磁微粒分离酶联免疫法在日本血吸虫抗体检测中的应用

目的探讨磁微粒分离酶联免疫法(MPAIA)用于检测日本血吸虫病血清抗体的效果。方法用MPAIA测定日本血吸虫病血清中特异性抗体。结果用MPAIA检测384例非血吸虫病流行区阴性血清,均为阴性;检测61例急性血吸虫病人血清、788例慢性血吸虫病人血清、32例晚期血吸虫病人血清其阳性率分别为100%、94.2%、90.6%;检测14例并殖吸虫病人、13例囊虫病人、9例旋毛虫病人血清,均未发现交叉反应。结论MPAIA检测日本血吸虫血清抗体有较高的灵敏度和特异度,可用于日本血吸虫病的临床诊断和现场疫情监测,该方法具有广阔应用前景。

人绒毛膜促性腺激素游离β亚单位磁分离酶联免疫方法的建立

目的建立一种新的测定人绒毛膜促性腺激素游离β亚单位(hCGβ)磁分离酶联免疫分析法(MEIA)。方法用识别不同表位的两株单克隆抗体(mAb),一株mAb用FITC标记,另一株用碱性磷酸酶(AP)标记;以偶联羊抗FITC抗体的磁珠作为固相,以酚酞单磷酸酯溶液为底物,建立测定hCGβ磁分离酶免疫测定法。结果本MEIA法的灵敏度为0.1IU/L,批内CV小于8.5%,批间CV小于14%,平均稀释回收率为92.5%;与促黄体生成激素(leuteinizinghormone,LH)、促甲状腺激素(thyroidstimulatinghormone,TSH)和促卵泡成熟激素(folliclestimulatinghormone,FSH)均无交叉反应,与完整的hCG(1000IU/L)的交叉反应为1.2%,有效期不低于14个月。结论本方法的性能优于现有的放射免疫(RIA)和ELISA试剂盒,接近进口同类试剂的水平,有助于为市场提供一种高质量而价廉的hCGβ测定试剂盒。

磁分离酶联免疫法检测AFP

目的建立检测甲胎蛋白(AFP)的磁分离酶联免疫法(Magnetic affinity immunoassay,MAIA)。方法采用双抗体夹心法,用异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AP)分别标记识别不同表位的两种抗AFP单克隆抗体(mAb)4A3和5H7,以偶联羊抗FITC mAb包被的免疫磁珠作为固相载体,单磷酸酚酞(phenolphthalein monophosphate,PMP)做显色底物,建立检测AFP的MAIA法。结果成功实现了用MAIA法对AFP的定量检测,其检测灵敏度0.2 IU/ml,线性范围0.2-510 IU/ml,批内CV5.5%-9.3%,批间CV1.6%-9.7%。添加回收率101.4%-104.9%,稀释回收率78.3%-123%。与雅培AxSYM及i2 000的检测结果对比,相关系数分别为0.984和0.985。结论MAIA法的性能优于现有的ELISA和RIA试剂盒,接近进口同类试剂的水平,有助于为市场提供一种高质量而价廉的AFP测定试剂盒。

磁分离酶联免疫法检测IL-4方法的建立

建立磁分离酶联免疫法定量检测人白细胞介素 4 (IL - 4 )的方法。用异硫氰酸荧光素 (FITC)和碱性磷酸酶(AP)分别标记识别不同表位的两种抗IL - 4单克隆抗体 (mAb) ,用抗FITC多抗或mAb包被免疫磁珠。结果显示 :检测标准品浓度在 0 - 3ng/mL范围内线性关系良好 ,敏感性达 10pg/mL ,平均回收率为 10 1.7% ,批内批间CV均为 3.6 % ,与ELISA比较相关系数为 0 .912 4。此法所需样本量少 ,方法稳定 ,敏感性高和特异性强 ,又无放射性污染 ,在临床检验和基础研究中有较大应用价值。

