大鼠实验性胃溃疡自愈期间胰岛胃泌素和生长抑素细胞的免疫组织化学研究

目的 探讨大鼠实验性胃溃疡自愈期间 ,胰岛胃泌素免疫反应细胞 (gastrin ,G)和生长抑素细胞(somatostatin ,SSorD)的变化。 方法 免疫组织化学ABC技术。 结果 大部分G细胞免疫反应深浅不一 ;溃疡术后 4、10d ,胰岛G细胞面数密度增高 ,与正常或盐水组相比P <0 0 5。D细胞面数密度于 4d增加 ,P <0 0 5。 结论 成年大鼠胰岛细胞呈胃泌素免疫反应阳性 ;胰岛G细胞和D细胞可能以内分泌或旁分泌调节的途径间接或直接参与大鼠实验性胃溃疡修复的过程。

大鼠实验性脾虚证胃粘膜内分泌细胞变化的免疫组织化学研究

用正常成年雄性Wistar大鼠53只,体重100～150g,分为正常对照组、实验性脾虚组、自然恢复组和四君子汤治疗组。取胃,固定于Bouin液。制成石蜡切片,进行(1)HE染色;(2)免疫组织化学染色,按Sternberger PAP法显示胃泌素细胞(G细胞)、生长抑素细胞(D细胞)和5-HT细胞。根据细胞的免疫反应程度,将细胞分为强阳性、中等阳性和弱阳性三级,每例动物计数三种细胞各1,000个,并计算各级细胞占的百分比;(3)从正常对照组,脾虚组随机选择各5例动物,对D细胞和G细胞进行显微分光光度计的定量测定;(4)由四组动物随机选择各5例,进行G细胞和D细胞密度及G/D细胞比值的测定。本文的观察表明:(1)脾虚组胃粘膜未见明显的组织学变化;(2)内分泌细胞:与对照组相比,脾虚组G细胞和5-HT细胞中,弱阳性细胞增多,表明分泌活动增强;D细胞弱阳性和中等阳性细胞减少,强阳性细胞增多,表明分泌释放减弱,合成增强。与自然恢复组比较,治疗组G细胞和D细胞的分泌活动接近于对照组;5-HT细胞无明显的恢复;(3)显微分光光度计的测定结果与光镜观察一致,脾虚组G细胞胃泌素反应物的含量低于对照组,D细胞内生长抑素反应物的含量高于对照组;(4)脾虚组G细胞密度低于对照组(P<0.01),D细胞密度略高于对照组,G/D细胞比值也低于对照组(P<0.01)。本文结果提示,脾虚证这些内分泌细胞的分泌活动出现异常,可能是导致消化功能紊乱的原因之一。经四君子汤治疗后,内分泌细胞的分泌活动接近于对照组,说明此药对脾虚证有一定的治疗作用。

实验性脾虚证大鼠胰岛细胞的免疫组织化学研究

目的研究实验性脾虚证大鼠胰岛细胞胰岛素、胰岛淀粉样多肽、胰高血糖素和生长抑素分泌活动的变化，探讨中医学脾虚证发病与胰岛激素分泌活动的关系。方法用Ｗｉｓｔａｒ雄性成年大鼠２４只，分为正常对照组、实验性脾虚组、自然恢复组和中药治疗组。４组动物同时麻醉处死，取胰尾固定于Ｂｏｕｉｎ液，制成石蜡切片。用免疫组织化学法显示胰岛Ｂ细胞胰岛素和胰岛淀粉样多肽、Ａ细胞胰高血糖素和Ｄ细胞生长抑素，并用显微分光光度计对免疫染色强度进行了定量测定。结果与对照组相比，脾虚组胰岛Ｂ细胞胰岛素和Ａ细胞胰高血糖素免疫染色明显减弱，而Ｄ细胞生长抑素和Ｂ细胞胰岛淀粉样多肽免疫染色明显增强。结论上述结果提示，胰岛细胞激素分泌活动失常可能与脾虚证代谢异常有密切关系。

