基于分子生物学与免疫学技术的肿瘤综合实验课程的设计及思考

为适应生命科学及医学全面发展的需要,实现本科生实验课程的连贯性和交叉性,需打破常规单一课程实验的教学内容,开展肿瘤综合实验课程的教学改革。分子生物学和免疫学是与生命科学、基础医学及临床医学的科学研究联系最为紧密的两门基础学科,也是学生获得技能训练与形成完善科学思维的重要助力来源。本研究将以肿瘤相关基因的分析及干预为切入点,尝试以分子生物学与免疫学技术为主体进行实验课程整合,初步探索建立新的肿瘤综合实验课程。课程注重学生逻辑思维的开发,通过数据库筛选、实验操作、实验汇报及论文撰写等多个环节模拟科研过程,以期望显著提高本科生对科研的兴趣和理论联系实际的能力,培养学生严谨的科学创新思维能力及全面分析问题和解决问题的能力,为将来研究生阶段相关的科学研究奠定坚实基础。同时,有助于培养具备多学科知识储备的师资力量,通过教学促进科研的协调发展。

免疫学及分子生物学检测技术在慢性肺曲霉病早期诊断中的应用研究

目的 探讨免疫学及分子生物学检测技术在慢性肺曲霉病早期诊断中的应用效果。方法 非随机选取2020年1月—2023年8月西安医学高等专科学校附属医院收治的110例疑似慢性肺曲霉病患者为研究对象,均为其开展免疫学及分子生物学检测技术检测,以病原学检查结果为金标准,分析免疫学及分子生物学检测技术在慢性肺曲霉病早期诊断中的效果。结果 分子生物学肺泡灌洗液-实时荧光定量核酸扩增检测系统(bronchoalveolar lavage fluid-quantitative real-time PCR,BALF-QPCR)对慢性烟曲霉病进行诊断的准确度为88.18%(97/110),灵敏度为87.78%(79/90),阴性预测值为62.07%(18/29),高于免疫诊断方法的72.73%(80/110)、68.89%(62/90)、39.13%(18/46),差异有统计学意义(χ^(2)=7.590、10.513、10.526,P均<0.05)。结论 分子生物学检测技术在慢性肺曲霉病早期诊断中可取得更高的诊断灵敏度,可使慢性肺曲霉病得到有效的早期诊断。

非洲猪瘟分子生物学和免疫学检测技术研究进展

非洲猪瘟(African Swine Fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒引起家猪和野猪急性、烈性、高度接触性的传染病。自非洲猪瘟首次被报道至今,世界范围内尚无有效的疫苗和治疗方法,因此,非洲猪瘟的早期诊断对该病的防控显得尤为重要。国内外实验室针对非洲猪瘟的诊断开展了大量的研究,建立了一系列的检测方法。ASF实验室检测技术的推广和应用,为非洲猪瘟的防控和净化提供了关键的技术支撑。本文对近年来国内外非洲猪瘟检测方法研究进展进行了综述,特别对分子生物学和免疫学检测方法进行了梳理归纳,比较了优缺点,以期为非洲猪瘟的早期诊断检测和新检测技术的开发提供帮助。

淋巴瘤免疫组织化学标志物的合理应用

对多数病理医生尤其是初学者而言,淋巴瘤病理诊断较为困难。主要有两方面原因:(1)淋巴瘤发病率低,在所有恶性肿瘤中排名第10位[1],世界范围内我国淋巴瘤发病率远低于美国和其他发达国家[2],因此在一般非肿瘤专科医院的病理医生的日常工作中并不常见。(2)与多数实体肿瘤单纯形态观察即可诊断不同,淋巴瘤诊断需结合形态与免疫表型且淋巴瘤分类复杂[3],初学者难于掌握。