磁分离酶联免疫法测定多囊卵巢综合征患者血清性激素的结果分析

目的 :研究磁分离酶联免疫测定 ( MAIA)技术在临床诊断多囊卵巢综合征 ( PCOS)中的应用价值 ,建立我科生殖内分泌的临床正常参考值范围。方法 :采用 MAIA技术检测 72例 PCOS患者及 10 0例对照的血清性激素水平 ,并对其结果进行分析。结果 :早卵泡期性激素 6项的 95 %正常参考值范围 :促卵泡生成素 ( FSH) :3 .3 9～ 11.3 5 IU/L ,促黄体生成素 ( LH) :1.62 IU/L～ 5 .18IU/L 泌乳素 ( PRL) :3 .62 μg/L～ 2 3 .72 μg/L,雌二醇 ( E2 ) :10 .61ng/L～ 3 4.5 3 ng/L ,孕激素 ( P) :0 .3μg/L～ 2 .82μg/L ,睾酮 ( T) :0 .0 2μg/L～ 0 .5 2μg/L ,PCOS患者与对照组比较 ,血清 LH、T水平明显增高。结论 :用 MAIA法检测血清性激素水平 ,对 PCOS的诊断有较高的可靠性。

磁分离酶联免疫测定男性生殖激素方法性能评价

目的 :对磁分离酶联免疫测定 (MAIA)法测定男性生殖激素的方法学性能作临床和实验室评价。方法 :将本法与放射免疫测定 (RIA)法进行对比研究。结果 :MAIA法测定促卵泡生成激素 (FSH)、促黄体生成素 (LH)、睾酮 (T)和催乳素 (PRL)的线性分别为 0～ 15 0IU L、0～ 2 0 0IU L、0 .5～ 5 5ng L、0～ 2 5 0ng L ;最小检测量分别为 0 .3mIU ml、0 .2 5mIU ml、4 μIU ml、4 μIU ml;批内CV <4 % ,批间CV <8% ,平均回收率偏差 <5 % ,互感率 <3% ;与RIA法比较 ,两法相关系数分别为 0 .982 6、0 .85 5 0、0 .85 12、0 .9831。临床质控观察 6 0d ,质控稳定 ;成年健康男性 (n =95 )血清FSH、LH、T、PRL的参考范围分别为 :0 .2 5～ 10 .18IU L、0 .33～ 8.95IU L、0 .5 4～ 11.11ng L和 8.77～ 33.4 3ng L。结论 :用MAIA法测定男性生殖激素 ,方法灵敏 ,结果可靠 ,符合临床要求。

磁分离酶联免疫法检测SCC-Ag的方法学研究

目的 ：建立检测鳞状上皮细胞癌抗原（squamous cell carcinoma antigen,SCC-Ag）的磁分离酶联免疫法（magnetic affinity immunoassay,MAIA）。方法：采用双抗体夹心法,用异硫氰酸荧光素（fluorescein isothiocyanate,FITC）和碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,AP）分别标记识别不同表位的两种抗SCC-Ag单克隆抗体（mAb）T17和H390,以耦联羊抗FITCmAb包被的免疫磁珠作为固相载体,APS-5作为显色底物,建立检测SCC-Ag的磁分离酶联免疫法。结果：成功实现了用磁分离酶联免疫法对SCC-Ag的定量检测,其检测灵敏度为0.22μg/mL,线性范围0-50μg/mL,批内CV 7%-8%,批间CV 6%-9%。添加回收率为97%。与雅培AxSYM微粒子化学发光检测结果对比,相关系数为0.973。结论：磁分离酶联免疫法的检测结果接近进口同类试剂的检测结果,为开发一种高质量的SSC-Ag测定试剂盒提供实验数据。

