免疫磁性分选系统大量分选CD34^+细胞的实验研究

CD3 4 +细胞的分离纯化在自体外周血干细胞、异基因骨髓移植 /外周血干细胞移植及干细胞研究中具有重要的应用价值。为了摸索大量分选CD3 4 +细胞的方法 ,本研究应用Isolex3 0 0i磁性分选系统富集CD3 4 +细胞 ,采用流式细胞术监测分选前后细胞表面标志 ,经CD3 4 +细胞体外增殖实验及克隆形成实验验证分选获得的CD3 4 +细胞生物学活性。结果显示 ,所完成的 5例次自体外周血富集CD3 4 +细胞时 ,先收获单个核细胞约 ( 3 .5 -6.0 )× 10 10 ,CD3 4 +细胞占单个核细胞百分率为 ( 0 .5 5 - 1.2 ) % ;收获的CD3 4 +阳性细胞总数为 ( 2 - 3 )× 10 8,纯度为 ( 75 - 85 ) % ,回收率为 ( 4 0 - 65 ) %。体外实验表明 ,在SCF +IL 3 +FL +TPO +EPO存在下 ,经过 3 - 4天培养 ,可扩增 2 - 3倍 ;经CFU GM、BFU E集落形成实验显示具有形成集落的能力 ,证实分选后细胞具有造血祖细胞生物活性。结论 :应用Isolex3 0 0iCD3 4 +细胞分选仪可以高效大量富集CD3 4 +细胞 ,适于临床应用。

免疫磁性分选骨髓干细胞亚群Thy-1^(low) Lin^- Sca-1^+

目的 采用免疫磁性细胞分选系统 (MACS)分离纯化骨髓干细胞亚群Thy 1lowLin Sca 1+ 。方法 收集小鼠股骨骨髓细胞 ,用MACS系统 ,通过三步分选步骤选择Thy 1lowSca 1+ 细胞 ,去除Lin+ 细胞 ,得骨髓干细胞亚群Thy 1lowLin Sca 1+ ,流式细胞仪分析其纯度 ,计算回收率。结果 分选出的Thy 1lowLin Sca 1+ 细胞纯度和回收率分别为 72 .3 6% ,82 .43 % ,达到MACS分选CD3 4+ 细胞水平。结论 MACS系统能有效分选骨髓干细胞亚群Thy 1lowLin Sca 1+ ,纯度和回收率高。

免疫磁性活化细胞分选方法优化及纯化后细胞的生物学特性检测

目的:改良常规免疫磁性活化细胞分选(MACS)的分离纯化方法,提高分选后细胞的纯度并确保细胞仍具有良好活性及功能。方法:以干细胞抗原-1(Sca-1)标记的Sca-1+造血干/祖细胞(Sca-1+HSC/HPC)为例,分别用改良后和常规MACS法分选出小鼠骨髓细胞Sca-1+细胞,流式细胞术检测两种分选方法获得Sca-1+细胞纯度;计算阳性细胞回收率;台酚蓝染色检测分选细胞存活百分率;CCK-8检测细胞增殖,混合造血祖细胞(CFU-Mix)体外培养评价分选Sca-1+细胞分化能力。结果:改良MACS法分选获得的Sca-1+细胞纯度达93%以上(常规MACS法仅为87%),阳性细胞的回收率可达73%(常规法仅为62.3%);细胞存活率、细胞增殖和CFU-Mix集落形成能力两种分选方法无明显差别。结论:改良法能明显提高细胞分选纯度及回收率,细胞活性和功能保持良好,值得各种细胞免疫磁性分选参考采用。

免疫磁珠分选系统在分离大鼠骨髓干细胞群中的应用

采用免疫磁珠分选系统(MACS)分离大鼠骨髓Thy-1.1+干细胞群。收集大鼠胫骨和股骨的骨髓细胞,Percoll密度梯度离心分离单个核细胞,Thy1.1单抗标记,间接MACS分离纯化Thy-1.1+干细胞群,流式细胞仪检测其纯度和分选前后CD34+百分比,台盼兰拒染法检测细胞活力,计算回收率。结果表明分选后的Thy-1.1+细胞纯度达94.2%,回收率64.7%;分选后细胞活力为99.6%,与分选前99.8%无明显差异;分选前CD34+百分比为1.2%,与分选后1.3%无差异。MACS能有效分选大鼠骨髓Thy-1.1+干细胞群,所得细胞纯度高,细胞活力保持好。大鼠Thy-1.1抗原与CD34分子无明显相关性。

免疫磁珠分选系统在急性髓系白血病干细胞分离中的应用

目的:采用免疫磁珠分选系统(MACS)分离人白血病骨髓CD34+、CD38-干细胞群。方法:收集人白血病骨髓,Percoll密度梯度离心分离单个核细胞,CD34、38磁性标记,MACS分离纯化CD34+、CD38-干细胞群,流式细胞仪检测其纯度和分选前后CD34+、CD38-百分比,计算回收率。结果:分选后的CD34+、CD38-细胞纯度达72.6±3.2%,回收率85.8±1.2%。结论:免疫磁珠分选系统是一种有效的白血病干细胞分离提纯方法,所得细胞纯度比较高。