US-FNAC结合CT、CgA和TG免疫组织化学染色在甲状腺髓样癌诊断中的应用

目的探讨超声引导下细针穿刺细胞学(ultrasound-guided fine-needle aspiration cytology,US-FNAC)联合降钙素(calcitonin,CT)、嗜铬素A(chromogranin A,Cg A)、甲状腺球蛋白(thyroglobulin,Tg)诊断甲状腺髓样癌(medullary thyroid cancer,MTC)的应用价值。方法对7例US-FNAC诊断且术后组织病理学确诊的MTC临床资料和超声特点、细胞病理学特征进行综合分析。细针穿刺标本采用常规涂片1~2张自然风干后刘氏染色液快速染色,现场进行细胞病理学评判,确保取得满意的细胞量,同时将剩余标本注入液基细胞保存液中保存,采用液基薄层制片,HE染色及CT、CgA和Tg免疫组织化学染色。结果7例MTC细胞均中等量到大量,均有散在突出的大细胞、双核细胞、浆样细胞或核偏位不规则细胞;6例伴梭形细胞,细胞病理学表现与MTC细胞学诊断标准基本相符,CT、CgA胞质均弥漫强阳性表达,Tg阴性,细胞病理学诊断为MTC。结论US-FNAC技术可提高甲状腺结节细针穿刺标本满意度,结合液基薄层制片与CT、CgA免疫组织化学染色可提高MTC术前诊断准确性,对MTC治疗具有重大的临床意义。

基于数据挖掘及免疫组织化学技术分析EPHA5在肺腺癌中的表达

目的探索促红细胞生成素产生型人肝细胞受体A5(erythropoietin-producing hepatocellular receptor A5,EPHA5)在肺腺癌中的表达。方法通过网络数据库获得EPHA5在不同肿瘤中的变异情况,构建EPHA5蛋白互作网络图,分析EPHA5在肺腺癌中的预后情况。收集肺腺癌患者的手术标本及临床资料,采用免疫组织化学方法检测EPHA5的表达情况,分析肺腺癌中EPHA5表达与患者临床特征的相关性。结果EPHA5在肺腺癌中的突变频率最高,以错义突变为主。除EPH家族的配体之外,EPHA5与RhoA、ADAM10蛋白密切相关。EPHA5的高表达与肺腺癌患者的总生存时间和首次进展时间相关。EPHA5在肺腺癌组织中表达上调,与患者淋巴结转移、分化程度、TNM分期显著相关。结论EPHA5在肺腺癌组织中高表达,可以作为预测肺腺癌预后的一个因素。

联合p16、Ki-67免疫组织化学染色在宫颈上皮内瘤变分级诊断中的应用效果观察

[目的]探究与分析联合应用p16、Ki-67免疫组织化学染色对宫颈上皮内瘤变(CIN)分级诊断的影响.[方法]回顾性分析自2019年3月至2021年11月间收治的接受宫颈液基薄层细胞学检查(TCT)且检查结果异常的60例患者的临床资料.全部患者按照苏木精-伊红染色法(HE)结果分为慢性宫颈炎组(n=19)、CINⅠ组(n=15)、CINⅡ组(n=12)、CINⅢ组(n=10)、宫颈癌组(n=4),全部患者均进行了宫颈阴道镜活检、人乳头瘤病毒(HPV)分型检测,并配合采用P16、Ki-67免疫组织化学染色的半定量评分,以判断患者宫颈病变程度.[结果]随着宫颈CIN病变程度的升高,CINⅢ组分别与CINⅠ组、CINⅡ组相比,CINⅡ组与CINⅠ组相比,P16表达阳性程度及Ki-67表达阳性程度升高,差异有统计学意义(P<0.05).慢性宫颈炎组P16、Ki-67免疫组织化学结合半定量评分与HE染色CIN分级诊断结果相符,CINⅠ组、CINⅡ组、CINⅢ组诊断结果相符率为94.59%,差异具有统计学意义(P<0.05).P16呈阳性表达时与HPV感染呈正相关(P<0.05).HPV-16、HPV-18、HPV-35、HPV-39、HPV-51在P16表达阳性与阴性方面差异具有统计学意义(P<0.05).[结论]CIN分级与P16、Ki-67的表达呈正相关,且P16与患者HPV感染有密切的关系.