磁微粒化学发光酶免疫分析法快速检测血栓4项性能评价

目的探讨磁微粒化学发光酶免疫分析法检测血栓调节蛋白(TM)、凝血酶-抗凝血酶复合物(TAT)、纤溶酶-α2纤溶酶抑制剂复合物(PIC)和组织型纤溶酶原激活物-纤溶酶原激活物抑制剂-1复合物(t-PAIC)的临床价值。方法采用磁微粒化学发光酶免疫分析法分别检测TM、TAT、t-PAIC和PIC,分析其精密度、携带污染率、正确度、线性检测范围、临床可报告范围、生物参考区间,并按美国临床实验室标准化协会(CLSI)EP 系列文件的要求,评价其检测结果。结果用磁微粒化学发光酶免疫分析法检测血栓4项时,批内、批间精密度[变异系数(CV)]均<10%,携带污染率均<1.0%,线性检测中a值均在1±0.05 范围内,决定系数r^2均≥0.950 0,临床可报告范围、正确度和生物参考区间均符合要求。结论用磁微粒化学发光酶免疫分析法检测血栓4项有较好的临床价值。

磁分离酶联免疫分析与ELISA法在梅毒抗体筛检中的应用

目的比较磁分离酶联免疫分析法(MAIA)与ELISA法在无偿献血者梅毒抗体筛检中的应用价值。方法以卫生部临床检验中心梅毒抗体临床科研血清盘标本40份及随机抽取西安市无偿献血者梅毒抗体阴性血清100份为评价标本。分别采用MAIA及ELISA法对评价标本作盲法筛检,以临检中心梅毒抗体已知阳性和阴性作为金标准。分析真实性与可靠性,并评价2种试剂的Cut-off值的合理性。结果MAIA及ELISA法的灵敏度分别为92.3%,100.0%,特异度分别为99.1%,100.0%,约登指数分别为0.91和1.00,重复试验符合率均为100.0%。结论提高MAIA法的灵敏度与特异度,将具有更大的临床应用价值。

脱氧雪腐镰刀菌烯醇的高灵敏化学发光磁酶免疫法检测

目的:建立一种快速简便、灵敏度高的新型化学发光磁酶免疫法(MECLIA)检测脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)。方法:制备Fe_3O_4@SiO_2@Au金磁复合微粒及DON与卵清蛋白(OVA)的复合物(OVA-DON);以Fe_3O_4@SiO_2@Au为固相载体,优化条件,使其表面负载OVA-DON形成DON金磁免疫复合微粒;以鲁米诺-过氧化氢-辣根过氧化物酶-苯酚类化合物作为增强化学发光体系,建立MECLIA对小麦中DON进行检测,并对所建立的方法进行方法学评价。结果:该方法标准曲线方程为Y=-521 951X+2 883 979(X为DON质量浓度的对数,Y为化学发光值,R2=0.998 6),线性范围为0.10~20.00μg/L,检测限为31 ng/L;批内RSD为2.2%~3.5%,批间RSD为4.9%~9.6%,标准样品回收率为95.0%~108.0%,小麦样品回收率为92.0%~106.0%。结论:该研究建立的MECLIA灵敏度高、精密度好、操作简单,可用于大批量小麦样品中DON的快速检测。

磁粒子捕获免疫发光法在检测弓形虫IgM的应用

目的:探讨磁粒子捕获免疫发光法(ICA)在检测血清弓形虫IgM(Toxo-IgM)的应用。方法:分别进行线性、精密度、对比试验比较。结果:二种方法曲线相似但线性范围不同,ICA法最宽。精密度试验中ICA法检测批内为1.3%,批间为3.5%;ELISA法批内为15.7%,批间为23.3%。结论:ICA法测定Toxo-IgM优于ELISA法。

