应用单克隆抗体-免疫磁珠分离系统分离纯化再生障碍性贫血骨髓CD_(34)^+细胞

目的 分离、纯化再生障碍性贫血 (简称AA)患者骨髓CD3 4+ 细胞 ,探讨其发病机制。方法 对4 2例AA患者 ,以常规方法进行骨髓液采集和有核细胞分离 ,用单克隆抗体 免疫磁珠分离系统 (MACS)分离、纯化骨髓CD3 4+ 细胞 ,用碱性磷酸酶 抗碱性磷酸酶 (APAAP)法作CD3 4+ 细胞的纯度检测。结果 骨髓CD3 4+ 细胞纯度达 95 %～ 99% ,AA患者骨髓CD3 4+ 细胞多呈单个、散在分布 ,着色较淡 ;而对照组骨髓CD3 4+ 细胞多呈均匀或丛簇状分布 ,着色较深。结论 应用MACS分离AA骨髓CD3 4+ 细胞 ,特异性强、纯度高 ,是研究AA骨髓CD3 4+ 细胞功能、形态的最直接、客观。

免疫磁珠法分离和纯化人胚胎神经干细胞

目的:建立有效的人类神经干细胞分离纯化系统和方法。方法:无菌取孕24周流产胎儿的室下区脑组织,制备细胞悬液,用磁性微珠标记的CD133单克隆抗体与细胞孵育,通过磁分选器分离出CD133(+)和CD133(-)细胞,通过体外培养并诱导分化,观察CD133阳性细胞和阴性细胞的增殖情况及分化能力。结果:经免疫磁珠分选的室下区脑组织中,CD133(+)细胞占胚胎脑组织细胞的2％左右,该细胞体外扩增能力强,细胞呈球形生长,并易聚集成团,培养5 d、10 d、15 d、20 d进行活细胞计数,细胞增长率分别为1.79％、4.82％、7.21％、14.66％,诱导分化后的细胞经染色鉴定可分化为神经元、神经胶质等多种神经细胞;阴性细胞扩增能力弱,活细胞计数以死细胞数量居多,大约70％,另外一些细胞贴壁分化。结论:免疫磁珠法简便、有效,经免疫磁珠分离的神经干细胞在体外能进一步培养扩增并分化。

免疫磁珠法在分离纯化外周血CD4^+和CD8^+ T淋巴细胞亚群中的应用

目的:探讨免疫磁珠法(MiniMACS)在分离纯化外周血CD4+和CD8+T淋巴细胞亚群中的应用。方法:应用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞(Peripheral blood mononucleate cells,PBMC),采用MiniMACS分别分离和纯化39例标本外周血PBMC中的CD4+T淋巴细胞和CD8+T淋巴细胞,并经流式细胞仪分析细胞纯度和台盼蓝染色的方法对细胞活力进行评估。结果:MiniMACS分离外周血CD4+T淋巴细胞前、后细胞纯度分别为(37.38±5.74)%、(97.75±1.03)%(P<0.001),CD8+T淋巴细胞分离纯化前后细胞纯度分别为(20.11±6.83)%、(96.85±1.86)%(P<0.001);外周血分离前PBMC细胞活力为(97.66±2.73)%,纯化为CD4+T淋巴细胞和CD8+T淋巴细胞后细胞活力分别为(97.44±3.08)%、(98.05±2.92)%(P>0.05)。结论:MiniMACS可以高度富集CD4+T淋巴细胞和CD8+T淋巴细胞且不改变细胞的活力。

应用免疫磁珠分离法纯化弓形虫速殖子的研究

目的用免疫磁珠分离法分选弓形虫速殖子,以去除宿主细胞成分,并尽可能对虫体的生物学特性无不良影响,为弓形虫的基础与临床研究提供技术基础。方法采用弓形虫Wh3株(China 1基因型)速殖子感染小鼠,提取腹腔液,常规方法制备速殖子可溶性抗原,免疫家兔,获得兔抗弓形虫多克隆IgG抗体。用抗体包被的免疫磁珠对小鼠腹腔液内弓形虫速殖子进行纯化,比较其纯度、回收率、虫体活力、毒力与感染性。结果用免疫磁珠分离技术纯化弓形虫速殖子后,其纯度提高到98.2%,细胞清除率为96%,虫体回收率为73.5%;用内盐法(MTS)细胞增殖与毒性检测试剂盒检测分离后的速殖子活性为95.6%。定量分组感染小鼠后死亡时间无显著性差异。结论免疫磁珠分离的速殖子纯度、细胞清除率和虫体回收率较高,能有效去除宿主细胞,且对速殖子的活性和毒力无影响。该法操作简便快速,无需昂贵的仪器设备,具有较大的实用价值。

