采用双重免疫组织化学及免疫电镜方法可将α-平滑肌肌动蛋白定位于乳腺癌间质新生血管周细胞

目的 观察周细胞形态特点 ,并寻找其标记物。方法 应用双重免疫组织化学及免疫电镜方法 ,观察α -平滑肌肌动蛋白 (α -SMA)在周细胞内的表达情况。结果 免疫组织化学染色发现α -SMA在周细胞内表达 ,而在内皮细胞内不表达 ;免疫电镜可见α-SMA仅定位于周细胞。结论 免疫组织化学方法和免疫电镜方法是一种有效的实验手段 。

运用双重免疫组织化学方法研究骨性关节炎关节软骨细胞的胶原表型

目的 :研究原发性骨性关节炎 (osteoarthritis,OA)关节软骨中软骨细胞的胶原表型。方法 :运用抗Ⅱ型、Ⅲ型及Ⅹ型胶原单克隆抗体 ,对OA关节软骨标本分别进行Ⅹ型和Ⅱ型胶原以及Ⅹ型和Ⅲ型胶原双重免疫组织化学染色。结果 :在原发性OA关节软骨的深层和钙化层软骨细胞中 ,存在Ⅹ型和Ⅱ型胶原以及Ⅹ型和Ⅲ型胶原的共同分布现象。同一个簇聚软骨细胞团中不同细胞的胶原表型也各不相同。结论 :原发性OA关节软骨细胞在疾病环境中发生进一步分化 ,在不同的分化阶段细胞的胶原表型不同 ,其中早期肥大软骨细胞能够同时合成Ⅹ型和Ⅱ型胶原以及Ⅹ型和Ⅲ型胶原。

细胞涂片免疫组化双重染色技术的探讨

目的：在同一张细胞涂片上同时检测EDI和PCNA两种抗原，观察增生的巨噬细胞增生的情况和统计增生的巨噬细胞数量。方法：采用免疫组化LSAB双重染色技术检测细胞涂片中细胞的EDI和PCNA两种抗原，利用微波／高压加热的方法，灭活第一重染色中所有抗体的活性，避免双重染色中引起的交叉反应。结果：增生的巨噬细胞同时表达EDI和PCNA两种抗原，结果分别呈棕色和蓝色。结论：在一张细胞涂片上同时观察同一个细胞中EDI和PCNA抗原的表达，比采用两张涂片分别检测EDI和PCNA抗原，观察染色结果更加方便，能够准确地观察到增生的巨噬细胞，获得的统计结果也更客观和准确。

双重免疫组化染色检测DLK1与PCNA在肝细胞癌组织中的表达及临床意义

目的探讨双重免疫染色检测DLK1蛋白与增殖细胞核抗原(PCNA)在不同分化程度肝细胞癌(HCC)中的表达及临床意义。方法用双重免疫组化染色方法检测HCC组织(45例)、癌周肝硬化组织(20例)及肝局灶性结节性增生(FNH)组织(20例)中DLK1及PCNA的表达。结果 DLK1与PCNA在HCC组、肝硬化组织及FNH组织中表达率均为100%;两者阳性表达水平与HCC恶性程度呈正相关。DLK1与PCNA在癌周肝硬化组及FNH组中的表达水平均较HCC组低(P<0.05),DLK1/PCNA在FNH组中的表达水平较癌周组织低(P<0.05)。结论DLK1与PCNA的表达均与HCC的恶性程度呈正相关,同时高阳性表达DLK1与PCNA的HCC恶性程度更高,双重免疫组化染色检测DLK1与PCNA的表达更能体现肿瘤的恶性程度。

免疫组织化学技术的某些进展

随着免疫组织化学技术的广泛应用,最近几年来又出现了一些新的制剂,标记技术及染色方法,进一步提高了该技术的特异性,灵敏性及定位精确性。本文仅就其中一些主要者作一简介。一、有关制剂(一)单克隆抗体单克隆抗体是指每个B细胞纯系产生的抗体。每个B细胞表面的抗原受体只特异地识别一种抗原决定簇,因此产生的抗体非常纯。这些以一株单细胞系产生的抗体称为单克隆抗体,简称McAb。

第二届全国标记技术学术讨论会概况

由中国微生物学会病毒学会及医学微生物免疫学会、中华医学会微生物免疫学会联合主办的第二届全国标记技术学术讨论会于1989年5月17～20日在山东济南召开。来自全国24个省市、自治区的309名代表(包括化学、生化、免疫、微生物及临床等专业)出席了会议。会议共收到论文268篇(综述14篇、论文160篇、刊题论文94篇),其中大会报告13箱,分组发言126篇,代表们就免疫荧光和发光、免疫酶、免疫酶及颗粒吸附,DNA探针及放免。