H3.3G34W、p63及SATB2免疫组织化学染色联合应用对骨巨细胞瘤的诊断价值

目的探讨H3.3G34W、p63及SATB2在骨巨细胞瘤(giant cell tumor of bone,GCTB)中的表达情况及其联合应用对GCTB的诊断作用和价值。方法收集西安交通大学附属红会医院病理科2020年至2022年诊断的54例GCTB、83例非骨巨细胞瘤(non-giant cell tumor of bone,NGCTB)(包含14例动脉瘤样骨囊肿、16例软骨母细胞瘤和53例非骨化性纤维瘤)患者的样本和病历资料,采用免疫组织化学EliVision法检测H3.3G34W、p63及SATB2的表达情况。通过χ^(2)检验判断H3.3G34W、p63及SATB2的阳性率在各组间是否存在统计学差异;通过Logistic回归分析建立包括H3.3G34W、p63及SATB2的联合诊断模型,通过受试者工作特征(ROC)曲线分析评价模型的诊断价值。结果H3.3G34W、p63及SATB2在GCTB组中阳性率分别为81.5%、90.7%、92.6%;在NGCTB组中阳性率分别为2.4%、28.9%、62.7%。与NGCTB组相比,GCTB组患者年龄显著较大[(41.222±14.849)vs.(16.566±9.439);P<0.001],女性比男性患病率更高(51.9%vs.48.1%,P<0.001)。与NGCTB组相比,GCTB组中H3.3G34W(81.5%vs.2.4%,P<0.001);p63(90.7%vs.28.9%,P<0.001)和SATB2(92.6%vs.62.7%,P<0.001)的阳性率更高。单因素Logistic回归分析构建单因素预测模型,同时行ROC曲线分析,表明年龄(AUC=92.9%,P<0.001)、性别(AUC=64.5%,P=0.004)、H3.3G34W阳性率(AUC=89.5%,P<0.001)、p63阳性率(AUC=80.9%,P<0.001)、SATB2阳性率(AUC=65.0%,P=0.003)是GCTB诊断的独立预测因素。进一步的多因素Logistic回归分析构建混合预测模型,并行ROC曲线分析,发现混合模型展现出比单因素模型更好的预测价值(AUC=98.4%,P<0.001)。结论H3.3G34W、p63及SATB2是有效诊断GCTB的分子标记物,且三者联合应用更能提高GCTB的诊断预测效能。

非小细胞肺癌BRAF V600E突变免疫组织化学检测中国专家共识

我国肺癌的发病率和病死率均位居恶性肿瘤的首位[1],其中非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)约占85%[2]。BRAF是丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)/细胞外信号调节激酶(extracellular-signal regulated kinases,ERK)信号通路的关键调节因子[3]。NSCLC中BRAF基因突变率为1.5%~5.5%,其中以BRAF V600E突变(Ⅰ类突变)为主,占所有BRAF基因突变的30%~50%[3-5]。BRAF突变NSCLC患者预后不良,且常规的化疗或免疫治疗临床获益有限[6]。国内外临床研究显示:BRAF抑制剂(达拉非尼)与丝裂原活化细胞外信号调节激酶(mitogen-activated extracellular signal-regulated kinase,MEK)抑制剂(曲美替尼)联用,在初治和经治的BRAF V600E突变的晚期NSCLC患者中均显示良好的疗效及生存获益[7-8]。基于此,该联合疗法已获得中国、美国、欧洲、日本等多个国家和地区的批准,用于治疗BRAF V600E突变的转移性NSCLC,并纳入国内外权威指南推荐。

