丝蛋白阳性。分离纯化后的细胞具有自我更新能力和多分化潜能,有很强的增殖能力。结论:利用有血清和多聚赖氨酸加入的方法分离培养的原代细胞球巢蛋白表达阳性,具有纯化度高,存活时间长的特点。

磁性分离技术及在微生物检测上的应用

微生物检测技术就是从样品中分离和鉴定目的微生物、通常我们使用选择性培养基来获得单个的纯化目的微生物。如果对于受到损伤的和热应激的微生物还需经过增菌培养,增菌过程应包括前增菌、选择性增菌和后增菌。因此从样品中检测病原微生物需很长的时间。

磁性纳米载体用于循环肿瘤细胞的检测

循环肿瘤细胞(circulating tumor cell,CTC)是从原发肿瘤分离进入外周血或淋巴循环的肿瘤细胞,与肿瘤转移密切相关。CTC作为液体活检重要标志物之一,支持实时动态重复检测,对于肿瘤的早期筛查、转移抑制、预后评估、复发监测、个性化治疗指导具有重要意义。然而CTC在血液中含量极低,寻找稳定性好、灵敏度高及特异性强的CTC检测方法是当前研究的热点。近年来,磁性纳米载体由于生物相容性好、表面易修饰和磁响应速度快等优势在CTC检测中受到广泛关注。本文阐述了CTC检测的意义,系统归纳了磁性纳米载体用于CTC检测的设计方案,通过巧妙设计构建理想的磁性纳米载体,包括CTC的特异性捕获,在特定刺激下实现CTC的释放,并对其捕获与释放过程进行监测,从而实现CTC的高效检测。