实验性高血压大鼠室旁核加压素分泌的免疫细胞化学研究

精氨酸加压素 (AVP)主要是由下丘脑室旁核 (PVN)和视上核 (SON)的加压素能神经元合成分泌。近年来的研究表明 ,AVP作为一种血管活性肽与高血压的发病有关。本文采用二肾一夹法制成高血压模型。应用光、电镜技术、免疫细胞化学技术和图象分析技术对实验性高血压大鼠 PVN加压素神经元进行了研究 ,并与 SON加压素神经元及正常大鼠进行比较。研究结果表明 ,实验性高血压大鼠 PVN和 SON内 AVP阳性细胞中分泌颗粒密集呈棕黄色 ,正常大鼠组染色浅谈。图象分析检测两组 PVN和 SON中 AVP阳性细胞平均灰度值。所得数据分别经统计学处理。实验组和正常组 AVP神经元在PVN有显著性差异 ;在 SON也有显著性差异。但在实验组内的 PVN和 SON之间无显著性差异 ,正常大鼠组 PVN和 SON之间亦无显著性差异。结果表明 ,实验性高血压大鼠在血压升高时 ,PVN和

红细胞标记抗体的化学发光免疫分析

用红细胞代替辣根过氧化物酶作为双抗体夹心免疫分析中第二抗体的标记物,建立了一种红细胞标记抗体的免疫化学发光测定乙型肝炎病毒表面抗原的新方法.在免疫反应完成后,结合了抗原-抗体免疫复合物的致敏红细胞在低渗溶液中溶血,释放出血红蛋白.基于血红蛋白对鲁米诺-H2O2体系化学发光具有催化作用的原理,采用化学发光法测定血红蛋白含量.测得的血红蛋白发光强度与待测抗原浓度呈线性关系.采用这种方法可检测出0.5 ng/mL的乙型肝炎病毒表面抗原.将该方法与酶联免疫吸附分析(ELISA)结合起来对乙型肝炎患者血清乙肝病毒表面抗原(HBsAg)进行检测,两者符合率均为97%,表明本法具有良好的灵敏度和特异性,可用于临床标本测试.

免疫学实验教学中小鼠腹腔巨噬细胞化学染色实验方案改革的探索

免疫学实验课是免疫学教学的重要组成部分,对于培养学生的实践能力和科研思维具有重要作用。小鼠腹腔巨噬细胞免疫细胞化学染色试验是学生需掌握的重要的免疫学实验技术之一,然而应用商品化的单克隆抗体进行检测有阳性率低、检测结果不稳定及成本高等问题。因此,我们尝试了通过自主制备多克隆抗体检测巨噬细胞的方法应用于实践教学中,取得了良好的效果。研究表明采用自制多克隆抗体能明显增加细胞阳性染色比例,且染色更加明显,利于结果观察和判断,当抗体稀释至2 000倍后仍能检测到巨噬细胞。并且抗体制备简单、来源方便,成本降低、易于推广,为在免疫学实践课中开展巨噬细胞的检测提供了必要的手段。

原位细胞凋亡的荧光、酶免疫化学法检测实验研究

用荧光法和酶免疫化学法末端转移酶介导的ｄＵＴＰ缺口末端标记（ＴＵＮＥＬ）实验分别对小鼠心肌组织、人慢性肝炎肝组织和内膜增生的小型猪血管组织进行了细胞凋亡检测。结果显示：①心肌无凋亡细胞发现，肝组织和血管内膜组织有散在的０～１２个细胞／２５倍物镜视野的细胞标记阳性（凋亡）。②酶免疫化学法ＴＵＮＥＬ实验的检测敏感度较荧光法ＴＵＮＥＬ实验的敏感度高。③过高的末端转移酶可导致假阳性的产生，对荧光法ＴＵＮＥＬ实验，末端转移酶／标记缓冲液比例应为１∶９～１９。

