如何用免疫组化ABC法做好脑组织冰冻切片

ABC法即抗生物素-生物素-过氧化酶法。ABC法是Hsu等人于1981年在BRAB法和LAB法的基础上改良的。其特点是利用抗生物素分别连接生物素标记的第II抗体和生物素标记的酶。其第I抗体不为标记物所标记,生物素标记的第II抗体与ABC复合物相连接。

免疫组化ABC法和粘液组化AB/PAS法的套染技术

我们在前列腺癌的组化研究中,将免疫组化ABC法和常规粘液组化AB/PAS法结合起来,在同一张切片上进行套染和观察,比较特异性抗原——细胞角蛋白(cytokeratin)与中性粘液和酸性粘液的关系,取得了较为满意的结果,并说明套染切片的观察比分别在两张切片的染色观察更为准确和方便。一、材料和方法 1、组织材料取前列腺癌术后标本和正常人前列腺组织,Bouins液固定,常规脱水包埋,切成4μm厚的连续切片,多聚赖氨酸帖片。 2、抗体和主要试剂①多聚赖氨酸(Poly-L-Lysin Sigma Ccm.USA)

肿瘤细胞角蛋白纤维的ABC免疫组化观察

用国产抗人角蛋白单克隆抗体,通过ABC免疫组化染色,观察T56细胞和HeLa细胞间期及有丝分裂期Keratin的组织结构和动态变化;并进一步观察了秋水仙素和细胞松弛素B对该两种细胞Keratin组织结构的影响。结果表明:有丝分裂时Keratin的组织结构及空间分布均发生显著变化;秋水仙素和细胞松弛素B共同作用时可引起Keratin纤维急剧重排形成一“星点状”纤维网络。

免疫组织化学LSAB和ABC法敏感性比较

继免疫组化ABC法之后近年又出现了LSAB法(labeled streptavidin biotin method,链菌素-生物素标记法),作者用不同稀释度的第一抗体作LSAB及ABC染色,对这两种方法进行敏感性对比,结果表明:LSAB法比ABC法更为敏感。用LSAB法时,第一抗体稀释度可比ABC法高2～3倍以上,孵育时间比ABC法大大缩短,且背景清晰,是理想的具有广阔应用前景的新一代免疫酶标法。

转化生长因子-α在人胰腺癌表达的免疫组化研究

应用免疫组化 ABC法对 30例胰腺癌组织转化生长因子 - α(TGF- α)的表达进行研究 ,以探讨 TGF- α的异常表达与胰腺癌发生的关系。结果表明 TGF- α在胰腺癌组织和正常胰腺组织的阳性表达率有显著差异 (P<0 .0 5 ) ;TGF- α的表达与胰腺肿瘤的大小和转移行为无关 ,而在 期和 期胰腺癌中的阳性表达率显著高于 期和 期胰腺癌 (P<0 .0 5 ) ,TGF- α可能在胰腺癌发生中起着重要作用。

NSE—McAb免疫组化法对APUD肿瘤的诊断价值

本文用自制NSE—CAB,经免疫组化ABC法,检测69例不同组织类型的APUD肿瘤,62例非APUD肿瘤和20例正常组织。结果APUD肿瘤染色均为阳性,非APUD肿瘤有9例弱阳性,正常组织均为阴性,提示NSE—McAb免疫组化法对APUD肿瘤的诊断有重要的价值。

HCG阳性表达大肠癌的临床病理及免疫组化分析

目的:研究大肠癌细胞人绒毛膜促性腺激素(HCG)阳性表达,以追踪肿瘤的发生发展和预后。方法:采用免疫组化ABC法对100例大肠癌石蜡切片进行HCG表达检查。结果:大肠癌细胞HCG阳性组较阴性组瘤组织明显分化差,肿瘤侵及广泛,淋巴结转移率高,病人预后差。结论:大肠癌细胞HCG表达对判断肿瘤的恶性程度、治疗及预后都有重要意义。

鸡间脑及毗邻端脑区促黄体素释放激素样物质定位—ABC法研究

本文用免疫组化ＡＢＣ法（抗生物素蛋白－生物素—之氧化物酶复合物），冰冻连续切峙，对六只成年罗斯母鸡的间脑及毗邻端脑区促黄体素释放激素（ＬＨＲＨ）样物质作了定位研究。结果表明：ＬＨＲＨ核周体主要分布在隔区、皮质连合床核周缘和下丘脑视前区。另外，在下丘脑室旁核、下丘脑内侧核、交叉上核、丘脑室旁核、丘脑背侧核、终纹核以及前连合核，均有零散分布。核用体多呈梭形、多角形、也有卵圆、不规则形态，直径在１２．０～１４．４μｍ，胞质内有探褐色不规则的免疫反应阳性颗粒。ＬＨＲＨ阳性纤维呈深褐色念珠状，膨大部直径约１．４μｍ。一般纤维颗粒小而稀少，着色浅，在隔区交织成网，在隔外侧核有许多纤维与侧脑室腹内侧缘平行成束，在皮质连合床核周缘及第三脑室灰质带内形成背腹向的疏松纤维带，僵区及后连合处，也有较多的纤维。纤维终末支颗粒粗大、密集而深染，主要集中于正中隆起，多呈栅栏状分布。此外，可见终未支深入侧脑室、第三脑室及血管腔内。皮质连合床核及周缘密布ＬＨＲＨ核周体和纤维，为鸟类所特有。鸡脑僵区及后连合处有较多的阳性纤维，在前人也未见报道。

