程序性细胞死亡1-配体1在不同免疫组织化学染色方法的一致性比较

目的:比较程序性细胞死亡1-配体1(programmed cell death 1-ligand 1,PD-L1,克隆号E1L3N、22C3、SP263)在不同免疫组织化学染色方法的一致性。方法:第一步,筛选最优流程:采用PD-L1(克隆号E1L3N)抗体分别按推荐流程、自建流程①、自建流程②与自建流程③,对5例扁桃体组织完成平行免疫组织化学染色,专科病理医生对全部切片进行质量评分(0~6分),筛选出评分最高的流程;第二步,用最优流程与两种标准流程的评分结果进行一致性比较:选取近两年北京大学第一医院病理最终诊断为非小细胞肺癌的标本共32例,用筛选出的自建流程①、与SP263标准流程及22C3标准流程对32病例各自进行平行染色,全部染色片由专科病理医师行阳性肿瘤细胞比例评分(tumor proportion score,TPS)。评分结果按<1%,≥1%至<10%,≥10%至<50%,≥50%分组,分析PD-L1检测抗体克隆号E1L3N与22C3、SP263染色结果的一致性。结果:扁桃体染色切片质量评分(0~6分)如下:推荐流程为5、5、5、5、5分;自建流程①为5、6、6、5、6分;自建流程②为4、4、4、4、4分;自建流程③为3、3、3、3、3分。自建流程①的结果总体评分最高,选用自建流程①完成32例非小细胞肺癌病例的免疫组组织化学染色,TPS评分为:自建流程①,<1%共6例,≥1%至<10%共5例,≥10%至<50%共10例,≥50%共11例;22C3标准流程,<1%共5例,≥1%至<10%共3例,≥10%至<50%共13例,≥50%共11例;SP263标准流程,<1%共7例,≥1%至<10%共4例,≥10%至<50%共11例,≥50%共10例。一致性检验结果为:自建流程①和22C3标准流程,κ值为0.736(P<0.001),一致性好;自建流程①和SP263标准流程,κ值为0.914(P<0.001),一致性极好。结论:采用PD-L1(克隆号E1L3N)抗体,在罗氏Ventana Benchmark GX平台,通过自建染色流程①完成,可获得良好质量的染色切片;在非小细胞肺癌病例的检测中,自建染色流程①与22C3标准流程和SP263标准流程一致性好。

细胞角蛋白单克隆抗体免疫组织化学染色方法检测大肠癌淋巴结微转移的研究

目的为研究角蛋白克隆抗体免疫组织化学法在检测淋巴结微转移灶上的意义。方法采用三种角蛋白单克隆抗体AE1,AE3、AE1/AE3,对我院47例大肠癌术后患者331个淋巴结用免疫组织化学法重新检查。结果36个淋巴结存在微转移灶(11.9%),Duke'sC期患者微转移灶检出率高于Duke'B期患者(P<0.05)。随访显示有微转移灶Duke'B期病人肿瘤复发、远处扩散转移均较无微转移病人高(P<0.05)。结论即使是组织学检查结果为阴性的淋巴结,也很有存在微转移的可能性。免疫组织化学法栓测单克隆抗角蛋白抗体,可详细阐明临床分期,并可提供大肠癌治疗的指征。

BrdU免疫组织化学染色方法的改进(漂片法)

目的改进用漂片法进行BrdU免疫组织化学染色时的封闭液,以减少组织切片破损。方法用5-溴-2-脱氧尿嘧啶核苷(5-bromo-2-deoxyuridine,BrdU)标记大鼠踏转轮运动中所引起增殖细胞,通过ABC免疫组织化学方法染色。在染色过程中,比较不同的封闭液(羊血清、牛血清白蛋白、胰酶抑制剂)减少脑片破损的效果。结果踏转轮运动可使大鼠海马齿状回BrdU阳性细胞数明显多于对照组。加入不同的封闭液后,组织片破损率明显下降,尤其是加入牛血清白蛋白和胰酶抑制剂组,但胰酶抑制剂组有非特异性染色。结论牛血清白蛋白是较理想的封闭液。

大鼠垂体远侧部内分泌细胞的四重免疫组织化学染色方法

本文介绍一种显示大鼠垂体远侧部内分泌细胞的四重免疫组织化学染色方法。此法以PAP 法为基础,结合 DAB 银加强法和间接免疫金标记技术。方法比较简单,所需试剂容易得到。

