一种低成本、低本底的免疫细胞化学反应方法

为了探讨一种适合培养细胞的低本底、低成本免疫细胞化学方法 ,本研究将低浓度的 Triton X-10 0加入抗体稀释液和洗液中 ,观察了其对 ABC反应时的抗体和 ABC的使用浓度和反应效果的影响。结果证明 ,在抗体稀释液和洗液中加入 0 .1%Triton X-10 0可以增强细胞对抗体的通透性 ,在不减弱阳性信号的状况下使 -抗的使用浓度明显降低 ,使生物素化二抗和 ABC的使用浓度达到 1/ 10 0 0～ 1/ 40 0 0 ,并大大减弱染色本底。本研究结果提示 ,在这一稀释度明显低于目前试剂盒建议的使用浓度。在充分显示阳性信号的前提下 ,使抗体的使用浓度和量大幅度减少 。

应用微波技术对脱色后的H．E切片进行免疫组织化学反应的方法及应用

应用微波技术对脱色后的Ｈ．Ｅ切片进行免疫组织化学反应的方法及应用苏红，谷化平，熊正文，胡海霞（中国人民解放军第二五一医院病理科张家口０７５０００）在日常的病理工作中经常会遇到因组织块很小，所获得有意义的组织、细胞数太少，制成的切片很有限，或外地送检的...

不同显色方法对免疫细胞化学显色结果的影响

目的 探讨不同显色方法对免疫细胞化学实验结果的影响。方法 免疫细胞化学S P法 ,显色剂分别为 3 氨基 9 乙基咔唑 (3 amino 9 ethyl carbazole ,AEC)、二氨基联苯氨 (Diaminobenzidin ,DAB)和硫酸镍铵 DAB (Nickelammoniumsulfate DAB ,N DAB)。结果 在抗体浓度、孵育时间等条件完全相同的情况下 ,N DAB显色法灵敏度最高、反差强 ,AEC显色效果也较好 ,DAB效果最差。结论 N DAB显色敏感性较DAB高 8～ 12倍 ,特别适合于难以显示的抗原。其操作简单 ,仅需在显色时加入少量硫酸镍铵即可 ,所需抗体浓度大大降低 ,并可结合DAB或AEC进行双重标记 。

盐酸水解暴露抗原促进免疫组织化学反应的研究

盐酸水解暴露抗原促进免疫组织化学反应的研究熊正文，胡海霞，李春光，苏红，李自强，田玉旺，邓永江（张家口解放军第２５１医院病理科．张家口０７５０００，北京军区总医院病理科．北京１００７００）免疫组织化学技术已广泛应用于临床病理诊断、神经解剖、组织胚胎等...

3',5'-cAMP对不同瘤龄的艾氏腹水癌细胞内cAMP免疫荧光细胞化学反应及其磷酸二酯酶的细胞化学反应与癌细胞膜表面某些形态学变化的关系

本工作用外源性cAMP加氨茶碱对小鼠艾氏腹水癌细胞进行了多方面的研究,观察到外源性3′,5′-cAMP不仅对小鼠艾氏腹水癌细胞增殖有显著的抑制作用。在接种后第9天,看到癌细胞增殖受到抑制的同时,大多数癌细胞胞质内的cAMP免疫荧光细胞化学反应增强,癌细胞内3′,5′-cAMP磷酸二酯酶(PDE)活性受到抑制,此外,还观察到某些癌细胞表面膜上微绒毛消失或变短以及对植物凝集素的凝集反应减弱等现象,这些癌细胞的逆转表现的变化均与不同瘤龄的癌细胞有关,如经外源性cAMP处理后,cAMP-PDE活性降低出现的最早,均在接种后5~7天时最为明显,cAMP免疫荧光细胞化学反应是在接种后第9天最为显著,癌细胞表面膜上的微绒毛消失和变短的细胞比数明显增多,对植物凝集素的凝集反应减轻都是在接种后7~9天时最为显著,而cAMP对小鼠艾氏腹水癌细胞的增殖抑制作用是在接种后第9~11天最为明显。根据上述实验结果,本文讨论了外源性cAMP加氨茶碱对腹水癌细胞的抑制作用和癌细胞内cAMP荧光反应,3′,5′-cAMP-PDE活性以及癌细胞表面膜上微绒毛形态学变化的因果关系。

