基于免疫组库测序的肝硬化典型证候患者外周血T细胞受体β链CDR3多样性分析

目的 本研究通过免疫组库测序,分析肝硬化不同典型证候患者外周血TCR β链CDR3的多样性,探讨肝硬化证候的物质基础及其规律。方法 20例肝硬化患者为病例组,包括肝胆湿热(LGHD)、肝郁脾虚(LDSD)、肝肾阴虚(LKYD)3种证型,10例健康患者为正常对照组。从外周血样品中提取DNA,对TCRβ链CDR3进行多重PCR扩增,然后对产物进行高通量测序,分析其TCR β链CDR3的多样性。结果 肝硬化证候LDSD的CDR3独有nt序列数与CDR3独有aa序列数均少于LKYD(P<0.05);LGHD和LKYD的Clonality、Pielous、Shannon.Index和DE50具有显著性差异(P<0.05);3种证型的V和J区基因中多个片段使用频率及V-J基因重组有显著性差异:在LGHD和LDSD中,TRBV21-1、TRBV12-4、TRBV11-1亚型及7对V-J重组有统计学差异(P<0.05);在LGHD和LKYD中,TRBV10-2、TRBV7-6、TRBV5-8亚型及30对V-J重组有统计学差异(P<0.05);在LDSD和LKYD中,TRBJ1-5亚型及18对V-J重组有统计学差异(P<0.05)。结论本研究通过挖掘肝硬化不同证候的免疫学特征,发现肝硬化证候TCR CDR3的多样性具有显著差异且符合由实向虚的证型变化规律,为寻找“病证结合”“辨证论治”的客观依据提供新的支撑,以期发现肝硬化不同证候人群适应性免疫基因重排的表达差异和特异性标记。

高通量免疫组库测序技术在血液系统肿瘤中的应用进展

高通量免疫组库测序技术是通过对B细胞受体(BCR)或者T细胞受体(TCR)的互补决定区(CDR)进行深度测序,借助相关数据分析方法,全面解析T或B细胞识别抗原的多样性,从而衍生为一种从组学角度理解适应性免疫机制的研究方法,其在抗体研发、感染免疫、肿瘤免疫等领域有重要的应用价值。在恶性T或B淋巴细胞肿瘤表面表达单克隆TCR或BCR分子,利用高通量免疫组库测序技术系统性分析TCR或BCR,发现特定的CDR基因序列,从而为T或B淋巴细胞肿瘤诊断、微小残留病灶监测提供一种新方法 ,此外,高通量免疫组库测序技术也为造血干细胞移植后免疫重建评估提供一种新的方法。本文就高通量免疫组库测序技术在血液系统肿瘤中的应用作一综述。

儿童急性淋巴细胞白血病微小残留病的检测及其应用进展

儿童急性淋巴细胞白血病（ALL）是一种起源于淋巴细胞异常增牛的恶性肿瘤性疾病，是儿童最常见的恶性肿瘤。虽然分层治疗已使儿童ALL的疗效明显提高，但仍有15％～20％的患儿最终复发，其主要原因是白血病微小残留病变（MRD）的存在。MRD是指白血病患者经诱导化疗完全缓解后（或骨髓移植后），在体内残存有形态学上不能检测到的微量白血病细胞的状态。MRD的检测方法主要有流式细胞术和实时荧光定量聚合酶链反应及免疫组库测序技术。检测MRD水平对判断预后、指导危险度分组技个体化治疗等方向具有重要意义。现总结近年来儿童ALL—MRD的主要检测方法及临床应用所取得的进展。