免疫磁珠分离及流式细胞仪分选纯化外周血CD34^+/CD90^+干细胞

目的 建立人外周血CD34+ 细胞及其亚群的纯化分离方法。方法 用干细胞采集仪收集了 3例病人的外周血干细胞 ,应用免疫磁珠分离柱快速分离其中的CD34+ 细胞 ,随后采用分选型EPICSElite流式细胞仪进一步分选出CD34+ /CD90 + 双阳性早期造血干细胞。结果 免疫磁珠分离纯化后CD34+ 干细胞的纯度可达 83%～ 95 % ,回收率 5 4 %～ 71% ,活细胞率 >95 %。流式细胞仪分选后的CD34+ /CD90 + 细胞纯度可达 90 %以上 ,回收率在 4 0 %～ 5 0 % ,生存率 >95 %。起始标本中CD34+ 细胞含量越高 ,纯化所得到的干细胞纯度和回收率越高。两种纯化后的干细胞在形态学上有明显的不同。结论 联合应用免疫磁珠分离和流式细胞仪分选 ,可以较高的回收率快速纯化高纯度的CD34+

免疫磁珠分离技术在环境病原微生物检测中的应用

介绍免疫磁珠分离技术的原理和操作步骤,分析其主要影响因素。介绍该技术在环境样品病原菌、原虫及病毒检测中的应用及研究进展。环境样品成分复杂,需经适当分离纯化处理再进行病原微生物检测,从而保证检测结果的可信性。免疫磁珠分离技术兼具免疫反应的特异性及磁性分离的快速性,能够有效分离纯化环境水样中的病原微生物,广泛应用于病原微生物的检测。

改良贴壁培养法简单的骨髓基质干细胞分离纯化法

骨髓基质干细胞（marrow stromal cells，MSCs）来源广泛，取材容易，体外培养可迅速增殖，移植物抗宿主反应轻，体外诱导可分化为神经胶质细胞和神经元样细胞等。近年来，MSCs移植已被用于神经系统变性疾病及脑缺血的治疗研究中。目前MSCs的常用分离方法主要有4种，即贴壁筛选法、密度梯度离心法、流式细胞仪分离法、免疫磁珠分离法，各有优缺点。本文介绍一种比较理想、简单的分离纯化方法改良贴壁培养法。

大鼠肺微血管内皮细胞的体外分离培养与纯化

旨在建立一种简单易行、获得细胞纯度较高的体外分离、培养大鼠肺微血管内皮细胞的方法。取5~7日龄SD大鼠分离外周肺组织,组织植块法获得原代大鼠肺微血管内皮细胞,37℃、5%CO_2培养箱中传代培养,采用免疫磁珠法对其进行分离纯化,并对分离纯化后的细胞进行免疫荧光及流式细胞鉴定,通过MTT比色分析法准确、安全、可靠地检测纯化后传代肺微血管内皮细胞的增殖情况。结果显示：倒置显微镜下观察单个细胞呈短梭形或多角形,汇合后呈铺路石样,单层贴壁生长,细胞分离纯化后经免疫荧光检测CD31呈阳性,流式细胞仪检测淋巴管内皮细胞表面特有标记VEGFR-3呈阴性（P=0.1,且P〈0.5）,且复苏后经MTT测得传代细胞的增殖情况良好。成功建立了一种分离高纯度大鼠肺微血管内皮细胞的体外培养方法。