口蹄疫病毒O型全自动磁微粒CLIA抗体定量检测方法的建立

【背景】口蹄疫(foot and mouth disease,FMD)是由口蹄疫病毒引起的一种急性、热性、烈性传染病,疫苗接种是预防临床口蹄疫的有效措施。免疫抗体水平监测则是评估疫苗免疫效果、制定免疫程序的重要依据,是免疫工作和疫情防控必不可少的关键环节,因此建立高效、快速、全自动的抗体检测方法具有重要意义。【目的】基于磁微粒(micromagnetic particles,MPs)化学发光免疫分析技术(CLIA),建立一种新型、全自动、可定量的口蹄疫病毒O型抗体检测方法,为口蹄疫免疫监测和疫情防控提供技术支撑。【方法】使用纳米材料磁微粒为固相载体和分离载体包被捕获抗体,用碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)标记检测抗体,经过条件优化建立了一种新型磁微粒CLIA检测方法(magnetic particle chemiluminescence immunoassay,MP-CLIA)。本方法首先加入磁微粒-兔抗偶联物(magnetic particle-polyclonal antibodies,MPs-p Abs)、待测样本、口蹄疫病毒O型抗原,37℃孵育;再加入适量酶标抗体(ALP-p Abs),37℃孵育;最后加入化学发光底物AMPPD,检测相对发光强度(relative light unit,RLU)。研究通过检测标准品拟合标准曲线,并应用受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic,ROC)确定检测方法的判定标准;利用质控样本进行方法学评价,同时检测田间样本,并和液相阻断ELISA(LPB-ELISA)比对,验证临床检测效果。【结果】优化后最佳反应条件为磁微粒浓度0.25 mg·m L^(-1)、口蹄疫病毒O型抗原1﹕1000稀释、酶标抗体1﹕2000稀释、加样量20μL。整个检测过程均在全自动化学发光免疫分析仪中完成,反应时间20 min,在抗体含量0—1280 U(效价0—1﹕2048)范围内标准曲线R2>0.99,可进行定量检测。该方法敏感性为94.66%;特异性为97.10%,检测口蹄疫A型、Asia I型血清型特异性为97.14%,与塞内卡病毒(SVV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、牛流行热病毒(BEFV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、羊痘病毒(QRFV)、小反刍兽疫病毒(PPRV)抗体阳性血清无交叉反应;重复检测变异系数CV值<10%;田间样本检测结果与LPB-ELISA符合率为94.69%,定量结果相关系数R2为0.8473,P<0.0001,相关性显著。【结论】建立的MP-CLIA方法耗时短、操作简便,配套国产全自动化学发光仪,可进行全自动化检测,是一种新型、高效的口蹄疫病毒O型抗体定量检测方法,本方法对应的试剂盒已经完成中试生产和临床检测试验,在全国不同区域试用效果较好,具有较高的临床应用价值。

利用人免疫球蛋白构建免疫磁珠富集金葡菌条件优化

利用人免疫球蛋白制备富集金黄色葡萄球菌的免疫磁珠及优化条件;利用化学键法制备免疫磁珠,并用矩阵法和单因素法优化免疫磁珠制备条件,通过磁珠对抗体饱和吸附量及加入量相关性评价磁珠与抗体固定化程度,根据免疫磁珠的特异性、灵敏性及饱和捕捉量来考察IMBS.aureus对金葡菌的富集能力;结果显示采用MB-M型磁珠,加入质量浓度均为5 mg/L的活化剂EDC和NHS,于24℃偶联人IgG,24 h得到IMBS.aureus,其饱和吸附量为393.27μg,磁珠与人IgG加入量具有相关性,IMBS.aureus特异性好、灵敏度高(26 CFU/10 mL),0.2 mL IMBS.aureus饱和捕捉菌液浓度为106CFU/mL;通过优化,磁珠装载人IgG分子的能力提高了5倍,检测限提高了4倍,富集金葡菌的效率大大增强,成本降低,为人免疫球蛋白磁珠富集和分离金黄色葡萄球菌实际应用创造了条件。