细胞角蛋白单克隆抗体免疫组织化学染色方法检测大肠癌淋巴结微转移的研究

目的为研究角蛋白克隆抗体免疫组织化学法在检测淋巴结微转移灶上的意义。方法采用三种角蛋白单克隆抗体AE1,AE3、AE1/AE3,对我院47例大肠癌术后患者331个淋巴结用免疫组织化学法重新检查。结果36个淋巴结存在微转移灶(11.9%),Duke'sC期患者微转移灶检出率高于Duke'B期患者(P<0.05)。随访显示有微转移灶Duke'B期病人肿瘤复发、远处扩散转移均较无微转移病人高(P<0.05)。结论即使是组织学检查结果为阴性的淋巴结,也很有存在微转移的可能性。免疫组织化学法栓测单克隆抗角蛋白抗体,可详细阐明临床分期,并可提供大肠癌治疗的指征。

免疫组织化学显色反应强度定量方法研究（Ⅱ）

免疫组织化学显色反应强度定量方法研究（Ⅱ）申洪（广州第一军医大学病理学教研室，广州５１０５１５）在前一阶段的研究中，我们提出阳性单位（ＰｏｓｉｔｉｖｅＵｎｉｔ，ＰＵ）新概念，即将排除了切片或涂片本底因素后的纯免疫组化显色反应程度按灰度图像分析为０（白...

IgG经周围进入中枢神经的途径及跨细胞转运──免疫组织化学方法的观察

将小鼠抗猪运动神经元单克隆抗体ＩｇＧ肌肉注射于大鼠，用免疫组织化学方法显示ＩｇＧ样阳性反应细胞在中枢神经系统中的分布。结果发现阳性反应细胞主要分布于脊髓前角及脑干运动核团，脊髓第Ⅷ、第Ⅹ板层和脑干网状结构的中间神经元、室管膜、下丘脑室旁核和血管及其周围的神经元或胶质细胞等处。分析可能有三种途径参与了外源性ＩｇＧ的转运，即逆行轴浆运输和跨细胞转运，跨血脑屏障，跨血脑脊液屏障。

在同一切片标本上,对豚鼠小肠内的生长抑素或生长抑素免疫反应细胞的免疫细胞化学和银染法的比较研究

Hellerstrm-Hellman(HH)银染法一直被认为是银染法中唯一能够显示生长抑素或生长抑素样免疫反应(SSLI)细胞的较好方法。本试验利用同一切片标本,在光镜水平上,通过免疫细胞化学PAP技术和HH银染法的比较研究,明显地观察到并不是所有的PAP阳性细胞能够被HH银染法着色;另一方面,某些HH银染阳性细胞都呈现为抗生长抑素免疫反应阴性。试验结果表明,HH银染法用来显示SSLI细胞并不是非常可靠的。

网状纤维染色与免疫组织化学方法在显示肿瘤细胞及间质成分中的应用

免疫组织化学技术在判断肿瘤细胞来源、分类及鉴别诊断中应用十分广泛。网状纤维作为细胞外间质成分，存在于人体各组织器官中，通过网状纤维染色观察网状纤维在肿瘤组织中的形态变化是肿瘤鉴别诊断中又一重要参与依据。应用免疫组织化学方法和网状纤维染色，对一些不同类...

免疫组织化学方法检测P16 P13 P40在颈部淋巴结转移性鳞状细胞癌鉴别诊断中的应用

临床上以颈部淋巴结包块为首发症状的患者很多。颈部转移性癌约占头颈部恶性肿瘤的5%[1]，主要分为转移性鳞状细胞癌和转移性腺癌，有相当一部分人不能完全明确原发灶，尤其是远处转移的鳞状细胞癌[2-4]，至今仍是临床诊治的难题之一。本研究用免疫组织化学染色抗体联合检测方法鉴别肺和宫颈来源的颈部转移性鳞状细胞癌。

KunLun i6800全自动化学发光免疫分析仪检测细胞因子的性能验证

目的:评估KunLun i6800全自动化学发光免疫分析仪定量检测细胞因子的性能。方法:依据相关实验室质量管理标准的规定,运用KunLun i6800全自动化学发光免疫分析仪及其配套试剂,针对白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-2受体(IL-2R)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、白细胞介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)展开定量分析,对检测系统结果在精密度、正确度、线性区间、检出限、可报告范围以及参考区间等性能维度进行评价。特别针对白细胞介素-6(IL-6)的定量检测数据结果,与参比系统进行方法学比对。结果:在对上述六种细胞因子(IL-1β、IL-2R、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α)进行定量检测时,KunLun i6800全自动化学发光免疫分析仪在精密度、正确度、线性区间、检出限、可报告范围、参考区间这些性能方面的表现,均与厂家声明以及相应标准的要求契合。该系统针对IL-6的检测结果数据与参比系统相比,二者相关系数高达R 2=0.9954,远超R 2≥0.95的标准,展现出了高度的一致性。结论:KunLun i6800全自动化学发光免疫分析仪在对上述细胞因子进行定量分析时,其检测性能与厂家声明相符,能够充分满足临床检测的要求。