双侧肾上腺切除狗促肾上腺皮质激素释放因子(CRF)免疫组织化学研究

双侧肾上腺切除狗4只,存活四周。正常对照狗5只。经灌流、固定、取脑,震动切片机切片厚60μm。免疫组化ABC法染色。光镜观察。结果:双侧肾上腺切除狗与正常对照狗的下丘脑室旁核内测部均可见有聚集的CRF免疫反应阳性细胞及纤维、双测肾上腺切除者,细胞数目比对照者明显增多,为对照组的4.3倍(平均值分别为5061及1175个)。统计学处理后P<0.05,有显著性差别。

大鼠脑中催产素和加压素免疫反应性物质的分布

用卵白素生物素过氧化物酶复合物(ABC)法研究大鼠脑中催产素(OT)和加压素(VP)免疫反应性物质的分布。阳性细胞主要局限于下丘脑,而阳性纤维则广泛分布于下丘脑和脑干等部位。OT和VP的分布情况有差别。在视上核和室旁核大细胞后部,VP阳性大细胞明显比OT大细胞密集;同样,在向正中隆起方向行走的阳性纤维束中,VP纤维也占大多数。而在室旁核尾部的小细胞内侧部,中小型OT阳性细胞比VP细胞密集;并且,在脑干的孤束核、三叉神经脊束核、迷走背核、疑核、臂旁核和蓝斑核中,OT阳性纤维也占主要地位。 实验结果提示,下丘脑的OT和VP能神经元除参与垂体后叶内分泌外,还可能直接支配一些脑干内脏核。推测在一般正常生理状态下,垂体后叶的VP分泌可能比OT分泌占有更重要的地位;而OT则可能在充当神经递质或调制物,参与下丘脑对脑干内脏核的调节中有更重要的位置。

大鼠心冠状动脉系统神经肽Y年龄变化的免疫组织化学研究

运用免疫组化ABC法对不同月龄SD大鼠心脏冠状动脉及其分支含神经肽Y神经纤维的分布及其衰老变化作了详细观察。结果表明:左、右冠状动脉及其各分支具有丰富的神经肽Y能神经分布。在冠状动脉主干及其较大分支上,神经纤维较稠密,主要呈环状或网状分布.在血管周围形成较多束、丛、网。

西北农大发现CGRP与SP免疫反应神经纤维

西北农业大学沈霞芬等,应用免疫组化ABC法发现羊垂体前叶有降钙素基因相关肽(CGRP)免疫反应神经纤维存在。这些纤维呈串珠状分布于结节部及远侧部前2/3区域。纤维形态多样,细长者穿行于腺细胞之间;短小弯曲者围绕于腺细胞周围;反复分支折叠盘曲缠绕成团蔟状者将腺细胞置于堆成的网络中。神经纤维及串珠与腺细胞关系密切,提示有可能对腺细胞分泌起直接作用。在纤维分布区域可见散在的免疫反应细胞,形态不规则,大部分与神经纤维无接触关系。

大鼠骨髓基质干细胞向神经元样细胞的分化

目的 :体外定向诱导大鼠骨髓基质干细胞 (BMSCs)向神经元样细胞的分化。方法 :用DMEM培养液冲洗骨髓 ,收集骨髓细胞接种在培养瓶中体外扩增、纯化。用诱导剂诱导BMSCs分化为神经元样细胞。用免疫组化ABC法鉴定神经丝蛋白 (NF 2 0 0 )、微管相关蛋白 (MAP 2 )、神经元特异核蛋白 (NeuN)、巢蛋白 (Nestin)、胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)、GAD和ChAT的表达。结果 :BMSCs经诱导后 ,胞体增大 ,并伸出细长突起 ,与神经元形态相似。免疫组化显示大部分细胞NF 2 0 0 ,MAP 2 ,NeuN和Nestin表达阳性 ,(3± 0 .8) %的细胞GAD表达阳性 ,(5± 0 .3) %的细胞ChAT表达阳性 ,而GFAP表达阴性。结论 :BMSCs可被诱导分化为神经元样细胞 ,部分细胞可表达GAD与ChAT。

