一种组织块免疫细胞化学ABC法

免疫细胞化学ABC法是1981年由Hsu等首先介绍的一种高灵敏的免疫过氧化物酶程序。此后,国内外陆续有应用此法进行研究的报告,其程序是,组织块先行切片,随后切片依次入未被标记的第1抗体、生物素标记的桥抗体以及卵白素-生物素-过氧化物酶复合物(ABC)中孵育,经酶反应显示抗原存在的位置和数量,从而观察抗原在组织或细胞中的定位和分布。

不同显色方法对免疫细胞化学显色结果的影响

目的 探讨不同显色方法对免疫细胞化学实验结果的影响。方法 免疫细胞化学S P法 ,显色剂分别为 3 氨基 9 乙基咔唑 (3 amino 9 ethyl carbazole ,AEC)、二氨基联苯氨 (Diaminobenzidin ,DAB)和硫酸镍铵 DAB (Nickelammoniumsulfate DAB ,N DAB)。结果 在抗体浓度、孵育时间等条件完全相同的情况下 ,N DAB显色法灵敏度最高、反差强 ,AEC显色效果也较好 ,DAB效果最差。结论 N DAB显色敏感性较DAB高 8～ 12倍 ,特别适合于难以显示的抗原。其操作简单 ,仅需在显色时加入少量硫酸镍铵即可 ,所需抗体浓度大大降低 ,并可结合DAB或AEC进行双重标记 。

小反刍兽疫病毒H蛋白抗体化学发光免疫分析检测方法的建立

本研究旨在建立小反刍兽疫病毒H蛋白抗体的化学发光免疫分析检测方法。以H蛋白4个反应原性较好的B细胞表位串联后为检测抗原,在确定抗原包被量和血清稀释度,优化血清和酶标二抗反应时间的基础上,用ROC曲线分析确定检测临界值,建立了小反刍兽疫病毒H蛋白抗体化学发光免疫分析检测方法,然后对该方法进行敏感性、特异性和重复性评价。结果显示,建立的小反刍兽疫病毒H蛋白抗体化学发光免疫分析检测方法最佳抗原包被浓度为1.5×10^(-6)μg/孔,待检血清最佳稀释度为1∶100;血清及酶标二抗孵育时间均为10 min,检测方法的临界值为S/P=9.77%,批内及批间变异系数均小于10%;与口蹄疫、羊痘、蓝舌病及山羊传染性胸膜肺炎阳性血清不发生交叉反应;用建立的化学发光法和市售小反刍兽疫抗体cELISA试剂盒平行检测247份田间血清,两者相对符合率为94.33%,但化学发光法敏感性更高。研究结果表明,建立的小反刍兽疫病毒H蛋白抗体化学发光免疫分析方法灵敏、特异、稳定,可用于田间血清样品小反刍兽疫抗体检测。

免疫组织化学LSAB和ABC法敏感性比较

继免疫组化ABC法之后近年又出现了LSAB法(labeled streptavidin biotin method,链菌素-生物素标记法),作者用不同稀释度的第一抗体作LSAB及ABC染色,对这两种方法进行敏感性对比,结果表明:LSAB法比ABC法更为敏感。用LSAB法时,第一抗体稀释度可比ABC法高2～3倍以上,孵育时间比ABC法大大缩短,且背景清晰,是理想的具有广阔应用前景的新一代免疫酶标法。

免疫组织化学法与流式细胞术在非小细胞肺癌骨髓微转移检测中的效果

目的免疫组织化学法和流式细胞术检测非小细胞肺癌骨髓微转移状况的差异比较。方法选取2009年5月至2011年3月我院手术治疗的非小细胞肺癌160例，术前没有经历化疗及放疗，术中抽取肋骨骨髓，分别应用免疫组织化学法和流式细胞技术检测骨髓中阳性细胞表达率。结果160例非小细胞肺癌患者免疫组化检测骨髓转移阳性率为30．0％（48例），流式细胞术检测骨髓转移阳性率为34．4％（55例），112例免疫组化检查阴性的患者中，流式细胞术检测发现12例患者骨髓中存在微转移；而48例免疫组化检查阳性的患者中，有5例流式细胞术检测为阴性。结论流式细胞术和免疫组化技术都可检测非小细胞肺癌骨髓微转移，流式细胞技术有着更高的敏感性和检测效率。

免疫组织化学法与酶联免疫法对胰岛细胞抗体检测的比较

目的 比较免疫组织化学法与酶联免疫吸附法 (ELISA)测定胰岛细胞抗体 (ICA)的阳性率。 方法 对同一批 2 0 0份血清标本 ,在北京、上海两地三个三甲医院内分泌实验室分别采用免疫组织化学技术POPA法、ABC法及ELISA法检测ICA。 结果 免疫组织化学POPA法与ABC法检测ICA的阳性率和阴性率基本一致 ,而用ELISA法检测的阳性率低 ,假阳性率、假阴性率高。 结论 与ELISA法相比 ,用免疫组织化学法测定ICA的准确性高 ,重复性好 ,宜推广应用于临床。