宫颈鳞癌中PD-L1不同抗体免疫组织化学染色的一致性分析

目的探讨宫颈鳞癌中程序性死亡配体1(PD-L1)表达情况及22C3、SP263、E1L3N 3种抗体免疫组化染色的一致性。方法收集解放军总医院两个医学中心89例复发或转移性宫颈鳞癌样本,用PD-L13种克隆号抗体22C3、SP263、E1L3N进行染色,并采用联合阳性评分(CPS)、肿瘤细胞比例评分(TPS)两种评分标准,在不同阈值下对抗体的一致性进行统计学分析。结果宫颈鳞癌在CPS阳性阈值为1时,PD-L1阳性率从高到低依次为22C3(98.31%)、E1L3N(97.75%)、SP263(93.90%);CPS为10时,阳性率依次为E1L3N(76.40%)、22C3(72.88%)、SP263(69.51%);TPS阈值为1%时,阳性率依次为E1L3N(95.51%)、22C3(93.22%)、SP263(92.68%);TPS为10%时,阳性率依次E1L3N(65.17%)、22C3(64.41%)、SP263(60.98%)。当CPS为1或10时、TPS为1%或10%时,E1L3N与22C3、SP263与22C3、SP263与E1L3N均表现较好的一致性(Kappa=0.66~0.98)。无论使用CPS或TPS,组内相关系数检验显示3个克隆号抗体判读数据有高度一致性(ICC分别为0.987、0.984)。结论E1L3N、SP263与22C3之间具有较高的可互换性,为临床检测PD-L1在宫颈癌组织中的表达情况,提供了更多选择。

多组织包埋在人表皮生长因子受体2免疫组织化学阳性对照制作中的应用

目的探讨多组织包埋在人表皮生长因子受体2(HER2)免疫组织化学阳性对照制作中的应用。方法收集2022年8月至2023年8月满足中山大学孙逸仙纪念医院病理科临床诊断后剩余的乳腺癌组织,通过免疫组织化学定位,选取HER2均一表达0、+、++、+++的组织,进行多组织包埋,制作成阳性对照蜡块。结果每张组织化学片中对照组织中均能HER2表达0、+、++、+++。结论多组织包埋可以很好地应用在HER2免疫组织化学阳性对照制作中。

多组织蜡块在免疫组织化学染色阳性对照中的应用

目的:目前免疫组织化学染色阳性对照的制作方法多种多样,单组织对照制作简单,但使用时由于免疫组织化学染色指标过多,容易出错。一些多组织对照使用方便,但制作方法繁琐、难度高。本研究旨在探讨一种新型、简单的多组织蜡块的制作及其在免疫组织化学染色对照中的应用。方法:依据国际特设专家委员会对常见抗体对照组织的推荐,选取包含肝、阑尾、扁桃体、肺、胰腺组织蜡块各1个为1组,共10组,进行厚度为6μm的连续切片,将切好的组织片依次卷曲叠在一起,形成一个长条形的致密组织卷,经过切割和包埋,制成多组织免疫组织化学染色阳性对照蜡块,然后用于免疫组织化学染色。结果:该阳性对照蜡块染色效果好,包含5种阳性对照组织,可适用于68种常用的免疫组织化学染色标志物。一次至少可制作对照蜡块2个,耗时约20 min,组织大小平均约为4.7 mm×4.1 mm,不同对照蜡块之间以及同一对照蜡块的不同切面之间,切片后免疫组织化学染色结果一致性较好,一个蜡块平均可切约800张有效的免疫组织化学染色对照片。结论:多组织阳性对照蜡块制作方法简单,耗时少、组织面积小、一致性好、重复性高,可以满足68种常用抗体对照组织的设置需求,对日常免疫组织化学染色检测有较好的临床应用价值。

免疫组织化学室内质控对照组织的新型保存设置方法

目的研究一种新型免疫组织化学阳性对照组织保存和设置方法,将目前在用的免疫组织化学阳性对照设置方法化繁为简。方法以胸腔积液为例,将新鲜胸腔积液离心固定破除红细胞,制成细胞悬液,然后将细胞悬液进行脱水处理,保存在按比例混合的石蜡和液体石蜡制成的膏状物中,灌注在唇膏管中,旋出膏体,涂抹在黏附玻片上,膏体中保存的细胞即可被黏附于玻片上,进行后续的免疫组织化学染色。结果显微镜下观察涂抹的细胞分布均匀,细胞密度适宜,细胞形态完整,在苏木精-伊红(HE)染色中,细胞核与细胞质染色对比清晰,细胞核着苏木精的紫色,细胞质着伊红的淡粉红色,组织细胞,淋巴细胞,间皮细胞等清晰可辨。在免疫组织化学CD68染色中,组织细胞细胞质棕黄色着色。在免疫组织化学Ki-67染色中,增殖期的细胞细胞核棕黄色着色。免疫组织化学染色结果表达清晰,定位准确。结论免疫组织化学阳性组织对照棒涂抹的阳性对照细胞可以代替蜡块切成蜡片制备的阳性对照,免疫组织化学阳性组织对照棒可以应用于免疫组织化学制片过程中阳性对照设置这一步骤中。

