基于吖啶酯化学发光免疫定量分析技术建立血清IL-6水平检测方法与初步应用评价

目的基于吖啶酯化学发光免疫定量分析技术,建立一种血清白细胞介素-6(interleukin 6,IL-6)的检测方法。方法采用双抗体夹心法,分别用吖啶酯标记完整抗体和生物素标记酶切片段抗体,并与待测物IL-6形成夹心复合物,其中生物素再与链霉亲和素包被的磁性固相微粒特异反应发光,通过测量发光信号值进行定量分析;并对其标记抗体稀释缓冲液、标记抗体浓度、样本加样量等进行条件优化;对空白限(LOB)、检出限(LOD)、中间精密度、可报告范围、干扰实验、钩状(HOOK)效应等性能指标进行评价;选择145例血清样本,采用线性回归分析与罗氏电化学发光法进行方法学比对。结果成功建立一种基于吖啶酯化学发光免疫定量分析技术检测血清IL-6的方法。该方法选择MESBSA作为标记抗体稀释缓冲液,标记抗体浓度选择0.2μg/ml,样本加样量选择50μl。该方法的LOB为0.2 pg/ml,LOD为0.5 pg/ml,可报告范围为0.5~30000 pg/ml,中间精密度<5.3%。在IL-6达到200000 pg/ml浓度水平时,未出现HOOK效应现象。在三酰甘油(TG)30000μg/ml,血红蛋白(HGB)9000μg/ml,胆红素(TBIL)330μg/ml,类风湿因子(RF)1500 IU/ml浓度范围内,干扰物质对检测结果无影响。与电化学发光法测定IL-6比对,线性回归方程为Y=0.9802X-3.4879,r=0.9977,两种方法试剂测定结果呈高度相关(P<0.05)。结论建立了基于吖啶酯化学发光检测血清IL-6的方法,各项指标均符合临床应用要求,适宜在临床实验室推广应用。

SARS患者脾淋巴细胞免疫组织化学的定量分析

目的对严重急性呼吸综合征(SARS)患者脾淋巴细胞进行定量分析,为SARS的病理变化和发病机制的探讨提供证据。方法通过免疫组织化学技术对6例SARS死亡患者脾和6例意外死亡者正常脾CD3+、CD4+、CD8+T细胞及CD20+B细胞的分布进行观察,并进行图像分析。结果SARS患者脾内的脾小体及动脉周围淋巴鞘(白髓)均遭到严重损害。动脉周围淋巴鞘的数量减少90·39%;脾小体减少80%左右,有的甚至完全消失;脾红髓广泛出血坏死。红髓内的CD3+T细胞平均数较正常减少71·76%,有的甚至完全消失,CD4+T细胞和CD8+T细胞分别平均减少86%和84%。CD20+B细胞减少80%以上。结论定量分析显示,SARS死亡患者脾中T细胞和B细胞普遍严重减少,提示SARS患者免疫系统遭到严重破坏,并可能是疾病的原发性损伤。

人宫颈上皮内瘤变和浸润癌组织中树突状细胞及T细胞的免疫组织化学定量分析

目的研究人宫颈上皮内瘤变和浸润癌组织中树突状细胞和T细胞的数量、分布变化,为人宫颈癌的诊断和生物治疗提供实验依据。方法采用免疫组织化学和图像分析技术,测定人宫颈上皮内瘤变、宫颈浸润癌和正常宫颈组织中树突状细胞表型抗原CD1a、S-100及T细胞表面分化抗原CD3、CD8阳性细胞的数量、分布和表达强度。结果与人正常宫颈组织比较,宫颈上皮内瘤变中CD1+a、S-100+、CD3+、CD8+细胞数量增多(P<0.05),与组织分级呈正相关(P<0.05),抗体表达强度增高;宫颈浸润癌中4种抗体阳性细胞数量减少,与临床分期呈负相关(P<0.05),强度略有下降。结论人宫颈上皮癌前病变至浸润癌变过程中树突状细胞和T细胞数量及抗体表达强度发生变化,提示宫颈病变局部的免疫功能发生了改变。