磁分离免疫法测血HCG出现后带现象1例

患者女 32岁.因自然流产后18月,停经4月,腹胀腹痛2周,于2000年12月19日来我院就诊.B超示子宫15.2cm×14.4cm×7.6cm,内膜厚0.3cm,宫壁探及多处大小不等的实性稍强回声团块,直径3.0cm～3.5cm,边界清楚,子宫右后方查见5.4cm×4.4cm×3.1cm的囊性占位.壁稍厚,欠光滑,内见多个分隔,子宫直肠陷凹查见2.0cm液性暗区,左附件未见占位,超声诊断:子宫增大,宫内实性占位,结合病史考虑绒毛膜癌(以下简称绒癌);右附件囊性占位,考虑黄素囊肿;尿HCG(-),磁分离免疫法查血HCG为296.5mIU/ml,以绒癌收入院.

磁微粒化学发光免疫法与放射免疫法测定血浆肾素活性的对比分析

目的比较分析两种方法测定血浆肾素活性(PRA)的准确性、精密度及线性范围的差异。方法采用磁微粒化学发光免疫法(CLIA)与放射免疫法(RIA)测定血管紧张素Ι(AΙ,肾素活性)的质控血清及61例住院患者AΙ水平,计算两种方法检测的批内、批间变异系数(CV),评价其精确性;将高浓度混合样本A加入低浓度混合样本B配置成样本C,分别测量样本A、B和C中AΙ水平,计算回收率,评价准确性;测定两法线性范围,并对样本测定结果的相关性作回归分析。结果 CLIA法:批内CV大于RIA法(P<0.01),批间CV小于RIA法(P<0.01),回收率优于RIA法。两种方法检测的相关性良好(r=0.996,P<0.01)。RIA法线性范围22～700 pg/mL,小于CLIA法的线性范围25～850 pg/mL。结论 CLIA法测定PRA除精密度外,其他各项指标多优于RIA法,且自动化程度高、适合批量操作,是未来应用的趋势。RIA法技术成熟、价格低廉,有其存在的意义。

化学发光磁酶免疫分析法检测牛奶中鼠伤寒沙门氏菌

建立化学发光磁酶免疫分析法检测牛奶中鼠伤寒沙门氏菌,并优化化学发光条件和免疫反应条件。结果表明:最佳发光条件为鲁米诺、过氧化氢、对碘苯酚的浓度分别为5.0×10^(-3)、1.76×10^(-2)、5.0×10^(-3)mol/L,辣根过氧化物酶的质量浓度为5.0×10^(-5)mg/mL;最佳免疫条件为免疫磁珠用量50μL、一抗体积稀释比1∶8000;方法的检出限为3.0×10^(3)CFU/mL,回收率为87.94%~113.04%。建立的方法可用于牛奶中鼠伤寒沙门氏菌的检测。

应用磁分离酶联免疫法评估甲状腺功能状态

由于放射性免疫法(RIA)[1]检测甲状腺激素存在放射性污染及标记物125I半衰期短等不利因素,而采用非放射性免疫分析法,如磁分离酶联免疫法(MAIA)检测日益受到临床及检验科室的重视和倡导[2].为观察MAIA法测定甲状腺功能5项的临床实用价值,我们对200例甲状腺疾病患者进行测定,结果报告如下.

免疫磁分离-两重荧光定量PCR法快速检测鲜猪肉中金葡菌和志贺氏菌

本文即尝试以实验方式,利用免疫磁分离-两重荧光定量PCR法对鲜猪肉样本中的金葡萄球菌以及志贺氏菌进行检测。结果显示:免疫磁分离-两重荧光定量PCR法能够在6.0 h时间内完成对鲜猪肉样本中金葡萄球菌以及志贺氏菌的检测,具有检测过程快速性、检测结果灵敏度高、特异性高以及准确可靠等诸多优势,可作为食品样本中常见食源性致病菌的常规检测方法之一,加以推广应用[1]。