NKT细胞在肝癌组织中的分布状况与肝癌局部免疫的研究

目的 :通过双重免疫组织化学的方法来研究NKT细胞在肝癌组织、正常肝脏组织以及其它肝脏病变组织中的分布情况 ,探讨NKT细胞的数量分布变化与肝癌组织局部微环境免疫状态的关系。方法 :采用双重免疫组化方法对上述组织石蜡切片染色 ,随机选取视野计数NKT细胞 ,然后统计分析。结果 :①侵袭性高或有转移 (有癌栓 )的HCC组NKT细胞数低于侵袭性低或无转移 (无癌栓 )的HCC组 :P <0 .0 5 (P =0 .0 38) ;②正常肝组织组NKT细胞数与肝癌癌周组织组NKT细胞数则无统计学差异 :P >0 .0 5 (P =0 .731) ;③在肝癌组中 ,有包膜组和无包膜组两组数据在统计学上没有明显差异 :P >0 .0 5 (P =0 .6 2 0 ) ;④小肝癌组和大 (巨大 )肝癌组两组数据在统计学上有显著差异 :P <0 .0 5 (P =0 .0 2 6 ) ;⑤以术前AFP阴、阳性 (2 0 μg /L为标准 ) ,术前AFP阴性组和术前AFP阳性组两组数据在统计学上没有明显差异 :P >0 .0 5 (P =0 .6 18)。结论 :①NKT细胞数与肝癌侵袭、转移性呈负相关 ,提示NKT细胞对肝癌的侵袭、转移有抑制作用 ;②正常肝组织 (供体肝组织 )及肝脏良性病变周围肝组织中NKT细胞的数量分布与原发性肝癌癌周组织中NKT细胞的数量分布没有明显的统计学差异 ,说明肝组织中NKT细胞的数量可能与原发性肝癌的易感性无关 ;

乳腺导管癌中微浸润癌细胞免疫病理学分析

目的探讨乳腺导管癌中微浸润癌细胞的免疫学性质和病理形态学特征。方法采用双重免疫组织化学染色的方法,对50例微浸润乳腺导管癌进行肿瘤侵袭、抑制凋亡等相关因子分别与SMA的双重染色,阐述微浸润癌细胞的免疫学及病理形态特征。结果微浸润癌细胞缺乏肿瘤侵袭相关指标MMP-9、TIMP-1的表达,也缺乏抑癌基因p16和抑制凋亡因子Bcl-2的表达,但它们却高表达原癌基因c-erb-B2。微浸润癌细胞大多呈浓缩、深染的卵圆形、不规则形或长梭形核,排列密集,呈锥形或舌形侵入基质。结论微浸润癌细胞的免疫学和病理形态学特征,提示这部分癌细胞为分化程度较低的原始或幼稚细胞,并具有较强的潜在增殖和浸润能力,为乳腺微浸润癌的早期诊断提供免疫学和形态学依据。

白细胞介素-2受体和糖皮质激素受体在脑神经元内共存

目的 研究白细胞介素 2受体和糖皮质激素受体在大鼠脑内的分布及两者共存的可能性。 方法 免疫细胞化学双重标记技术 (PAP法与ABC法相结合 ) ,分别采用DAB和DBHC(二盐酸联苯胺 )呈色 ,前者为棕黄色 ,后者为深蓝色。 结果 白细胞介素 2受体和糖皮质激系受体广泛分布于大脑皮质、海马、下丘脑 ,脑干大部分运动性和感觉性核团。白细胞介素 2受体免疫反应产物位于细胞膜上 ;糖皮质激素受体免疫反应产物位于细胞核和胞浆内。脑内有较多的白细胞介素 2受体和糖皮质激素受体共存的神经元 ,它们在阳性神经元总数中所占的比例在不同的脑区有所不同。在大脑皮质约占 5 0 % ,在展神经核约占 30 %。 结论 免疫细胞因子和激素可通过各自的受体作用于同一个脑神经元而调节神经元的功能。本实验在受体水平为“免疫 神经 内分泌调节网络”