免疫细胞化学和DNA图像定量分析在良恶性浆膜腔积液鉴别诊断中的应用

分析B72.3、Ber-EP4和Calretinin抗体组与DNA图像定量分析(DNAimagecytometry,DNA-ICM)结合在良恶性浆膜腔积液诊断和鉴别诊断中的应用价值。方法:选取109例浆膜腔积液标本做石蜡包埋细胞块切片免疫细胞化学(Immunocytochemistry,ICC)和ThinPrep薄片DNA-ICM分析。结果:109例浆膜腔积液中,最终诊断为79例癌性积液和25例良性积液,104例最终诊断病例中,B72.3、Ber-EP4和Calretinin抗体组及DNA-ICM的敏感性分别为88.6%和82.3%,两者结合敏感性高达96.2%。结论:B72.3、Ber-EP4和Calretinin抗体组与DNA-ICM结合能有效提高对癌细胞诊断的敏感性。

甲胎蛋白磁性微粒子化学发光免疫定量分析方法的建立

本文根据化学发光免疫分析法的原理建立并研制了甲胎蛋白磁性微粒子化学发光定量测定试剂盒，现将结果报道如下。

小反刍兽疫病毒H蛋白抗体化学发光免疫分析检测方法的建立

本研究旨在建立小反刍兽疫病毒H蛋白抗体的化学发光免疫分析检测方法。以H蛋白4个反应原性较好的B细胞表位串联后为检测抗原,在确定抗原包被量和血清稀释度,优化血清和酶标二抗反应时间的基础上,用ROC曲线分析确定检测临界值,建立了小反刍兽疫病毒H蛋白抗体化学发光免疫分析检测方法,然后对该方法进行敏感性、特异性和重复性评价。结果显示,建立的小反刍兽疫病毒H蛋白抗体化学发光免疫分析检测方法最佳抗原包被浓度为1.5×10^(-6)μg/孔,待检血清最佳稀释度为1∶100;血清及酶标二抗孵育时间均为10 min,检测方法的临界值为S/P=9.77%,批内及批间变异系数均小于10%;与口蹄疫、羊痘、蓝舌病及山羊传染性胸膜肺炎阳性血清不发生交叉反应;用建立的化学发光法和市售小反刍兽疫抗体cELISA试剂盒平行检测247份田间血清,两者相对符合率为94.33%,但化学发光法敏感性更高。研究结果表明,建立的小反刍兽疫病毒H蛋白抗体化学发光免疫分析方法灵敏、特异、稳定,可用于田间血清样品小反刍兽疫抗体检测。

电化学发光免疫分析法检测尿细胞角蛋白19及其在膀胱癌诊断中的应用

目的探讨电化学发光免疫分析法(ECLIA)检测尿细胞角蛋白19(CK19)对膀胱癌诊断的意义。方法应用Roche E lecsys2010电化学发光仪检测尿CK19并评价其在膀胱癌诊断中的价值。结果该方法平均回收率为98.47%;ECLIA检测尿CK19变异系数(CV)明显<放射免疫法(R IA);尿液标本于-30、0和4℃保存1个月后,测定值分别下降4.29%、10.33%和15.03%,室温保存24 h下降26.67%;99%可信区间界定厦门地区尿CK19参考值为≤3.8 ng/m l;尿CK19值3.9 ng/m l为诊断膀胱癌的最佳阀值,该阈值的诊断敏感度为92.8%,特异度为78.6%。结论ECLIA检测尿CK19重复性好;以3.9 ng/m l作阀值对膀胱癌诊断有较高的灵敏性和特异性。

肝细胞癌增殖细胞核抗原表达的图像定量分析

目的 探讨原发性肝细胞癌(简称肝癌)增殖细胞核抗原(PCNA)的表达情况及其意义.方法 采用免疫组化ABC法极测了PCNA蛋白在41例人肝癌组织和人肝癌细胞系HCC-9204的表达情况,并用图像分析仪定量分析了其表达水平与肝癌病理分级之间的关系.结果 癌旁非肿瘤性肝细胞不表达PCNA或只有微弱的表达,而各级肝癌组织的癌细胞均有不同程度的较强的PCNA表达,并且随着肝癌组织分化程度的下降PCNA表达的平均光密度和积分光密度均呈升高趋势,在不同病理分级的肝癌组织之间具有显著性差异(P<0.05).PCNA在培养的HCC-9204细胞中表达的阳性率为86.4%.结论 PCNA可作为肝癌发生和发展过程中的一个与其恶性程度密切相关的标志物,可能在肝癌细胞的增殖过程中具有重要的作用.

