人宫颈上皮内瘤变和浸润癌组织中树突状细胞及T细胞的免疫组织化学定量分析

目的研究人宫颈上皮内瘤变和浸润癌组织中树突状细胞和T细胞的数量、分布变化,为人宫颈癌的诊断和生物治疗提供实验依据。方法采用免疫组织化学和图像分析技术,测定人宫颈上皮内瘤变、宫颈浸润癌和正常宫颈组织中树突状细胞表型抗原CD1a、S-100及T细胞表面分化抗原CD3、CD8阳性细胞的数量、分布和表达强度。结果与人正常宫颈组织比较,宫颈上皮内瘤变中CD1+a、S-100+、CD3+、CD8+细胞数量增多(P<0.05),与组织分级呈正相关(P<0.05),抗体表达强度增高;宫颈浸润癌中4种抗体阳性细胞数量减少,与临床分期呈负相关(P<0.05),强度略有下降。结论人宫颈上皮癌前病变至浸润癌变过程中树突状细胞和T细胞数量及抗体表达强度发生变化,提示宫颈病变局部的免疫功能发生了改变。

Image-ProPlus图像分析软件在免疫组织化学定量分析中的基本应用

免疫组织化学，简称免疫组化，是应用免疫学基本原理-抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记在抗体上的显色剂，如荧光素、酶、金属离子和同位素等显色来确定组织细胞内抗原，对其进行定位、定性及定量的研究。比较显微测试网格和图像分析仪测试对病理组织结构的定量差别，无显著性差异［1，2］。但图像分析仪测试操作相对来说比较简便，因操作人员的主观因素造成的定量分析结果误差也相对较小，越来越多的病理图片使用病理图像分析仪进行分析［3～5］。免疫组化标本的定量分析最常用的主要有：阳性细胞数目，阳性细胞比例［6］，阳性面积［7］，光密度，积分光密度［8］。

Ki67免疫组织化学定量分析在宫颈鳞状上皮内瘤变病理分级中的应用

目的用Ki67免疫组织化学定量测定评估宫颈鳞状上皮内瘤变(CIN)病理分级。方法 190例经2位病理医师按WHO(2003)宫颈癌前病变标准诊断为不同级别CIN的宫颈切片,经Ki67免疫组织化学染色后,用医学图像分析系统定量测定宫颈上皮Ki67分层指数(stratification index,SI)、鳞状上皮各层的标记指数(label index,LI)及每100μm基底膜阳性细胞核数等3个参数。结果在190例宫颈活检病例中,病理学诊断96例CIN1,72例CIN2,22例CIN3。上述3个参数在不同级别CIN之间差异均有统计学意义(均P<0.05)。单纯用Ki67 SI评估CIN级别,与病理分级一致率为54.3%;而将各组Ki67 SI与中层LI结合评估,与病理分级一致率可达76.8%。结论宫颈鳞状上皮Ki67 SI和中层LI结合评估有助于提高CIN分级的准确性。

人正常宫颈组织CD3、CD4、CD8的免疫组织化学定量分析

目的:观察人正常宫颈组织中T细胞的分布、数量,为深入探讨宫颈病变组织、宫颈癌组织中相关T细胞的表达等提供实验资料。方法:采用免疫组织化学SP法和图像分析技术,检测人正常宫颈组织中表面分化抗原CD3、CD4、CD8阳性T细胞的分布、数量和表达强度。结果:CD3阳性细胞主要分布于人子宫颈黏膜上皮及近固有层结缔组织内。CD8阳性细胞广泛分布于人子宫颈黏膜固有层结缔组织内。CD4阳性细胞主要分布于人子宫颈黏膜上皮下固有层结缔组织内和宫颈黏膜腺样隐窝周围的结缔组织内。CD4阳性细胞数略高于CD8阳性细胞。结论:人正常宫颈组织中含有一定的比例的CD3、CD4、CD8阳性T细胞。