人胎儿脑室区神经前体细胞的分离纯化、培养及鉴定

目的建立有效的人胎儿神经前体细胞分离及纯化系统。方法取人自然流产胎儿脑室区(VZ)并制备单细胞悬液,采用免疫磁珠法分离CD133阳性及CD133阴性细胞群,体外培养并比较两者增殖能力。用免疫荧光化学方法检测CD133阳性细胞群中神经上皮干细胞蛋白(nestin)的表达及诱导分化后的多向分化潜能。结果纯化后CD133阳性细胞群体外扩增能力强,在无血清培养体系中能形成神经球并可连续传代,免疫荧光化学法检测表明其nestin抗原阳性,诱导分化后可分化为神经元、星形胶质细胞及少突胶质细胞。而CD133阴性细胞在培养体系中多呈单个分散状态,神经球形成数目与CD133阳性细胞有显著性差异(P<0.05)。结论免疫磁珠法可有效分离人胎儿脑内CD133阳性细胞,且该细胞在体外培养体系中具有神经前体细胞的特征。

黄粉虫β-1，3-葡聚糖识别蛋白的分离纯化及部分生物学功能

采用中性盐沉淀、凝胶层析等常规方法纯化黄粉虫Tenebrio molitor血淋巴中的β-1,3-葡聚糖识别蛋白,并对其在酚氧化酶原激活系统中的作用进行了初步的研究。结果表明:黄粉虫血淋巴的β-1,3-葡聚糖识别蛋白的分子量约为70kDa,主要分布于血浆中。纯化的β-1,3-葡聚糖识别蛋白只能特异性地识别β-1,3-葡聚糖而不能识别肽聚糖。在β-1,3-葡聚糖所诱导的酚氧化酶原的激活过程中,随着酚氧化酶原激活程度的提高,内源性β-1,3-葡聚糖识别蛋白的含量逐渐减少。抗β-1,3-葡聚糖识别蛋白多克隆抗体对黄粉虫血淋巴中由β-1,3-葡聚糖所诱导的酚氧化酶活性起抑制作用,且该抑制作用呈现一种剂量依赖性的趋势。上述结果有助于深入了解β-1,3-葡聚糖对黄粉虫血淋巴酚氧化酶原激活系统的激活作用。

脂肪干细胞分离纯化方法研究进展

脂肪干细胞作为种子细胞广泛应用于组织工程中,而获得足够量的、活性高的、高纯度的脂肪干细胞是其在组织工程中应用的前提。本文综述近几年来脂肪干细胞分离纯化方法的研究进展,比较各方法的优缺点,为分离纯化出理想的脂肪干细胞提供理论依据。

不同磁珠对过敏原蛋白纯化效果的比较研究

本文以南美白对虾的主要过敏原为纯化对象,选用2种商业磁珠构建免疫磁珠,利用免疫磁分离技术纯化过敏原,采用SDS-PAGE、Western blot、蛋白定量对纯化产物进行鉴定,探讨了不同免疫磁珠对过敏原的纯化效果。结果表明,磁珠A的抗体偶联量明显高于磁珠B。此外,免疫磁珠A对抗原的结合率和洗脱率分别为免疫磁珠B的1.5、1.8倍;免疫磁珠A对过敏原捕获率为47.9%,而免疫磁珠B仅为17.6%。对比两种磁珠的理化及其结构特点,发现粒径大、分散性差的磁珠在偶联过程会发生聚集,降低抗体偶联效率,从而影响纯化效果。结果显示,分散性好、抗体偶联率高的磁珠更适宜蛋白质的分离纯化。本研究为以后过敏原的纯化提供了一定的理论基础与实验依据。

亚细胞器分离纯化技术的发展

本文就亚细胞器分离纯化的传统方式———密度梯度离心 ,以及新方法———亲和纯化 ,特别是免疫磁珠纯化技术进行概述和评价 ,并进一步表明两种提取方法相结合 ,更有利于同时满足产量、纯度两方面的要求。