化学发光微粒子免疫法检测鳞状上皮细胞癌抗原的方法学评价

目的 对化学发光微粒子免疫法检测鳞状上皮细胞癌抗原（SCC Ag）进行方法学评价及性能验证。方法 对化学发光微粒子免疫法检测鳞状上皮细胞癌抗原的不精密度、回收率、线性分析、定量可报告低限值、特异性和灵敏度、反复冻融试验以及参考范围验证等方面进行评价。结果 化学发光微粒子免疫法检测鳞状上皮细胞癌抗原低、中、高值样本批内不精密度CV%分别为3.88%、2.80%和0.69%,批间不精密度CV%分别为3.98%、3.10%和3.17%;回收率为95.77%-102.25%,平均回收率为98.89%;线性分析R2为0.9997;定量可报告低限值为0.21ng/mL,CV%为15.06%;特异性为96%,灵敏度为94%;低、中、高值样本反复冻融试验CV%分别为7.99%、2.97%和1.36%;参考范围验证的检测结果均〈1.3ng/mL。结论 化学发光微粒子免疫法检测鳞状上皮细胞癌抗原方法符合实验室要求,检测性能良好,可广泛在实验室开展应用。

膜片钳技术结合免疫组织化学方法在同一细胞的应用

我室在以往的工作中曾提出背根神经节(DRG)神经元膜可能存在有谷氨酸(Glu)自身受体。为了确证这一推论．在技术上要求能在同一细胞证明膜受体的存在，并显示出胞内台有激活该受体的神经递质。最近我们创新了一种在同一分离的DRG细胞应用全细胞膜片钳技术证明膜NMDA受体的存在，并结合免疫组织化学方法显示胞内谷氨酸样免疫反应性(Glu-LI)，从而成功地确证了大鼠DRG神经元膜存在有NMDA自身受体．应用同一方法我们还证明了SP自身受体的存在。

一种不溶血红细胞免疫荧光细胞化学检测方法的建立

目的以氯通道蛋白ClC-3为靶蛋白,建立一种不溶血的红细胞免疫荧光细胞化学检测方法。方法采集大鼠红细胞,涂片,0.5%丙烯醛/PBS固定,以不同浓度的Triton X-100/PBS(含0.1 mol/L甘氨酸)溶液透膜,用含0.05 mmol/L甘氨酸、2%BSA、0.05%NaN3的PBS溶液封闭抗原,随后孵育ClC-3的一抗和荧光标记的二抗,最后在共聚焦荧光显微镜下观察结果。结果 0.1%Triton X-100/PBS结合其他优化液处理的红细胞未出现溶血现象,共聚焦显微镜下清晰地观察到目的蛋白及其亚细胞分布情况。结论通过优化固定液、透膜液、封闭液和洗涤液,解决了常规免疫细胞化学法导致红细胞易溶血的缺点,在确保红细胞不溶血的同时成功检测到红细胞氯通道ClC-3蛋白,即成功建立了一种不溶血的红细胞免疫荧光细胞化学检测方法。

免疫磁性活化细胞分选方法优化及纯化后细胞的生物学特性检测

目的:改良常规免疫磁性活化细胞分选(MACS)的分离纯化方法,提高分选后细胞的纯度并确保细胞仍具有良好活性及功能。方法:以干细胞抗原-1(Sca-1)标记的Sca-1+造血干/祖细胞(Sca-1+HSC/HPC)为例,分别用改良后和常规MACS法分选出小鼠骨髓细胞Sca-1+细胞,流式细胞术检测两种分选方法获得Sca-1+细胞纯度;计算阳性细胞回收率;台酚蓝染色检测分选细胞存活百分率;CCK-8检测细胞增殖,混合造血祖细胞(CFU-Mix)体外培养评价分选Sca-1+细胞分化能力。结果:改良MACS法分选获得的Sca-1+细胞纯度达93%以上(常规MACS法仅为87%),阳性细胞的回收率可达73%(常规法仅为62.3%);细胞存活率、细胞增殖和CFU-Mix集落形成能力两种分选方法无明显差别。结论:改良法能明显提高细胞分选纯度及回收率,细胞活性和功能保持良好,值得各种细胞免疫磁性分选参考采用。