直接化学发光免疫分析法定量检测鳞状细胞癌抗原SCC-Ag试剂研究

目的:研制可定量检测人血清中鳞状细胞癌抗原SCC-Ag的直接化学发光免疫分析法试剂。方法:采用表面羧基修饰的磁性微球作为固相载体包被SCC-Ab1,以吖啶磺酰胺为信号标记物标记SCC Ab2;待测物SCC-Ag与试剂混合后,形成双抗体夹心复合物结合在磁珠上,清洗分离,复合物在激发液的作用下发光,相对发光强度(RLU)与样本中的SCC-Ag浓度呈正相关。结果:试剂性能分析显示,最低检出限不高于0.1 ng/mL;批内变异系数≤5%、批间变异系数≤10%;线性范围是1.2~200 ng/mL,线性相关系数R≥0.999;试剂热稳定性变化幅度≤10%、长期稳定性变化幅度≤15%;平均加样回收率98.7%;检测100例临床标本与罗氏SCC-Ag检测试剂盒对比,相关性系数为R2=0.9894。结论:该试剂具有灵敏度高、线性范围广、稳定性好、特异性高、准确度高等特点,为临床人血清鳞状细胞癌抗原SCC-Ag定量检测提供坚实的基础。

脑星形细胞肿瘤组织中内皮素-1的表达及定量分析

背景与目的:已有研究表明内皮素(endothelin-1,ET-1)可以在一些恶性肿瘤中合成、释放,并对肿瘤的发生、发展有重要的影响。本文研究ET-1在脑星形细胞瘤组织中的表达及含量与组织学分级的关系。方法:采用免疫组织化学S-P法及图像分析技术测定70例不同级别的星形细胞瘤组织中的ET-1表达的阳性率和含量。结果:ET-1普遍存在于星形细胞瘤,其阳性表达主要在胞浆内。Ⅳ级和Ⅲ级星形细胞瘤ET-1阳性率(86.67%和93.33%)与阳性细胞中的ET-1含量(0.1875±0.0227和0.1516±0.0134)都明显高于Ⅱ级(75.00%;0.1215±0.0116)和Ⅰ级星形细胞瘤(66.67%;0.1048±0.0143)及正常星形细胞(37.50%;0.0717±0.0074)(P<0.05,P<0.01)。分析表明:肿瘤分化程度越低,则ET-1的阳性率和含量越高,肿瘤分化程度越高,则ET-1的阳性率和含量越低。ET-1含量与肿瘤的分化程度呈正相关(r=0.863,P<0.01)。结论:ET-1可作为星形细胞瘤恶性生长的一个指标。

脑星形细胞肿瘤组织中内皮素-1的表达和定量分析及与预后关系的研究

目的 :研究内皮素 -1(ET -1)在脑星形细胞肿瘤组织中的表达及定量分析与预后的关系。方法 :采用免疫组织化学S -P法及细胞图像光度术 (ICM )测定 70例星形细胞瘤组织中的ET -1表达的阳性率和含量。结果 :ET -1普遍存在于星形细胞瘤 ,其阳性表达主要在胞浆内。Ⅳ级和Ⅲ级星形细胞瘤ET -1阳性率与阳性细胞中的ET -1含量都明显高于Ⅱ级和Ⅰ级星形细胞瘤及正常星形细胞 (P <0 .0 5 ,P <0 .0 1)。表明肿瘤分化程度越低 ,ET -1的阳性率和含量越高 ,瘤分化程度越高 ,则ET -1的阳性率和含量越低。ET -1含量与肿瘤的预后呈负相关 (r =-0 .787,P <0 .0 1) ,与分级呈正相关 (r =0 .863 ,P <0 .0 1)。结论 :ET -1可作判断星形细胞瘤预后的一个检测指标。

电化学与化学发光免疫传感器与细胞膜受体原位免疫分析新方法

近年来,对免疫传感器的研制与细胞在仿生界面上的固定化技术、细胞膜受体原位免疫分析新方法的建立等进行了研究,取得如下研究进展.

糖类抗原CA72-4化学发光定量免疫分析方法的建立

目的建立糖类抗原CA72-4化学发光定量免疫测定方法。方法一株抗CA72-4单克隆抗体经微孔板固相包被与另一株酶标单克隆抗体建立双夹心反应体系,检测样品中CA72-4抗原的含量。通过与国外权威试剂盒血样测值的对比,分析该方法临床应用的可行性。结果该分析方法线性范围为0~160 U/m L,灵敏度为0.55U/m L。批内CV值为:5.49%,4.53%;批间CV值为:8.12%,7.81%;回收率为:99.74%~104.11%;与CEA,CA125,CA19-9无交叉反应;与法国Cisbio analysis公司所生产的CA72-4免放药盒血清测值对比分析后,发现两者相关性较高,并确定了本分析方法的正常范围。结论该分析方法的测定结果与参比试剂盒结果有较高符合率,可用于临床血清中CA72-4的检测。

