高锰酸钾-草酸脱黑色素在免疫组化操作中的应用及体会

通过比较在不同条件下、不同操作时间点高锰酸钾-草酸脱黑色素在免疫组化操作中的应用,探索最佳脱色条件(温度、时间)和最佳脱得操作色时间点。方法:选取富含黑色素的组织切片,分别在抗原修复前、抗原修复后、3%H2O220min抗原阻断后、DAB显色后,在室温和37℃下0.5%高锰酸钾处理10min,用1%草酸洗1min×3次,PBS缓冲液冲,比较脱色及免疫组化的效果,选取效果最好的脱色条件及最佳脱色的操作时间点。结果:抗原修复前和抗原修复后,室温下0.5%高锰酸钾处理10min,用1%草酸洗1min×3次,免疫组化结果有20%色素残留,脱色不彻底,37℃下0.5%高锰酸钾处理10min,用1%草酸洗1min×3次脱色彻底,但二者免疫组化效果不好,存在脱片及组织结构破现象;抗原阻断后,室温下高锰酸钾处理10mim,1%草酸洗1min×3次,脱色彻底及免疫组化效果好,无背景染色及无脱片和组织结构破坏现象;37℃下0.5%高锰酸钾脱色10min,用1%草酸洗1min×3次脱色彻底,10-20%组织结构发生破坏及脱片;DAB显色后脱色,最后的免疫组化效果,无脱片及组织结构破坏,难掌握脱色效果,有5%-30%定位细胞受色素干扰。结论:3%H2O220min抗原阻断后,高锰酸钾-草酸在室温下,0.5%高锰酸钾处理10min,用1%草酸洗1min×3次,脱色及免疫组化效果较好,能完整保留组织的抗原性,无背景染色、脱片及组织结构破坏现象。