组织芯片多重免疫组织化学染色方法的优化

为提高多重免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)技术在组织芯片(tissue microarray,TMA)上的染色效果,通过对同一样本进行多种抗体染色或同种抗体多次染色的方法,探索并优化IHC技术中的多个步骤,具体包括:“滤纸夹层-蒸蛋器”抗原修复新装置的研发、抗原修复液的筛选、透明剂的优选.研究结果显示:自创的“滤纸夹层-蒸蛋器”抗原修复辅助工具,能减少高温高压修复时水分子对组织的冲击,作用温和、操作安全,有较好的组织切片完整性和较少的组织脱片率,且可减少抗原修复液使用量;柠康酐抗原修复液对多重染色具有更强的阳性效应和通用性;无毒TO(terpentine oil)透明剂可取代有毒二甲苯,具有同样的脱蜡透明效果.TMA中多重IHC技术的改良,提供了更加高效、廉价、安全的方法,可提升与扩展TMA在病理学中的应用价值.

免疫组织化学染色的定量方法研究

本文提出阳性单位(PU)新概念,用于定量表达免疫组化阳性反应程度。本文将排除了切片或涂片本底因素后的纯免疫组化反应程度按灰度图像分为0(白)到100(黑)个等级,每一等级定义为1个阳性单位。导出公式如下:a.PU=100(G_α—G_β)÷G_(max);b.PU=100(G_A—G_β)÷(A_(Aα)·G_(max))。式中G_α、G_β分别为待测结α和背景β的平均灰度,G_A为含有α和β的A区域的平均灰度;G_(max)为检测仪器的最大灰度。A_(Aα)为α相在A区域中的面积密度。式a适于测算境界明显的粒子,式b则不论粒子境界如何,对各类样品均适合,包括组织学切片和细胞学涂片。PU值大小与反应强度成正比,PU最大值为100、理论最小值为0。对513个EMA染色的胸腹水腺癌细胞进行了测试,结果表明该法对EMA染色定量判断的灵敏度为94.2％,特异度为100％,准确度为95.6％。讨论了PU值的意义和有关对比染色问题。

免疫组化双酶双标记和组织化学复合染色方法的探讨

免疫组化双酶双标记和组织化学复合染色方法的探讨赵秀兰，孙保存，林建韶，王欣，李薇，谭郁彬随着免疫组化技术的发展，已有可能在同一张切片上标记出不同的细胞成分，若与组织化学染色相结合，则可显示更多的细胞成分，为同时观察几种细胞的分布特点、相互关系提供了新...

免疫组织化学染色常见问题及解决方法

免疫组织化学将传统形态学与传统免疫学结合起来，既可以在光镜下或电镜下观察组织或细胞的形态，实现组织或细胞定位；同时又发挥了免疫学中对特异抗原抗体定性定量的作用。随着免疫组织化学技术的发展，其在临床病理诊断和形态学研究中得作用越来越显著，如辅助诊断、指导治疗、评估预后等。但由于免疫组织化学技术是一多步骤、多环节、多因素影响的实验技术，有很多干扰因素都可能影响最终的检测结果，并造成错误的判断。

双氧水脱黑素颗粒优化免疫组织化学染色在眼球恶性黑素瘤诊断中的应用

目的探究采用双氧水去除眼球恶性黑素瘤中黑素颗粒后在免疫组织化学染色中的应用。方法收集本院2018—2021年间收治的眼球恶性黑素瘤病例10例,制作石蜡切片,采用不同浓度(3%和15%)双氧水处理,以及不同的脱黑素颗粒时间(12 h和24 h),然后进行HE染色和免疫组织化学染色检测(melan A、Ki-67、SOX10),分析不同浓度双氧水和不同作用时间对HE染色和免疫组织化学检测指标结果的影响。结果未脱黑素颗粒的HE染色和免疫组织化学染色切片中含有大量黑素颗粒,无法准确进行肿瘤良性或恶性的判读。采用3%双氧水脱黑素颗粒的HE染色和免疫组织化学染色切片中含有部分黑素颗粒,脱色不均且不彻底,细胞形态及组织结构模糊,对结果判读有一定影响。采用15%双氧水和24 h的脱黑素颗粒时间的HE染色和免疫组织化学染色切片中基本无黑素颗粒残留,染色清晰,对肿瘤的良性或恶性能够准确判读。结论高浓度双氧水长时间脱黑素颗粒的效果明显,HE染色和免疫组织化学染色结果的判读清晰且准确。