中药2号方促进肝细胞再生的组织化学和免疫组织化学实验研究

目的 :观察中药 2号方促进肝细胞再生的分子生物学机制。方法 :采用大鼠部分肝切除法复制肝细胞再生模型 ,用中药 2号方进行治疗 ,并与促肝细胞生长因子西药进行对比。用组织化学和免疫组织化学方法观察肝脏组织中琥珀酸脱氢酶 (SDH)、5′核苷酸酶 (5′ N )、Mg2 + ATP酶、DNA、肝糖原及增殖细胞核抗原(PCNA )的变化 ,并进行图像分析处理。结果 :中药组 SDH、DNA、肝糖原、PCNA的升高明显大于模型组。结论 :中药 2号方有明显的促进肝细胞再生的作用。

免疫组织化学标记物与乳腺细针吸取细胞学联合对诊断乳腺癌的意义

目的分析免疫组织化学标记物与乳腺细针吸取细胞学(fine needle aspiration cytology,FNAC)联合对诊断乳腺癌的意义。方法选取本院2017年3月至2019年9月收治的80例疑似乳腺癌患者作为研究对象,患者均行免疫组织化学标记物检测、FNAC检查,并以病理诊断结果作为金标准。比较单独免疫组织化学标记物检测、FNAC检查及联合诊断的乳腺癌诊断效能[准确率(accuracy,ACC)、敏感度(sensitivity,SEN)、特异度(specificity,SPE)、阳性预测值(+predictive value,+PV)、阴性预测值(-predictive value,-PV)]。结果 80例疑似乳腺癌患者,最终病理诊断结果显示,阳性患者48例,阴性患者32例;免疫组织化学标记物检测检出阳性患者41例,其中真阳性40例;FNAC检查检出阳性患者40例,其中真阳性39例;免疫组织化学标记物检测与FNAC检查联合诊断检出阳性患者49例,其中真阳性47例。免疫组织化学标记物检测联合FNAC检查诊断乳腺癌的SPE(93.75%)、+PV(95.92%)与二者单独诊断比较差异均无统计学意义;免疫组织化学标记物检测联合FNAC检查诊断乳腺癌的ACC(96.25%)、SEN(97.92%)、-PV(96.77%)均较二者单独诊断高(P<0.05)。结论免疫组织化学标记物检测与FNAC检查联合诊断可准确鉴别乳腺肿块良恶性,准确诊出乳腺癌,可降低漏诊、误诊情况,提高诊断效能。

实验性大鼠脑损伤胰岛A细胞和B细胞免疫组织化学变化

目的观察大鼠实验性脑损伤期间胰岛A、B细胞的变化。方法采用落体法制大鼠脑损伤模型,用免疫组织化学方法观察在大鼠脑损伤期间胰岛A、B细胞的变化,并对以上结果进行图像分析及统计学处理。结果与对照组相比,大鼠脑损伤后3d胰岛A细胞免疫反应明显增强(P<0.05),胰岛B细胞免疫反应明显减弱(P<0.05);脑损伤后7d、14d胰岛A细胞和B细胞免疫反应均无显著性差异(P>0.05)。结论在大鼠实验性脑损伤期间,胰岛A、B细胞可能共同参与了机体抗损伤的代谢活动,A细胞的作用更为显著。

胶体金标记法在免疫细胞化学电镜的应用

免疫细胞化学系将细胞或组织中特异的抗原抗体反应以组织化学的方法显示出来,显示荧光反应的称为荧光抗体法,显色反应的如酶标抗体法和综合各种标记抗体法基础上产生的非标记抗体过氧化物酶—抗过氧化物酶法(unlabelled antibody peroxidase-antiperoxidase method)简称PAP法。免疫组织化学电镜(简称免疫电镜)即将免疫细胞化学应用到电镜水平。在八十年代的免疫细胞化学电镜领域内.