免疫磁珠分选系统在分离肝癌干细胞中的应用

目的为进一步研究肝癌干细胞的特性,应用免疫磁珠分选系统分离纯化肝癌细胞系Huh-7中的肝癌干细胞。方法采用EpCAM单克隆抗体包被的微小磁珠(平均直径≤50 nm)标记Huh-7细胞,通过免疫磁珠分选系统分离EpCAM(epithelial cell adhesion molecule,EpCAM)阳性的肝癌干细胞,以流式细胞术检测分离后的肝癌干细胞纯度,以台盼蓝染色法检测细胞活性。结果采用流式细胞仪检测分离前肝癌细胞中EpCAM阳性细胞比率为(13.3±1.106)%,分离后的肝癌干细胞中EpCAM阳性细胞比率达到(99.5±0.200)%,细胞存活率为(96.5±1.518)%。结论采用免疫磁珠分选系统分离肝癌干细胞操作简便、快速有效,为肝癌干细胞的进一步研究奠定了基础。

免疫磁珠选择性清除人异基因反应性T细胞的实验研究

本研究用磁性细胞分离系统清除CD25+和CD69+人同种异体反应性T细胞,为减轻异基因骨髓移植后的移植物抗宿主病探索新的手段。对健康供者外周血单个核细胞与白血病缓解病人的骨髓单个核细胞进行单向混合淋巴细胞培养。3天后,通过磁性细胞分离系统清除CD25+和CD69+的同种异体反应性T细胞;通过3H-TdR掺入实验,观察处理后的供者外周血单个核细胞对同一病人的骨髓单个核细胞及无关者外周血单个核细胞的反应性。结果表明:与未清除组相比,清除后供者细胞对同一病人抗原的反应性降低50%,但保留了大部分对无关者抗原的反应性。结论:在体外反应中清除同种异体反应性T细胞可降低对刺激抗原反应,同时保留大部分对无关者抗原的反应。

磁性纳米粒子装置可加速T细胞生成

美国约翰·霍普金斯大学一科研团队近日发现,一种包含磁性纳米粒子的磁选柱装置能够加速T细胞的生成,该装置或会敲开免疫疗法的大门,在医疗领域得到广泛应用.所谓免疫疗法,就是利用并训练免疫系统更好地抗击癌症和感染的治疗方法.

免疫磁性细胞分选技术净化乳腺癌自体造血干细胞的实验研究

目的 评价免疫磁性细胞分选技术对乳腺癌患者的自体外周血干细胞 (APBSC)的净化效果。方法 对混有 1%MCF 7细胞系的非乳腺癌患者的APBSC以及 10份乳腺癌患者的APBSC同时进行免疫磁珠正净化、负净化和 - / +联合净化 ,比较CD34+ 细胞纯度、CD34+ 细胞回收率以及造血干细胞集落形成单位 (CFC)的富集倍数。建立免疫细胞组织化学方法 (ICC)和流式细胞术 (FCM)两种乳腺癌细胞的检测方法 ,评价三种净化方法的效果。比较细胞冻存时间对净化效果的影响。结果 10份乳腺癌患者的APBSC经正净化后 ,CD34+ 细胞纯度为 5 5 1% (2 5 9%～ 99 5 % )、回收率为 39 4 %(34 0 %～ 80 0 % ) ,乳腺癌细胞得到 2 1log(1 1log～ 2 7log)的净化。对 6例ICC检测阳性的APBSC进行 - / +联合净化后 ,CD34+ 细胞纯度为 6 4 3% (34 0 %～ 86 4 % )、回收率为 35 0 % (2 4 0 %～5 2 5 % ) ,乳腺癌细胞得到 3 0log(1 8log～ 3 9log)的清除 ,粒 /单系集落形成单位 (CFU GM)和爆式红系集落形成单位 (BFU E)分别得到 2 2倍和 3 1倍的富集。净化前全部肿瘤细胞阳性的APBSC ,经- / +联合净化后 ,ICC法检测仅有 1例表达阳性 ,FCM法检测肿瘤细胞数量明显减少。结论 免疫磁性分选APBSC是一种高效、快捷、简便的净化手段 ,- / +净?