组织化学染色与免疫电镜双标记方法在检测大鼠脑干前包钦格复合体细胞色素氧化酶活性中的应用

目的研究脑干前包钦格复合体(pre-B9t C)细胞色素氧化酶(COX)的活性变化。方法采用COX的组织化学染色与pre-B9t C的标记物神经激肽1受体(NK1R)纳米金-银加强免疫组织化学染色双标法,进行pre-B9t C特定神经核团尤其是不同亚细胞结构的COX活性检测,并进行COX活性的半定量分析。结果光镜下NK1R免疫反应性(NK1R-ir)产物主要分布于pre-B9t C神经细胞膜,清晰勾勒神经元轮廓,COX组织化学染色呈棕色,弥漫表达于NK1R-ir神经元胞质及突起内。电镜下NK1R-ir金颗粒主要分布于pre-B9t C神经元胞体和树突膜内表面,胞质内也可见金颗粒标记。pre-B9t C神经元不同亚细胞结构(胞体、轴突终末、树突)线粒体的形状和分布均有不同,在胞体和轴突终末线粒体多为圆形和椭圆形,在树突则以长杆状线粒体多见,胞体线粒体多为管泡状嵴,而板层嵴线粒体以轴突终末和树突多见。轴突终末内线粒体多聚集分布,树突内线粒体多近胞膜散在分布,但在突触部位,线粒体分布密集,且局部膨大接近突触后膜,这与突触的信息传递功能需要大量ATP产生密切相关。COX活性反应产物分布于线粒体嵴上,线粒体嵴电子密度不同表明COX活性不同。轴突终末和树突线粒体COX活性明显高于胞体。结论 pre-B9t C神经元不同亚细胞结构能量代谢不同,其中轴突终末和树突线粒体COX活性明显高于胞体,尤其突触部位线粒体分布密集,且表达高COX活性。将COX组织化学技术和免疫电镜技术相结合,为检测区域性COX活性,尤其是区域内不同亚细胞结构的COX活性提供了新方法。

禽流感病毒检测免疫组织化学染色改良方法的建立

目的 本研究对如何消除禽流感病毒检测免疫组织化学染色的非特异性反应进行探讨,从而建立一种免疫组化染色的改良方法。方法 对抗原修复方法、一抗孵育条件、内源性生物素封闭条件等进行优化,并用SABC检测系统对改良法和常规法进行比较。结果 采用微波炉加热法修复抗原、一抗在37℃孵育1.5～2 h、20%的蛋清液室温封闭20 min的改良法比常规法的染色效果好,可有效消除背景干扰,阳性表达清晰,对比度高。结论 建立的改良法特异性强,可用于禽流感病毒的基础研究和临床检验。

免疫组织化学染色检测肺结核组织中的Ag85B

目的:探讨结核分枝杆菌分泌性抗原Ag85B在肺结核组织中的分布特点,初步分析其在肺结核病理学诊断中的应用价值。方法:收集医院病理科手术切除的肺结核组织标本19例,以非肺结核肺组织(肺癌切除标本正常组织断端20例)为阴性对照。通过免疫组化检测Ag85B的表达情况,并与抗酸染色进行对比。结果:Ag85B免疫组化阳性信号主要沉积在结核坏死灶及周围,分布与抗酸杆菌相关、范围更广。19例肺结核标本中,10例抗酸染色阳性,抗酸染色敏感度为52.63%(10/19);10例抗酸染色阳性的标本免疫组织化学染色全部阳性,9例抗酸染色阴性的标本中免疫组化阳性的标本有6例,免疫组化敏感度为84.21%(16/19)。20例阴性对照组中,3例免疫组化呈阳性,免疫组化特异度为85.00%(17/20)。结论:Ag85B免疫组化阳性信号表达范围比抗酸杆菌分布更广,较抗酸染色具有更高的敏感性,可作为结核确诊的一种补充手段。