对大鼠实验性胃溃疡期间胰岛β-EP细胞的免疫组织化学研究

成年雄性Wistar大鼠41只。分为实验性胃溃疡组和对照组,后者又分为盐水对照组和空白对照组。于胃溃疡手术后1、4、10、23d分批取胰尾.以免疫细胞化学PAP法对胃溃疡自愈期间胰岛β-EP免疫反应细胞进行研究。结果:溃疡组β-EP细胞面数密度在术后4、10d均增加,4d达最高峰.与对照相比为P<0.01,23d基本恢复正常。邻片单染显示:β-EP阳性细胞分别与部分Glu、Ins 阳性细胞重叠。本研究结果提示:胰岛β-EP细胞参与了大鼠实验性胃溃疡时期的内分泌调制。

电镜细胞化学及免疫标记检测在急性白血病诊断中的作用

目的 探讨电镜细胞化学及免疫标记检测在急性白血病诊断中的意义。方法 对临床初治急性白血病( AL)在形态学分类的基础上结合有关免疫标记的检测开展了电镜髓过氧化物酶 ( MPO)、血小板过氧化物酶 ( PPO)细胞化学的研究。结果 发现有 2例细胞学分别诊断为 L1 及 L2 的病例被重新诊断为轻微分化型急性髓系白血病 ( M0 ) ,1例疑诊为急性原巨核细胞白血病的病例通过电镜 PPO阳性得到确诊。结论 白血病细胞免疫标记的检测及电镜细胞化学对急性白血病分类中髓系特征的判断具有敏感性好。

大鼠实验性胃溃疡期间胃窦粘膜胃泌素细胞的免疫组织化学和放射自显影研究

成年雄性Wistar大鼠16只,分为实验溃疡组和对照组,后者又分为盐水组和空白组。在手术后4、6、10和21天取胃窦粘膜,经离体H-TdR掺入,用免疫组织化学和放射自显影方法观察胃泌素细胞(G细胞)的变化。正常大鼠胃窦粘膜G细胞标记指数为1.59±0.78,细胞百分率为4.27±0.27。溃疡组G细胞标记指数在手术后4天比对照组降低,10天的比对照组增高;G细胞百分率在手术后4、6、和10天低于对照组,21天的则高于对照组;经统计学处理,其中21天的G细胞百分率与4或6天的相比有显著性差异。溃疡组手术后6天的新生粘膜内出现G细胞,其数目随时间增加。6、10和21天的新生粘膜内可见少量H-TdR标记的G细胞。G细胞形状有多种,有的G细胞伸出突起,与幽门腺其他腺细胞接触。本研究结果提示,在大鼠实验性胃溃疡修复期间,G细胞可能与其他内分泌细胞共同参与了机体自然抗病活动。

2—吡啶羧酸铬对实验性糖尿病小鼠胰岛B细胞影响的免疫组织化学观察

应用免疫组织化学方法显示胰岛B细胞 ,观察了用 2—吡啶羧酸铬处理实验性糖尿病小鼠 3周后胰岛B细胞免疫组织化学变化。结果显示

大鼠实验性腺胃癌形成过程中脑垂体远侧部ACTH细胞的免疫组织化学观察

用断乳雄性 Wistar大鼠 15只 ,分为实验性胃癌组和盐水对照组。实验性胃癌组大鼠用 MNNG灌胃 ,流式细胞仪测定有异倍体 (10 0 % )后 ,断头处死动物 ,快速取出脑垂体。用免疫组织化学、图像分析和形态计量方法观察大鼠实验性腺胃癌发生过程中脑垂体远侧部 ACTH细胞的变化。结果表明 ,实验性胃癌组大鼠脑垂体远侧部 ACTH阳性细胞的面数密度增大 ,反应增强 ,与对照组相比有显著性差异 (P<0 .0 1,P<0 .0 5 )。结果提示 ,在大鼠实验性腺胃癌发生过程中 ,脑垂体远侧部 ACTH细胞可能参与了机体抗肿瘤的内分泌调节。