基于数据挖掘及免疫组织化学技术分析EPHA5在肺腺癌中的表达

目的探索促红细胞生成素产生型人肝细胞受体A5(erythropoietin-producing hepatocellular receptor A5,EPHA5)在肺腺癌中的表达。方法通过网络数据库获得EPHA5在不同肿瘤中的变异情况,构建EPHA5蛋白互作网络图,分析EPHA5在肺腺癌中的预后情况。收集肺腺癌患者的手术标本及临床资料,采用免疫组织化学方法检测EPHA5的表达情况,分析肺腺癌中EPHA5表达与患者临床特征的相关性。结果EPHA5在肺腺癌中的突变频率最高,以错义突变为主。除EPH家族的配体之外,EPHA5与RhoA、ADAM10蛋白密切相关。EPHA5的高表达与肺腺癌患者的总生存时间和首次进展时间相关。EPHA5在肺腺癌组织中表达上调,与患者淋巴结转移、分化程度、TNM分期显著相关。结论EPHA5在肺腺癌组织中高表达,可以作为预测肺腺癌预后的一个因素。

SARS患者脾淋巴细胞免疫组织化学的定量分析

目的对严重急性呼吸综合征(SARS)患者脾淋巴细胞进行定量分析,为SARS的病理变化和发病机制的探讨提供证据。方法通过免疫组织化学技术对6例SARS死亡患者脾和6例意外死亡者正常脾CD3+、CD4+、CD8+T细胞及CD20+B细胞的分布进行观察,并进行图像分析。结果SARS患者脾内的脾小体及动脉周围淋巴鞘(白髓)均遭到严重损害。动脉周围淋巴鞘的数量减少90·39%;脾小体减少80%左右,有的甚至完全消失;脾红髓广泛出血坏死。红髓内的CD3+T细胞平均数较正常减少71·76%,有的甚至完全消失,CD4+T细胞和CD8+T细胞分别平均减少86%和84%。CD20+B细胞减少80%以上。结论定量分析显示,SARS死亡患者脾中T细胞和B细胞普遍严重减少,提示SARS患者免疫系统遭到严重破坏,并可能是疾病的原发性损伤。

多光谱成像分析系统在乳腺癌组织免疫组织化学定量分析中的应用

如何对免疫组织化学染色（IHC）结果进行准确定量分析，减少人为误差，提高检测精度和重复性，一直备受关注，但仍未很好解决。IHC图像质量的高低直接影响其分析结果的精确度。传统的红绿蓝三原色标准图像，

宫颈鳞癌中PD-L1不同抗体免疫组织化学染色的一致性分析

目的探讨宫颈鳞癌中程序性死亡配体1(PD-L1)表达情况及22C3、SP263、E1L3N 3种抗体免疫组化染色的一致性。方法收集解放军总医院两个医学中心89例复发或转移性宫颈鳞癌样本,用PD-L13种克隆号抗体22C3、SP263、E1L3N进行染色,并采用联合阳性评分(CPS)、肿瘤细胞比例评分(TPS)两种评分标准,在不同阈值下对抗体的一致性进行统计学分析。结果宫颈鳞癌在CPS阳性阈值为1时,PD-L1阳性率从高到低依次为22C3(98.31%)、E1L3N(97.75%)、SP263(93.90%);CPS为10时,阳性率依次为E1L3N(76.40%)、22C3(72.88%)、SP263(69.51%);TPS阈值为1%时,阳性率依次为E1L3N(95.51%)、22C3(93.22%)、SP263(92.68%);TPS为10%时,阳性率依次E1L3N(65.17%)、22C3(64.41%)、SP263(60.98%)。当CPS为1或10时、TPS为1%或10%时,E1L3N与22C3、SP263与22C3、SP263与E1L3N均表现较好的一致性(Kappa=0.66~0.98)。无论使用CPS或TPS,组内相关系数检验显示3个克隆号抗体判读数据有高度一致性(ICC分别为0.987、0.984)。结论E1L3N、SP263与22C3之间具有较高的可互换性,为临床检测PD-L1在宫颈癌组织中的表达情况,提供了更多选择。

淋巴瘤免疫组织化学标志物的合理应用

对多数病理医生尤其是初学者而言,淋巴瘤病理诊断较为困难。主要有两方面原因:(1)淋巴瘤发病率低,在所有恶性肿瘤中排名第10位[1],世界范围内我国淋巴瘤发病率远低于美国和其他发达国家[2],因此在一般非肿瘤专科医院的病理医生的日常工作中并不常见。(2)与多数实体肿瘤单纯形态观察即可诊断不同,淋巴瘤诊断需结合形态与免疫表型且淋巴瘤分类复杂[3],初学者难于掌握。