高原链带藻抗氧化蛋白分离纯化与结构鉴定

众所周知,人类一切疾病的根源都是因为自由基,自由基会影响细胞的活性,严重的还会杀灭细胞,因此,要想保证人体健康,就必须要清除自由基,而抗氧化物则可以有效地解决这一问题。抗氧化物通过清除体内的自由基,同时减少组织氧化,以此来达到保护机体的最终目的。天然的抗氧化物相较于合成物而言,有着更好的应用效果,其副作用小,同时能够降低免疫系统活性的干扰,因而有着更好的促氧化效果。

双阴性选择法纯化培养人骨髓多能成体祖细胞

目的建立体外分选纯化及培养人骨髓来源多能成体祖细胞(MAPCs)的方法.方法取健康成人志愿者适量骨髓采用梯度密度离心法分离获取单个核细胞,贴壁培养后,将获取的骨髓贴壁细胞通过CD45、血糖蛋白A(GlyA)免疫微磁珠(miniMACS)负分选,流式细胞术鉴定分选后细胞纯度;对传代到不同阶段的细胞进行CD45、GlyA流式细胞分析,初步了解MAPCs在培养、增殖过程中的免疫学稳定性.结果通过miniMACS分选,平均每1×106/ml骨髓贴壁细胞可分选出约(5～10)×104/ml的MAPCs,分选前后细胞活力分别为(96.7±1.7)%和(96.0±2.4)%,无明显差异;自制的培养基培养分选后的MAPCs生长良好,最长传代到第16代;流式细胞仪分析获取的CD45、G1yA-细胞纯度大于98%;流式细胞仪分析传代第4、8、12代MAPCs,CD45-、G1yA-细胞纯度大于98%.结论CD45、GlyA miniMACS负分选可从骨髓中分离高纯度的MAPCs;MAPCs在本室自制的人MAPCs培养基中体外有较强的增殖能力,且能保持较长时间的稳定状态.

肺泡Ⅱ型上皮细胞分离培养研究进展

综合介绍肺泡Ⅱ型细胞分离纯化和培养的不同方法及其优缺点、相关实验条件的和注意事项。

基于MEMS技术的外泌体磁分离微流控芯片

胃癌细胞源外泌体作为生物标志物在胃癌早期检测中有着极大的应用潜力。但外泌体分离难度大,这一问题极大地限制了外泌体的临床应用。为应对这一挑战,设计并制备了一款外泌体磁分离微流控芯片。通过有限元仿真设计合理高效的微流控芯片结构,仿真结果证明设计的微过滤器能改善微流控芯片内流体分布,从而有利于外泌体分离。通过微电子机械系统(MEMS)工艺制备微流控芯片,利用扫描电子显微镜(SEM)表征芯片关键尺寸,证明制备的微流控芯片尺寸精度可达1.5μm。通过免疫磁珠(IMNP)捕获外泌体,捕获效率可达60.2%,在微流控芯片中完成外泌体的磁分离,实验结果证明微流控芯片外`泌体分离纯度为76.8%。

旋转式免疫磁珠细胞分离仪的研制

提出了一种新型免疫磁珠细胞分离方法,通过让装有细胞与磁珠悬浊液的试管在环形磁铁中旋转的方式,使磁珠在离心力的作用下向管壁的方向运动,由于越靠近环形磁铁管壁的地方磁场强度越高,磁珠就越容易被吸附.通过对比,旋转分离方法具有更高的分离效率.与此同时,基于该分离方法研制了一款细胞分离仪,将取枪头、脱枪头、移液、旋转试管等操作自动化,更方便临床使用.

不同来源的人CD34^+造血细胞形态学与细胞化学研究

目的 :探讨不同来源的人CD34 + 造血细胞形态学与细胞化学。方法 :采用CD34MultisortKit免疫磁珠分离系统 ,分离纯化出CD34 + 造血细胞 ,流式细胞仪检测纯度 ,涂片进行瑞氏 -姬姆萨染色。观察细胞形态学 :细胞化学染色观察过氧化物酶 (POX)、糖原 (PAS)、苏丹黑 (SB)及萘酚AS -D氯乙酸酯酶 (CE)。结果 :CD34 + 造血细胞的纯度≥ 98.8%,形态大小略大于正常淋巴细胞 ,PAS、CE、SB及POX均呈阴性。结论 :不同来源的人CD34 + 造血细胞形态学与细胞化学相似。