细胞间邻近标记技术在慢性髓性白血病中的应用及其临床意义

目的探讨应用化学生物学邻近标记技术(Interaction-dependent fucosyl-biotinylation,FucoID),捕获血液恶性肿瘤慢性髓性白血病(CML)中肿瘤抗原特异反应性T细胞及其临床价值。方法通过流式细胞术及荧光显微镜成像确定FucoID适用于血液肿瘤CML的实验条件。选取14例CML慢性期患者初诊样本,利用流式细胞术及FucoID对其外周血样本进行肿瘤细胞与T细胞的分离、共孵育与邻近标记,实现肿瘤抗原特异反应性T细胞的表型鉴定,并探讨FucoID在CML中的诊治价值。结果研究首先确定了FucoID适用于血液肿瘤CML的实验条件。患者CD3^(+)T细胞比例为(8.96±6.47)%,远低于正常供者的(38.89±22.62)%。患者间肿瘤抗原特异反应性T细胞占比存在差异[(3.34±4.49)%]。CD4^(+)T细胞中肿瘤抗原特异反应性T细胞比例为(3.95±1.72)%,普遍低于CD8^(+)T细胞中肿瘤抗原特异反应性T细胞比例[(5.68±2.18)%]。相比肿瘤抗原非反应性T细胞,肿瘤抗原特异反应性T细胞中高度富集CCR7^(-)CD45RA^(-)效应记忆性T细胞以及CCR7^(-)CD45RA^(+)效应性T细胞。患者肿瘤免疫反应性强度与其外周血中WBC及HGB水平显著相关(P值均<0.05),与其他临床基线特征无相关性。结论FucoID结合流式细胞术可快速鉴定及分离CML中肿瘤抗原特异反应性T细胞,该方法在CML中的成功应用提示其在血液肿瘤领域具有潜在的临床应用价值。

免疫组织化学细胞角蛋白与弹力纤维双重染色在评估肺癌侵犯胸膜中的应用

1988年Hammer首先建议用肿瘤是否突破脏层胸膜弹力纤维层作为肿瘤是否侵犯胸膜的依据，之后越来越多的研究表明，弹力纤维染色是一种帮助判断肺癌胸膜侵犯与否的重要病理技术手段。Travis等直接建议以新版Hammer分级作为评估脏层胸膜浸润的病理学依据，并推荐当HE难以判断时加做弹力纤维染色帮助判断。但在部分病例的实际应用中，由于传统弹力纤维染色中的肿瘤细胞与胸膜中增生的纤维背景较难区分，故有时对于肿瘤是否突破弹力纤维层的判断仍然存在争议。

EpCAM^(high)/CD44^+结直肠癌干细胞的形态特征及分布

背景:肿瘤干细胞已成为生命科学研究领域的热点问题,EpCAMhigh/CD44+结直肠癌干细胞的发现使对肿瘤干细胞形态特征及分布的观察成为可能。目的:观察结直肠癌干细胞数量、位置、分布方式及苏木精-伊红染色形态。设计、时间及地点:观察性实验,于2008-03/08在解放军兰州军区兰州总医院病理科完成。材料:67例结直肠癌石蜡包埋标本取自解放军兰州军区总医院病理2005/2007外检档案。所有标本术前均未行放化疗。患者中男27例,女40例,年龄29~90岁。方法:根据结直肠癌干细胞特异性表面标记EpCAM和CD44,标记石蜡包埋结直肠癌标本中的肿瘤干细胞,应用常规苏木精-伊红染色、免疫组织化学染色及免疫组织化学双重染色方法,定位EpCAM和CD44双阳性细胞,并在苏木精-伊红染色切片的对应位置上观察其形态特征。主要观察指标:EpCAM和CD44双阳性细胞的数量、位置、分布方式及苏木精-伊红染色形态。结果:双阳性细胞的数量占肿瘤细胞的0.1%~30.0%,它们沿腺管样结构的基底侧呈局灶状或散在分布;细胞呈卵圆形或立方状,胞浆稀少,胞核大小较一致,均质深染,呈卵圆形或高柱状;且其数量与结直肠癌的分化程度呈负相关,分化越低,数量越多。结论:肿瘤干细胞是肿瘤发生发展、转移、复发及耐药的根源,观察结直肠癌干细胞的数量、位置、分布方式、苏木精-伊红染色形态,并分析其与结直肠癌病理参数的关系,可为结直肠癌的病理诊断和分期、预后评估及临床治疗提供参考。