免疫组织化学Image Pro Plus图像半定量分析的参数选择

应用ImageProPlus（IPP）图像分析软件测算阳性细胞面积（area）、平均光密度值、积分光密度值，研究面积参数选择、阳性结果选色方式对免疫组织化学结果的影响，以期获得IPP图像分析免疫组织化学的标准化结果。方法：采用人工计数法将矽肺免疫组织化学结果分为低表达、中表达、高表达3组。应用IPP软件，面积选择参数分为过滤10、30、50、100以下的阳性显色；采用吸管取色、RGB、HIS3种选择阳性显色的方法；编写宏文件，计算各组阳性细胞面积、平均光密度值（MD）、积分光密度值（IOD）的均值和总和，并与人工计数法测算结果进行比较。结果：在滤过面积10-100范围内，面积参数对各组阳性细胞面积总和、IOD总和统计结果无影响，与人工计数法结果一致；采用HIS选色测算的面积总和、IOD总和与人工计数法结果一致。结论：IPP图像分析能够简易、快速地进行免疫组织化学结果的半定量分析，面积参数在一定范围内对测算结果无影响，HIS选色方式可能较吸管显色和RGB选色方式好，而IOD总和是比较可靠、稳定的半定量指标。

牙髓牙本质复合体纤维粘连蛋白的免疫组织化学研究与定量分析

目的 研究纤维粘连蛋白在牙髓牙本质复合体内的表达 ,探讨其分布与功能间的关系。 方法 免疫组织化学染色与图像定量分析。结果 纤维粘连蛋白免疫反应 (- IR)普遍存在于牙髓、前期牙本质和成熟牙本质的牙本质小管与成牙本质细胞突起 ,以成牙本质细胞层 ,牙髓血管与神经周围最为丰富。冠髓和冠部牙本质纤维粘连蛋白的积分光密度分别为 :0 .49± 0 .33,0 .5 0± 0 .2 9;线密度分别为 :38.44± 2 0 .7,19.34± 18.72 ;体密度分别为 :2 4.5 6± 10 .8,44 .5 2± 2 8.5。 结论 纤维粘连蛋白 - IR不仅见于牙髓与前期牙本质 ,而且也见于成熟牙本质的牙本质小管与成牙质细胞突起 ,它对维持牙髓牙本质复合体各结构的正常位置 。

联合p16、Ki-67免疫组织化学染色在宫颈上皮内瘤变分级诊断中的应用效果观察

[目的]探究与分析联合应用p16、Ki-67免疫组织化学染色对宫颈上皮内瘤变(CIN)分级诊断的影响.[方法]回顾性分析自2019年3月至2021年11月间收治的接受宫颈液基薄层细胞学检查(TCT)且检查结果异常的60例患者的临床资料.全部患者按照苏木精-伊红染色法(HE)结果分为慢性宫颈炎组(n=19)、CINⅠ组(n=15)、CINⅡ组(n=12)、CINⅢ组(n=10)、宫颈癌组(n=4),全部患者均进行了宫颈阴道镜活检、人乳头瘤病毒(HPV)分型检测,并配合采用P16、Ki-67免疫组织化学染色的半定量评分,以判断患者宫颈病变程度.[结果]随着宫颈CIN病变程度的升高,CINⅢ组分别与CINⅠ组、CINⅡ组相比,CINⅡ组与CINⅠ组相比,P16表达阳性程度及Ki-67表达阳性程度升高,差异有统计学意义(P<0.05).慢性宫颈炎组P16、Ki-67免疫组织化学结合半定量评分与HE染色CIN分级诊断结果相符,CINⅠ组、CINⅡ组、CINⅢ组诊断结果相符率为94.59%,差异具有统计学意义(P<0.05).P16呈阳性表达时与HPV感染呈正相关(P<0.05).HPV-16、HPV-18、HPV-35、HPV-39、HPV-51在P16表达阳性与阴性方面差异具有统计学意义(P<0.05).[结论]CIN分级与P16、Ki-67的表达呈正相关,且P16与患者HPV感染有密切的关系.