细胞凋亡在燃煤型砷中毒肝损伤中的作用

目的:通过观察肝细胞表面分子界导细胞凋亡的Fas、FasL及相关基因蛋白Bax、Bcl-2、Bcl-XL的变化来探索燃煤型砷中毒肝损伤的分子机制.方法:对25例砷中毒肝损伤患者按职业性中毒性肝病诊断标准分为A组(无明显肝病患者)、B组(轻度砷中毒肝损伤患者)、C组(中、重度砷中毒肝损伤患者).采用免疫组化ABC法进行Fas、FasL、.Bax、Bcl-2、Bcl-XL检测.结果采用PEMS统计软件进行Radio分析.结果:Fas、FasL表达在肝损伤较重的C组比肝损伤较轻的B组及无明显肝病的A组显著增强,三组间分级构成上有显著性差异(P<0.05);Bax表达在A、B、C组间分级构成上也有显著性差异(P<0.05),而Bcl-2和Bcl-XL表达在B、C两组间分级构成上无显著性差异(P>0.05),但在A组与B、C.组间比较则有显著性差异(P<0.05).结论:推测砷可能通过上调凋亡基因蛋白Fas/FasL和Bcl-2家族中促凋亡蛋白Bax的表达而启动肝细胞的胞内凋亡信号传导途径,导致肝细胞凋亡增加.

大肠癌和大肠腺瘤COX-2和Bcl-2的基因表达及其意义

目的 探讨COX 2及Bcl 2基因在大肠癌和大肠腺瘤组织中的表达及其意义。方法 应用免疫组化ABC法检测 2 8例大肠癌、2 8例大肠腺瘤和 10例正常黏膜中COX 2及Bcl 2表达 ,应用TUNEL法检测细胞凋亡。结果 在大肠癌、大肠腺瘤及正常黏膜中COX 2的阳性表达分别为 82 1%、85 7%和 0 0 %。Bcl 2的阳性表达分别为 75 0 %、78 6%和 2 0 0 %。大肠癌与腺瘤的COX 2及Bcl 2表达均无显著性差异 (P >0 0 5) ,但均显著高于正常黏膜 (P <0 0 1)。大肠癌中凋亡指数明显高于大肠腺瘤 (χ2 =8 80 ,P <0 0 5) ,COX 2和Bcl 2的表达均与大肠腺瘤及大肠癌的细胞凋亡指数呈显著负相关 (腺瘤P <0 0 1;癌P <0 0 5) ,两者均与临床病理特征无相关性 (P >0 0 5) ,大肠癌高、中、低分化各组间及不同Dukles分期 (A、B期和C、D期 )各组间凋亡指数无显著性差异 (P>0 0 5)。结论 COX 2和Bcl 2在大肠腺瘤及大肠癌中表达增强 ,从而抑制了细胞凋亡 。

弓形虫对小鼠肝脏损害的观察

目的 观察刚地弓形虫感染小鼠肝脏中弓形虫对肝脏损害的病理变化。方法 采用免疫组化 ABC法。结果 可见弓形虫从两方面对小鼠肝脏造成损害 :一方面 ,弓形虫进入血流 ,随血流进入肝脏 ,在肝组织血管及毛细血管周围的肝细胞内寄生、繁殖 ,导致肝细胞发生肿胀变性 ,细胞破裂形成坏死灶、坏死区 ,同时也导致血管壁破坏 ,肝组织内广泛出血 ,致使小鼠死亡 ;另一方面 ,经腹腔进入小鼠体内的弓形虫侵入肝脏边沿的肝细胞内寄生、繁殖形成坏死区 ,然后再向肝脏内侵入形成坏死灶 ,致使肝细胞大量坏死 ,使肝脏组织结构遭到破坏。结论 弓形虫对小鼠肝脏的损害是破坏肝细胞、肝内血管壁及毛细胞血管壁 ,造成肝脏组织结构破坏 ,功能丧失 ,肝内血管破裂 ,肝内出血 。

胃癌c-erbB-2过度表达与预后的关系

探讨c－erbB－2过度表达与胃癌预后的关系。方法：用免疫组化ABC法对103例胃癌手术标本及151个转移淋巴结进行c－erbB－2表达检测。结果：21．4％胃癌手术标本出现阳性表达．其中进展期胃癌、乳头状腺癌、高中分化胃癌及伴淋巴与肝转移的胃癌阳性率显著增高（P＜0．05与＜0．01）；转移淋巴结表达阳性率高于胃癌原发灶（X2＝3．7．P＞0．05）。高中分化胃癌伴c－erbB－2过度表达者5年生存率显著低于阴性者（P＜0．01）。结论：c－erbB－2过度表达可作为胃癌预后估计指标之一。