抗体修饰抑制性Ly49受体对小鼠NK细胞功能的影响

目的:观察单克隆抗体修饰小鼠NK细胞的抑制性Ly49受体对NK细胞功能的影响。方法:免疫磁性分选近交系小鼠C57BL/6J脾脏NK细胞,以小鼠肿瘤细胞YAC-1和M1细胞为研究对象,观察单克隆抗体封闭NK细胞的抑制性受体Ly49C/I后,对YAC-1和M1细胞的杀伤作用和对M1细胞克隆形成的影响,并观察抗体修饰对C57BL/6J小鼠脾脏NK细胞与BALB/C小鼠脾单个核细胞之间单向混合淋巴细胞反应的影响。结果:抗体修饰后,NK细胞对M1细胞的杀伤能力增强(10.7%±0.5%vs84.4%±2.9%),并与抗体浓度呈现量效关系(P<0.05);而对YAC-1细胞的杀伤作用则无明显的变化,仅0μg/ml组与60μg/ml组有统计学差异(P<0.05)。抗体作用后,对M1细胞克隆形成的抑制率增高(8.2%±2.2%vs94.0%±3.3%),并与抗体浓度呈现量效关系(P<0.05)。混合淋巴细胞反应中反应细胞的增殖指数降低(0.398±0.025vs0.128±0.014),并具有统计学差异(P<0.05)。结论:以抗体修饰抑制性Ly49受体有助于活化NK细胞,提高抗肿瘤能力。

远红外线与磁性对健康的影响

健康是长寿的基础,长寿是健康的表现。联合国世界卫生组织(WHO)宣称:“2000年人人将享有保健”。为实现这一宏伟目标,人们应培养对自己健康的责任感,加强自我保健。

直击肿瘤细胞的“纳米虫”

美国科学家联合开发出一种可在血管中自由游动的纳米虫，它能像导弹一样寻找并直击肿瘤细胞而不会短时间就被身体免疫系统驱逐出血液。科学家们将球形纳米级氧化铁颗粒连接在一起，形成一个长30纳米、“蠕虫”形状的“纳米虫”，它比真正的蠕虫小300万倍。利用纳米虫，医生不仅可以寻找到已经成形的肿瘤甚至可以定位正在形成的肿瘤。纳米虫中的氧化铁成分有超顺磁性，它能在核磁共振成像仪中发亮，多个氧化铁分子联合在一起，就能够提供更强的磁性使信号更明亮，从而帮助医生更精确地诊断肿瘤。

人牙髓干细胞体外分选分化的初步实验研究

目的体外培养人牙髓细胞，分选牙髓干细胞并诱导其分化。方法选择因正畸目的而拔除的健康完整双尖牙，酶消化法进行牙髓细胞培养，并进行来源鉴定。单抗Stro-1标记牙髓干细胞、免疫磁珠分选系统进行分选。矿化液定向诱导分选后的牙髓干细胞，比较诱导前后stro-1染色及改良Gomori钙钴法染色检测碱性磷酸酶（ALP）的改变。结果体外培养人牙髓细胞呈成纤维细胞样，抗波形丝蛋白染色阳性，抗角蛋白染色阴性。牙髓干细胞Stro-1检测阳性，牙髓细胞中干细胞阳性率约为10％。矿化诱导后细胞stro-1阴性、ALP阳性表达。结论采用免疫磁珠分选系统分离出人牙髓干细胞，初步验证干细胞分化潜能，为其后续生物学特性研究提供实验基础。

美开发出可直击肿瘤细胞的“纳米小虫”

美国加州大学圣地亚哥分校和圣巴巴拉分校以及麻省理工大学的科学家们联合开发出一种可在血管中自由游动的纳米虫，它能像导弹一样寻找并直击肿瘤细胞而不会短时问就被身体免疫系统驱逐出血液。这一成果发表在近期出版的《先进材料》杂志上。科学家们将球形纳米级氧化铁颗粒连接在一起，形成一个长30nm、“蠕虫”形状的“纳米虫”，它比真正的蠕虫小300万倍。利用纳米虫，医生不仅可以寻找到已经成形的肿瘤甚至可以定位正在形成的肿瘤。由于没有成形的肿瘤很微小，传统的方法很难检测出来。而纳米虫中的氧化铁成分有超顺磁性，它能在核磁共振成像仪中发亮，多个氧化铁分子联合在一起，就能够提供更强的磁性使信号更明亮，从而帮助医生更精确地诊断肿瘤。

现有溶酶体分离纯化技术的对比、分析和应用

溶酶体作为真核细胞中重要的细胞器,不仅是降解内外源物质的场所,也是细胞能量感知和调节的中心,能够协调细胞物质的转运、代谢和分泌。溶酶体稳态失衡会导致许多疾病,如溶酶体贮积症、肿瘤、免疫缺陷和神经退行性疾病。获得完整、高纯度的溶酶体是研究其微观结构、稳态调控和相关分子功能的重要前提。目前常用的溶酶体分离纯化技术包括离心分离纯化、荧光辅助细胞器分选、亲和免疫分离纯化、磁性纳米颗粒分离纯化和Lyso-IP等。该文综述现有溶酶体分离纯化技术的原理、特点和应用,并对它们进行对比分析。