US-FNAC结合CT、CgA和TG免疫组织化学染色在甲状腺髓样癌诊断中的应用

目的探讨超声引导下细针穿刺细胞学(ultrasound-guided fine-needle aspiration cytology,US-FNAC)联合降钙素(calcitonin,CT)、嗜铬素A(chromogranin A,Cg A)、甲状腺球蛋白(thyroglobulin,Tg)诊断甲状腺髓样癌(medullary thyroid cancer,MTC)的应用价值。方法对7例US-FNAC诊断且术后组织病理学确诊的MTC临床资料和超声特点、细胞病理学特征进行综合分析。细针穿刺标本采用常规涂片1~2张自然风干后刘氏染色液快速染色,现场进行细胞病理学评判,确保取得满意的细胞量,同时将剩余标本注入液基细胞保存液中保存,采用液基薄层制片,HE染色及CT、CgA和Tg免疫组织化学染色。结果7例MTC细胞均中等量到大量,均有散在突出的大细胞、双核细胞、浆样细胞或核偏位不规则细胞;6例伴梭形细胞,细胞病理学表现与MTC细胞学诊断标准基本相符,CT、CgA胞质均弥漫强阳性表达,Tg阴性,细胞病理学诊断为MTC。结论US-FNAC技术可提高甲状腺结节细针穿刺标本满意度,结合液基薄层制片与CT、CgA免疫组织化学染色可提高MTC术前诊断准确性,对MTC治疗具有重大的临床意义。

H3.3G34W、p63及SATB2免疫组织化学染色联合应用对骨巨细胞瘤的诊断价值

目的探讨H3.3G34W、p63及SATB2在骨巨细胞瘤(giant cell tumor of bone,GCTB)中的表达情况及其联合应用对GCTB的诊断作用和价值。方法收集西安交通大学附属红会医院病理科2020年至2022年诊断的54例GCTB、83例非骨巨细胞瘤(non-giant cell tumor of bone,NGCTB)(包含14例动脉瘤样骨囊肿、16例软骨母细胞瘤和53例非骨化性纤维瘤)患者的样本和病历资料,采用免疫组织化学EliVision法检测H3.3G34W、p63及SATB2的表达情况。通过χ^(2)检验判断H3.3G34W、p63及SATB2的阳性率在各组间是否存在统计学差异;通过Logistic回归分析建立包括H3.3G34W、p63及SATB2的联合诊断模型,通过受试者工作特征(ROC)曲线分析评价模型的诊断价值。结果H3.3G34W、p63及SATB2在GCTB组中阳性率分别为81.5%、90.7%、92.6%;在NGCTB组中阳性率分别为2.4%、28.9%、62.7%。与NGCTB组相比,GCTB组患者年龄显著较大[(41.222±14.849)vs.(16.566±9.439);P<0.001],女性比男性患病率更高(51.9%vs.48.1%,P<0.001)。与NGCTB组相比,GCTB组中H3.3G34W(81.5%vs.2.4%,P<0.001);p63(90.7%vs.28.9%,P<0.001)和SATB2(92.6%vs.62.7%,P<0.001)的阳性率更高。单因素Logistic回归分析构建单因素预测模型,同时行ROC曲线分析,表明年龄(AUC=92.9%,P<0.001)、性别(AUC=64.5%,P=0.004)、H3.3G34W阳性率(AUC=89.5%,P<0.001)、p63阳性率(AUC=80.9%,P<0.001)、SATB2阳性率(AUC=65.0%,P=0.003)是GCTB诊断的独立预测因素。进一步的多因素Logistic回归分析构建混合预测模型,并行ROC曲线分析,发现混合模型展现出比单因素模型更好的预测价值(AUC=98.4%,P<0.001)。结论H3.3G34W、p63及SATB2是有效诊断GCTB的分子标记物,且三者联合应用更能提高GCTB的诊断预测效能。