白萝卜提取物促胃动力作用中Cajal间质细胞与P物质的变化

目的探讨白萝卜提取物(raphanus sativus lextract,Ecr)通过Cajal间质细胞促胃肠动力作用机制。方法40只SD大鼠随机分为A(Ecr)组、B(0.9%氯化钠对照)组分别灌服等体积Ecr和0.9%氯化钠,1h后用双重免疫荧光组织化学标记的方法观察胃电起搏区Cajal间质细胞(interstitial cells of Cajal,ICC)与P物质(SP)阳性神经及产物表达的变化。结果肌间神经丛中ICC与SP阳性神经呈网络样分布,二者紧密毗邻;肌间神经丛及肌层内与ICC结合的SP阳性神经产物表达明显增加(P<0.01)。结论白萝卜提取物的促胃肠动力作用可能与胃体ICC上结合的SP阳性神经产物表达增高有密切关系。

膀胱移行细胞癌p16缺失及其蛋白表达意义

目的 了解膀胱移行细胞癌中抑癌基因 p1 6缺失及其蛋白表达情况。方法 应用双重PCR和免疫组化 S- P法对 31例膀胱移行细胞癌组织分别进行缺失和突变检测。结果 发现有 7例存在 p1 6基因的缺失 ,缺失率为 2 2 .6%。其中有 1例外显子 1缺失 ,有 5例外显子 2缺失 ,1、2外显子共缺失的有 1例。p1 6蛋白阴性率为 38.7%。结论 抑癌基因 p1 6的变异及其蛋白的不表达与膀胱移行细胞癌的发生有一定关系。

组织芯片观察CD44^＋/CD166^＋结直肠癌干细胞的形态及分布

背景:越来越多的研究将CD44作为结直肠癌干细胞的一个特异性的标志物。目的:观察结直肠癌干细胞CD44+/CD166+在原发性结直肠癌组织中的数量、位置及分布方式。方法:取61份结直肠癌、10份正常肠黏膜组织及18份伴不典型增生的结直肠腺瘤标本制成42点的共3块组织芯片。结果与结论:免疫组织化学双染结果显示,正常肠黏膜中未见CD44+/CD166+细胞,在伴不典型增生腺瘤中可见极少量CD44+/CD166+细胞,结直肠癌中可见到少量CD44+/CD166+双阳性细胞。双阳性细胞主要分布在结直肠癌腺管基底侧,呈灶状或散在分布;细胞呈立方形,胞浆稀少,胞核规则,呈卵圆形或高柱状,随着结直肠癌分化程度的降低,数量增多,且其数量在浸润较深的癌巢中较多。提示结直肠癌干细胞的数量、位置、分布方式及其形态有助于结直肠癌的诊断及判断预后。

肉芽组织内血管生成过程中周细胞的作用

目的 :研究周细胞在肉芽组织血管生成过程中作用。方法 :采用双重免疫组织化学染色技术及形态定量分析方法对 7例患者的肉芽组织进行研究。结果 :周细胞不仅参与血管成熟过程 ,而且肉芽组织内血管新生的早期即有周细胞存在。结论 :周细胞参与肉芽组织血管生成的全过程。

结直肠腺癌组织中CD44^+/Oct4^+癌干细胞的形态及分布

背景:越来越多的证据显示CD44可作为结直肠腺癌干细胞的一个特异性的标志物,近年发现胚胎干细胞转录因子Oct4在结直肠腺癌中有表达。目的:观察CD44+/Oct4+细胞在原发性结直肠腺癌组织中的数量、位置及分布方式。方法:取108例结直肠腺癌、18例癌旁正常肠黏膜组织及18例伴不典型增生的结直肠腺瘤标本制成48点共3块组织芯片,应用免疫组织化学双重染色和苏木精-伊红染色,定位CD44+/Oct4+肿瘤细胞,观察计数并在苏木精-伊红切片的对应位置上观察其形态特征。结果与结论:免疫组织化学双重染色结果显示,癌旁正常肠黏膜中未见CD44+/Oct4+细胞,在伴不典型增生的腺瘤中可见极少量CD44+/Oct4+细胞,结直肠腺癌中可见到少量CD44+/Oct4+细胞。双阳性细胞主要分布在腺管样结构基底膜侧或共壁腺体的共壁侧,呈小灶状或散在点状分布;细胞呈卵圆形或立方状,胞浆稀少,胞核规则,均质深染,呈卵圆形或高柱状。其数量与结直肠癌分化程度呈负相关(r=-0.579,P<0.01),与肿瘤浸润深度有一定关联(r=0.236,P<0.05)。结果提示CD44+/Oct4+细胞可能是结直肠腺癌干细胞。