冰冻切片联合快速免疫组织化学检测在乳腺癌前哨淋巴结转移诊断中的应用价值

目的:观察冰冻切片联合快速免疫组织化学检测在乳腺癌前哨淋巴结转移诊断中的应用价值。方法:收集2022年3月-2023年10月贵州医科大学附属白云医院收治的190例乳腺癌患者病理组织标本,均采取冰冻切片、快速免疫组织化学法、石蜡切片进行前哨淋巴结活检,以石蜡切片病理结果作为“金标准”,评估冰冻切片、快速免疫组织化学法以及两者联合检测对乳腺癌前哨淋巴结转移的诊断效能。结果:190例患者石蜡切片病理结果显示,乳腺癌前哨淋巴结转移56例。冰冻切片联合快速免疫组织化学检测诊断乳腺癌前哨淋巴结转移的准确率、灵敏度、阴性预测值高于冰冻切片、快速免疫组织化学法,诊断乳腺癌前哨淋巴结转移的特异度、阳性预测值低于冰冻切片、快速免疫组织化学法,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:冰冻切片联合快速免疫组织化学检测在乳腺癌前哨淋巴结转移诊断中的临床价值较高,能够提高诊断准确率、灵敏度、阴性预测。

肾组织石蜡切片Ⅳ型胶原α链免疫组织化学染色在诊断Alport综合征中的应用

目的对Alport综合征(AS)患者肾脏穿刺组织进行石蜡切片Ⅳ型胶原α链免疫组织化学检测,探讨其临床应用价值。方法选取2018年11月至2022年7月浙江大学医学院附属第一医院肾脏病中心确诊的10例AS患者(AS病例组)、10例心脏死亡器官捐献者(DCD)供肾及10例确诊为免疫球蛋白A肾病患者(对照组)的肾组织进行石蜡切片Ⅳ型胶原α1、α3、α5链全自动免疫组织化学染色,将其与冰冻切片免疫荧光染色结果进行比较。将对照组肾组织石蜡切片分别采用多种方法进行抗原修复,比较修复效果。结果对照组肾组织2种染色方法Ⅳ型胶原α1、α3、α5链染色在肾小球基底膜(GBM)中均为连续线状阳性表达。AS病例组肾组织2种染色方法Ⅳ型胶原α1链染色在GBM均呈连续线状阳性表达,α3、α5链染色在GBM为阴性或节段弱阳性表达。2种染色方法染色结果具有较高的一致性(Kappa=0.615,P=0.035)。结论石蜡切片全自动免疫组织化学检测Ⅳ型胶原α1、α3和α5能较好地用于AS的诊断,为AS的诊断和研究提供了一种可靠的技术手段。

免疫组织化学检测在乳腺癌病理诊断中的价值分析

分析免疫组化应用于病理诊断乳腺癌的临床价值。方法 选择广西钦州市第二人民医院收治的乳腺癌病例100例,收治时间为2021年10月-2022年10月期间,按雌孕激素受体分为参照组(阴性)、试验组(阳性),全部研究对象均予以免疫组化检测,分析两组的腋窝淋巴结转移率、hMAM、C-erbB-2指标。结果 实验组与参照组比较,其腋窝淋巴结转移率、、CerbB-2阳性表达、hMAM阴性表达大幅度提升,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 免疫组化应用于病理诊断乳腺癌,可用于评估其治疗方案、病情,临床应用价值较高。