大鼠实验性胃溃疡期间胰岛A、B细胞免疫组织化学研究

本实验用成年雄性大鼠40只,分为溃疡实验组、盐水对照组和空白对照组3组。动物在相同条件下饲养。在手术后6、10、14及21 d,分4批取材,进行免疫组织化学染色。用Sternberger PAP法,分别显示胰高血糖素细胞(A细胞)和胰岛素细胞(B细胞),观察大鼠实验性胃溃疡期间胰岛A、B细胞的变化,并进行细胞计数,分别计算A、B细胞所占百分数。正常大鼠A细胞所占比例为23.31±1.91%(X±SD),B细胞为73.15±4.01%;而溃疡组术后10 d,A细胞比例增高达42.67±5.59%,B细胞则为57.59±4.55%。经统计学处理,A细胞比例的增高与盐水和空白对照组相比,均有高度显著性差异(P<0.01);手术后6、14 d,A细胞比例有所增加,但无显著性差异(P>0.05);21 d则基本恢复。本文结果提示,在大鼠实验性胃溃疡期间,胰岛A、B细胞共同参与了机体自然抗疾患的代谢活动,A细胞更为显著。

大鼠实验性胃溃疡自愈期间胃窦粘膜D和G细胞的免疫组织化学研究

本实验用成年雄性Wistar大鼠,分为溃疡组、盐水组和对照组。溃疡组于术后4、10、14、21天分批取胃窦组织,常规石蜡包埋,制成5μm切片。用免疫组织化学PAP法分别显示胃窦胃泌素细胞(G细胞)和生长抑素细胞(D细胞)。观察溃疡期间D和G细胞的分布和形态特点,并进行细胞计数。结果表明:溃疡术后4天,D细胞数目略增加;溃疡术后10天,D细胞数目明显增多;与空白对照组相比差异显著(P<0.05)。

大鼠实验性胃溃疡期间胰岛A、B细胞的免疫细胞化学研究

本实验共用成年雄性大鼠40只,分为溃疡组、盐水对照组和空白对照组。溃疡组在无菌条件下,将0.01ml冰醋酸注入胃粘膜下层,造成实验性胃溃疡,盐水组模拟手术,注入生理盐水0.01ml;空白组为未经处理的正常大鼠。三组动物于相同条件下饲养。术后6、10、14、21天分别取材,每批动物均包括溃疡组5只、盐水组3只和空白组2只。用免疫细胞化学PAP法,分别显示胰岛A、B细胞.

^(125)I标记反义寡核苷酸及其识别淋巴瘤细胞的实验研究

目的 探讨用1 2 5I标记免疫球蛋白重链V1家族框架区 (IgHV1FR)mRNA反义寡核苷酸(1 2 5I FR ASON)作为反义显像剂和反义治疗药物的可能性。方法 用DNA合成仪将含酪胺 (tyramine)的单体连接在 18聚体寡核苷酸的 5′端 ,再用氯胺 T法进行1 2 5I标记。用阳离子脂质体DMRIE C包裹1 2 5I ASON转导Namalwa细胞 (B淋巴瘤细胞系 )和HL 6 0细胞 (人髓系白血病细胞系 ) ,测定转导效率 ,同时比较未用脂质体情况下的转导效率。质量分数为 2 0 %聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE)测定tyramine ASON与血清保温后的稳定性。结果 标记率为 80 .7% ,放化纯为 98.7% ,2 4h放化纯仍高于 90 %。脂质体介导ASON转导Namalwa细胞的效率为 (2 6 .8± 1.5 4 ) % ,是未用脂质体的近 18倍 ,转导HL 6 0细胞的效率是 (13.6± 2 .5 4 ) % ,两组比较差异有显著性 (P <0 .0 1)。质量分数 2 0 %PAGE于2、6和 2 4h时点未见异常条带。结论 通过连接酪胺碘标记寡核苷酸法是比较成功的方法。1 2 5I FR ASON对Namalwa细胞具有较强的特异性 ,可用于淋巴瘤反义显像和反义放射治疗的研究。