不同显色方法对免疫细胞化学显色结果的影响

目的 探讨不同显色方法对免疫细胞化学实验结果的影响。方法 免疫细胞化学S P法 ,显色剂分别为 3 氨基 9 乙基咔唑 (3 amino 9 ethyl carbazole ,AEC)、二氨基联苯氨 (Diaminobenzidin ,DAB)和硫酸镍铵 DAB (Nickelammoniumsulfate DAB ,N DAB)。结果 在抗体浓度、孵育时间等条件完全相同的情况下 ,N DAB显色法灵敏度最高、反差强 ,AEC显色效果也较好 ,DAB效果最差。结论 N DAB显色敏感性较DAB高 8～ 12倍 ,特别适合于难以显示的抗原。其操作简单 ,仅需在显色时加入少量硫酸镍铵即可 ,所需抗体浓度大大降低 ,并可结合DAB或AEC进行双重标记 。

化学发光免疫分析法检测巨细胞病毒抗体在孕妇巨细胞病毒感染中的诊断价值

目的观察化学发光免疫分析法(ECLIA法)检测巨细胞病毒抗体(CMV-Ig M)在孕妇巨细胞病毒(CMV)感染中的诊断价值。方法 420例孕妇分别用ECLIA法、酶联免疫法(ELISA法)检测CMV-Ig M,以常规聚合酶链式反应(PCR法)检测CMV-DNA;对阳性结果行病毒分离检测,并作为金标准;比较三种方法的敏感度、特异度及阳性预测值。结果 ECLIA法、ELISA法、PCR法检测CMV的灵敏度均为100%,特异度依次为99.0%、99.5%、99.7%,阳性预测值分别为87.9%、93.5%、96.7%,三种方法差异均无统计学意义。结论 ECLIA法检测CMV-Ig M诊断孕妇CMV感染,诊断敏感性、特异性及阳性预测值高,可作为临床大样本的快速筛查检测。

化学发光法和免疫印迹法检测糖尿病自身抗体的结果分析

本文通过对化学发光酶免疫法（CLISA）与免疫印迹法（IB）检测糖尿病自身抗体的敏感性、特异性进行比较,旨在为临床提供更准确、可靠的诊断依据,以期达到临床对糖尿病的分型做出准确判断,对成人隐匿性自身免疫性糖尿病（LADA）做出准确预测,即时干预,合理治疗,以减少胰岛β细胞的进一步破坏。

免疫组织化学法与流式细胞术在非小细胞肺癌骨髓微转移检测中的效果

目的免疫组织化学法和流式细胞术检测非小细胞肺癌骨髓微转移状况的差异比较。方法选取2009年5月至2011年3月我院手术治疗的非小细胞肺癌160例，术前没有经历化疗及放疗，术中抽取肋骨骨髓，分别应用免疫组织化学法和流式细胞技术检测骨髓中阳性细胞表达率。结果160例非小细胞肺癌患者免疫组化检测骨髓转移阳性率为30．0％（48例），流式细胞术检测骨髓转移阳性率为34．4％（55例），112例免疫组化检查阴性的患者中，流式细胞术检测发现12例患者骨髓中存在微转移；而48例免疫组化检查阳性的患者中，有5例流式细胞术检测为阴性。结论流式细胞术和免疫组化技术都可检测非小细胞肺癌骨髓微转移，流式细胞技术有着更高的敏感性和检测效率。

免疫组织化学法与酶联免疫法对胰岛细胞抗体检测的比较

目的 比较免疫组织化学法与酶联免疫吸附法 (ELISA)测定胰岛细胞抗体 (ICA)的阳性率。 方法 对同一批 2 0 0份血清标本 ,在北京、上海两地三个三甲医院内分泌实验室分别采用免疫组织化学技术POPA法、ABC法及ELISA法检测ICA。 结果 免疫组织化学POPA法与ABC法检测ICA的阳性率和阴性率基本一致 ,而用ELISA法检测的阳性率低 ,假阳性率、假阴性率高。 结论 与ELISA法相比 ,用免疫组织化学法测定ICA的准确性高 ,重复性好 ,宜推广应用于临床。

蛋白质定量分析的进展

蛋白质是生命的起源 ,蛋白质的定量分析涉及到生产与科研的各领域和与生命有关的许多行业。