SARS患者脾内IL-6I、FN-β和IP-10的免疫组织化学观察及定量分析

目的通过对严重急性呼吸综合征（SARS）患者脾内白细胞介素6（IL-6）,干扰素β（IFN-β）和干扰素γ诱导蛋白10（IP-10）的免疫组织化学结果分析,深入探讨SARS患者脾组织的病理变化及其发病机制。方法通过免疫组织化学技术观察6例SARS死亡患者脾和6例意外死亡者正常脾组织细胞内IL-6、IFN-β和IP-10的表达情况,并进行图像分析。结果SARS患者脾红髓内含大量IL-6阳性细胞,阳性产物呈团块状分布于细胞质和细胞核。图像分析结果显示,SARS患者脾红髓内IL-6阳性细胞的平均吸光度值（AA）与正常对照组比较,有显著性差异（P〈0.05）;SARS患者脾红髓内阳性细胞的细胞核、细胞质呈IFN-β阳性,阳性产物呈棕黄色团块状,图像分析结果显示,SARS患者脾组织内IFN-β阳性细胞的AA值与正常对照组比较,有显著性差异（P〈0.05）;SARS患者脾红髓内含大量IP-10阳性细胞,阳性产物呈棕黄色团块状,分布于细胞核和细胞质。图像分析结果显示,SARS患者脾组织内IP-10阳性细胞的AA值与正常对照组比较,有显著性差异（P〈0.05）。3种细胞因子在SARS患者残存的脾白髓内均呈阴性。结论SARS患者脾内细胞的IL-6、IFN-β和IP-10反应均相对增强,提示SARS患者脾组织的病理性损伤以及免疫功能缺陷可能与上述促炎症因子、免疫抑制因子及趋化因子的相对增多有关。

多组织蜡块在免疫组织化学染色阳性对照中的应用

目的:目前免疫组织化学染色阳性对照的制作方法多种多样,单组织对照制作简单,但使用时由于免疫组织化学染色指标过多,容易出错。一些多组织对照使用方便,但制作方法繁琐、难度高。本研究旨在探讨一种新型、简单的多组织蜡块的制作及其在免疫组织化学染色对照中的应用。方法:依据国际特设专家委员会对常见抗体对照组织的推荐,选取包含肝、阑尾、扁桃体、肺、胰腺组织蜡块各1个为1组,共10组,进行厚度为6μm的连续切片,将切好的组织片依次卷曲叠在一起,形成一个长条形的致密组织卷,经过切割和包埋,制成多组织免疫组织化学染色阳性对照蜡块,然后用于免疫组织化学染色。结果:该阳性对照蜡块染色效果好,包含5种阳性对照组织,可适用于68种常用的免疫组织化学染色标志物。一次至少可制作对照蜡块2个,耗时约20 min,组织大小平均约为4.7 mm×4.1 mm,不同对照蜡块之间以及同一对照蜡块的不同切面之间,切片后免疫组织化学染色结果一致性较好,一个蜡块平均可切约800张有效的免疫组织化学染色对照片。结论:多组织阳性对照蜡块制作方法简单,耗时少、组织面积小、一致性好、重复性高,可以满足68种常用抗体对照组织的设置需求,对日常免疫组织化学染色检测有较好的临床应用价值。

不同死后时间骨骼肌运动终板乙酰胆碱酯酶(AChE)降解变化的研究——酶组织化学定量分析(英文)

为进一步了解骨骼肌的死后变化特点和规律及其与死后时间 (PMI)的关系 ,本文选用成年实验大鼠 ,系列观察了死后 0 - 96小时 (0 - 96 hpm)骨骼肌运动终板和肌纤维在不同温度条件下 ACh E(乙酰胆碱酯酶 ) ,SDH(琥珀酸脱氢酶 ) ,L DH(乳酸脱氢酶 ) ,Ca2 + - ATPase(钙激活三磷腺苷酶 )的酶组织化学变化 ,并使用图象处理系统对上述酶反应结果进行了定量分析和比较。结果发现 ,上述改变与 PMI有明显的相关关系 ,其中运动终板 Ach E因位于突触间隙的特殊位置以及自身的耐活性质 ,故反应明确 ,稳定性高 ,降解缓慢显示更清晰和持久的降解曲线 ,可作为藉肌肉组织降解变化用于推断死亡时间的标志酶。

