冰冻切片应用SP免疫组化染色法的体会

链霉菌亲生物素蛋白-过氧化物酶连接法（streptavidin peroxidase conjugated method,SP法）是美国ZYMED公司于1986年首创的免疫组化方法。我们用SP法研究了SARS冠状病毒（SARS—CoV）S蛋白的功能性受体血管紧张索转换酶2（ACE2）在大鼠内脏尤其在胰腺内外分泌腺的表达，效果满意。现结合我们所做的实验对免疫组化程序中的一些主要技术问题总结如下。

自发性高血压大鼠心肌血管内皮生长因子表达水平的检测

目的探讨血管内皮生长因子(Vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)在自发性高血压大鼠(Spontaneouslyhypertensiverat,SHR)心肌细胞中的表达情况,分析其与高血压时心肌毛细血管稀少及微小动脉“重塑”(remodeling)的关系。方法应用免疫组化SP染色法及计算机图像分析技术,对幼年(6周,n=15)和成年(12个月,n=15)SHR大鼠及幼年(6周,n=10)和成年(12个月,n=10)同系正常血压对照组京都Wistar大鼠(Wistar-Kyoto,WKY)心肌VEGF蛋白的表达水平进行了定量分析。结果在4组大鼠心脏各部(心房肌、心室肌、房间隔、室间隔等)心肌细胞浆中及冠状动脉各级分支的血管平滑肌细胞中均见有阳性VEGF表达,6周龄、12个月龄WKY及6周龄SHR三组间表达水平差异无统计学意义(P>0.05),而12个月龄SHR组表达水平较其他三组均高(P<0.05)。结论随着成年SHR大鼠血压的升高,心肌及血管平滑肌细胞中VEGF蛋白的表达水平上调,可能是对高血压所致的靶器官继发性毛细血管减少的一种代偿反应,高表达的VEGF可对抗由于缺氧诱导的内皮细胞凋亡,维持其存活,并促进微血管再生。

多种因子在门脉高压大鼠结肠黏膜中的表达

目的:探讨多种因子在门脉高压大鼠结肠黏膜中的表达及其意义。方法:实验组大鼠行门静脉两步结扎加左肾上腺静脉结扎;应用免疫组化SP染色法检测iNOS、ecNOS、ET-1、及TNF-α在大鼠结肠黏膜中的表达情况。结果:实验组iNOS、ET-1、及TNF-α表达较对照组增强(2.97±0.51 vs 2.33 ± 0.76;2.01 ± 0.32 vs 1.38 ± 0.74;2.57 ± 0.64 vs 1.67 ± 0.36,P<0.05),ecNOS无明显变化(2.01 ± 0.69 vs 1.87 ± 0.56,P>0.05)。结论:iNOS、ET-1、TNF-α参与门脉高压大鼠结肠黏膜局部病变。

乳腺不典型增生癌变过程中基底膜的变化

目的 观察乳腺良性疾病不典型增生癌变过程中基底膜的变化。方法 采用SP免疫组化染色法和两种特殊染色方法 (Foot及PAS染色法 ) ,并利用电镜观察基底膜的变化。结果 Ⅱ级不典型增生的乳腺组织已有基底膜的变化 ,Ⅲ级不典型增生时基底膜的变化更明显 ,主要表现为光镜下基底膜明显厚薄不均 ,电镜下则可见小的缺失 ,而乳腺癌组织中基底膜完全缺如。结论 在乳腺上皮细胞癌变过程中基底膜的变化与乳腺上皮细胞的变化密切相关 ,是乳腺上皮不典型增生癌变过程的一部分。