乳腺癌病理诊断中免疫组织化学检测的临床价值观察

探究乳腺癌病理诊断中免疫组织化学检测的价值。方法 选取2022年1月-2023年1月的乳腺癌患者30例行免疫组织化学检测,PR-孕激素受体、ER-雌激素受体为阳性患者纳入试验组,共计15例,PR-孕激素受体、ER-雌激素受体为阴性患者纳入参照组,共计15例,围绕其相关指标进行对比讨论。结果 经免疫组织化学检测得知,试验组PR-孕激素受体阳性和ER-雌激素受体阳性患者的C-erbB-2基因阳性率明显低于参照组PR-孕激素受体阴性和ER-雌激素受体阴性患者,结果P值<0.05;试验组腋窝淋巴结转移率明显低于参照组,结果P值<0.05。结论 乳腺癌病理诊断中,应用免疫组织化学检测,能够更好的了解患者机体状况,对病程发展更了解,利于医生进一步治疗,提高治疗有效率。

乳腺癌病理诊断中免疫组织化学检测的临床价值分析

探究乳腺癌病理诊断中免疫组织化学检测的临床价值。方法 选择2023年1月至2023年12月医院收治的60例乳腺癌患者为研究对象,方法 以孕激素受体(PR)、雌激素受体(ER)阳性及阴性进行分组,将PR-ER-患者纳入阴性组(n=30例),将PR+ER+患者纳入阳性组(n=30),均对其实施免疫组织化学检测,对比阳性组、阴性组相关数据。结果 阳性组C -Her-2(+)占比23.33%(7/30)比阴性组80.00%(24/30)低,C -Her-2(-)76.67%(23/30)比阴性组60.00%(6/30)高,P<0.05;阳性组腋窝淋巴结转移率66.67%(20/30)比阴性组36.67%(11/30)高,未转移33.33%(10/30)比阴性组63.33%(19/30)低,P<0.05;发生转移患者Her-2(-)占比22.58%(7/31),未发生转移患者Her-2(-)占比65.52%(19/29),P<0.05。结论 免疫组织化学检测能够满足乳腺癌病理诊断需求,对于评估患者病情水平有一定价值,可为今后患者疾病临床诊断提供科学参考与借鉴。

免疫组织化学检测在乳腺癌病理诊断中的价值研究

探析免疫组织化学检测在乳腺癌病理诊断中的应用效果。选取2021年4月-2022年9月贵航安顺医院收治的70例乳腺癌患者为研究对象,根据孕激素受体(PR)和雌激素受体(ER)检查结果分组,检测结果为阳性者为阳性组(n=35例),检测结果为阴性者为阴性组(n=35例)。两组患者均采取免疫组织化学检测,分析检测结果。结果显示,阴性组C-erbB-2阳性率(71.43%)较阳性组(31.43%)更高,而阴性组C-erbB-2阴性率(28.57%)较阳性组(68.57%)更低(P<0.05)。阴性组腋窝淋巴结转移率(54.29%)较阳性组(28.57%)更高(P<0.05)。研究发现,免疫组织化学检测在乳腺癌病理诊断中应用价值较高,不仅能够清楚、准确地反映患者病情严重程度,同时可为治疗方案的制订及调整提供参考,值得临床采纳、推广。

免疫组织化学检测在卵巢肿瘤病理诊断和鉴别诊断中的价值分析

分析免疫组织化学检测应用于卵巢肿瘤病理诊断和鉴别诊断的价值。方法 从2022年12月到2024年3月,我院就诊的疑似卵巢囊肿的患者中选择108人作为研究对象,根据患者使用的检查方式将其分成两组,常规的病理检查联合影像学检查用于对照组患者,免疫组织化学检测联合影像学检查用于观察组患者,对比两组患者的诊断结果。结果 观察组患者的临床诊断准确率高达94.44%,和对照组的诊断准确率81.48%相比更高,P<0.05。108名患者中的原发性卵巢肿瘤共98例,占比(90.74%),继发性卵巢肿瘤患者共10例,占比9.26%。结论 卵巢肿瘤采用免疫组织化学检测的诊断准确率更高,可以明确的鉴别各类病变,具有较高的医学价值,对后续的治疗意义重大。