免疫组织化学室内质控对照组织的新型保存设置方法

目的研究一种新型免疫组织化学阳性对照组织保存和设置方法,将目前在用的免疫组织化学阳性对照设置方法化繁为简。方法以胸腔积液为例,将新鲜胸腔积液离心固定破除红细胞,制成细胞悬液,然后将细胞悬液进行脱水处理,保存在按比例混合的石蜡和液体石蜡制成的膏状物中,灌注在唇膏管中,旋出膏体,涂抹在黏附玻片上,膏体中保存的细胞即可被黏附于玻片上,进行后续的免疫组织化学染色。结果显微镜下观察涂抹的细胞分布均匀,细胞密度适宜,细胞形态完整,在苏木精-伊红(HE)染色中,细胞核与细胞质染色对比清晰,细胞核着苏木精的紫色,细胞质着伊红的淡粉红色,组织细胞,淋巴细胞,间皮细胞等清晰可辨。在免疫组织化学CD68染色中,组织细胞细胞质棕黄色着色。在免疫组织化学Ki-67染色中,增殖期的细胞细胞核棕黄色着色。免疫组织化学染色结果表达清晰,定位准确。结论免疫组织化学阳性组织对照棒涂抹的阳性对照细胞可以代替蜡块切成蜡片制备的阳性对照,免疫组织化学阳性组织对照棒可以应用于免疫组织化学制片过程中阳性对照设置这一步骤中。

冰冻切片联合快速免疫组织化学检测在乳腺癌前哨淋巴结转移诊断中的应用价值

目的:观察冰冻切片联合快速免疫组织化学检测在乳腺癌前哨淋巴结转移诊断中的应用价值。方法:收集2022年3月-2023年10月贵州医科大学附属白云医院收治的190例乳腺癌患者病理组织标本,均采取冰冻切片、快速免疫组织化学法、石蜡切片进行前哨淋巴结活检,以石蜡切片病理结果作为“金标准”,评估冰冻切片、快速免疫组织化学法以及两者联合检测对乳腺癌前哨淋巴结转移的诊断效能。结果:190例患者石蜡切片病理结果显示,乳腺癌前哨淋巴结转移56例。冰冻切片联合快速免疫组织化学检测诊断乳腺癌前哨淋巴结转移的准确率、灵敏度、阴性预测值高于冰冻切片、快速免疫组织化学法,诊断乳腺癌前哨淋巴结转移的特异度、阳性预测值低于冰冻切片、快速免疫组织化学法,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:冰冻切片联合快速免疫组织化学检测在乳腺癌前哨淋巴结转移诊断中的临床价值较高,能够提高诊断准确率、灵敏度、阴性预测。

肾组织石蜡切片Ⅳ型胶原α链免疫组织化学染色在诊断Alport综合征中的应用

目的对Alport综合征(AS)患者肾脏穿刺组织进行石蜡切片Ⅳ型胶原α链免疫组织化学检测,探讨其临床应用价值。方法选取2018年11月至2022年7月浙江大学医学院附属第一医院肾脏病中心确诊的10例AS患者(AS病例组)、10例心脏死亡器官捐献者(DCD)供肾及10例确诊为免疫球蛋白A肾病患者(对照组)的肾组织进行石蜡切片Ⅳ型胶原α1、α3、α5链全自动免疫组织化学染色,将其与冰冻切片免疫荧光染色结果进行比较。将对照组肾组织石蜡切片分别采用多种方法进行抗原修复,比较修复效果。结果对照组肾组织2种染色方法Ⅳ型胶原α1、α3、α5链染色在肾小球基底膜(GBM)中均为连续线状阳性表达。AS病例组肾组织2种染色方法Ⅳ型胶原α1链染色在GBM均呈连续线状阳性表达,α3、α5链染色在GBM为阴性或节段弱阳性表达。2种染色方法染色结果具有较高的一致性(Kappa=0.615,P=0.035)。结论石蜡切片全自动免疫组织化学检测Ⅳ型胶原α1、α3和α5能较好地用于AS的诊断,为AS的诊断和研究提供了一种可靠的技术手段。