免疫组织化学ABC法观察扁桃酸对小鼠急性弓形虫病肝脏病变的作用

目的用免疫组织化学ABC法观察扁桃酸治疗小鼠急性弓形虫病肝脏的病变,探讨扁桃酸对病变肝脏的保护作用。方法扁桃酸200mg/kg,2次/d,口服和静脉注射治疗弓形虫感染小鼠,同时设立乙胺嘧啶及扁桃酸药物对照组,治疗不同时间后取肝脏组织,常规制作病理切片,免疫组织化学ABC法常规染色。结果阳性对照组可见大量肝细胞坏死区,其内可见形态典型的弓形虫速殖子,扁桃酸治疗组仅见少量散在的黄染肝细胞,乙胺嘧啶对照组小鼠肝组织内也仅见少量散在的黄染肝细胞,但肝细胞受到明显的毒性损害。因而扁桃酸能有效地抑制弓形虫速殖子入侵肝细胞,减轻弓形虫速殖子对肝细胞的破坏程度,且扁桃酸对肝细胞的毒副作用极少。结论扁桃酸对弓形虫感染小鼠的肝脏有明显的保护作用。

脊髓后角神经降压肽和P物质的免疫细胞化学双标法研究——光镜和电镜观察

本文用PAP法在同一切片上作双重免疫染色以二氨基联苯胺DAB和二盐酸联苯胺BDHC作显色剂,对经秋水仙素处理的大鼠脊髓后角内神经降压肽(NT)和P物质(SP)的免疫反应性进行光镜和电镜研究。实验中发现,DAB与BDHC的反应产物具有明显的区别,光镜下,前者为棕色,后者为蓝色;在电镜下,DAB反应产物呈均匀,弥散的电子致密体,而BDHC反应产物呈斑块状电子致密体。这种新的而又简单的方法能在同一张超薄切片上同时显示两种抗原物质,这将有利于进一步研究两种不同的神经元之间的结构和功能关系。本研究发现,NT样免疫阳性反应胞体主要位于第Ⅱ层和Ⅲ层外部,终末位于Ⅰ—Ⅲ层。电镜下,NT阳性反应轴突终末可与未标记轴突或树突构成突触。SP样阳性反应胞体主要位于Ⅱ层,在Ⅰ、Ⅱ层有较高密度的终末。电镜下观察到存在轴(SP)—轴(SP)和轴(SP)—体(SP)突触。在双重NT染色切片上,电镜下发现阳性轴突终末能与SP轴突终末形成触或接触。本研究结果提示:脊髓后角内含NT和含SP的神经元可能参与一级感觉信息的调制过程。

电化学发光免疫分析法检测尿细胞角蛋白19及其在膀胱癌诊断中的应用

目的探讨电化学发光免疫分析法(ECLIA)检测尿细胞角蛋白19(CK19)对膀胱癌诊断的意义。方法应用Roche E lecsys2010电化学发光仪检测尿CK19并评价其在膀胱癌诊断中的价值。结果该方法平均回收率为98.47%;ECLIA检测尿CK19变异系数(CV)明显<放射免疫法(R IA);尿液标本于-30、0和4℃保存1个月后,测定值分别下降4.29%、10.33%和15.03%,室温保存24 h下降26.67%;99%可信区间界定厦门地区尿CK19参考值为≤3.8 ng/m l;尿CK19值3.9 ng/m l为诊断膀胱癌的最佳阀值,该阈值的诊断敏感度为92.8%,特异度为78.6%。结论ECLIA检测尿CK19重复性好;以3.9 ng/m l作阀值对膀胱癌诊断有较高的灵敏性和特异性。

原位细胞凋亡的荧光、酶免疫化学法检测实验研究

用荧光法和酶免疫化学法末端转移酶介导的ｄＵＴＰ缺口末端标记（ＴＵＮＥＬ）实验分别对小鼠心肌组织、人慢性肝炎肝组织和内膜增生的小型猪血管组织进行了细胞凋亡检测。结果显示：①心肌无凋亡细胞发现，肝组织和血管内膜组织有散在的０～１２个细胞／２５倍物镜视野的细胞标记阳性（凋亡）。②酶免疫化学法ＴＵＮＥＬ实验的检测敏感度较荧光法ＴＵＮＥＬ实验的敏感度高。③过高的末端转移酶可导致假阳性的产生，对荧光法ＴＵＮＥＬ实验，末端转移酶／标记缓冲液比例应为１∶９～１９。

福尔马林皮下注入引起大鼠脊髓背角表层神经元Fos蛋白和蛋白激酶Cβ亚型的共同表达 :免疫细胞化学双标法研究(英文)

目的 :研究慢性伤害性模型大鼠脊髓背角表层神经元中Fos蛋白和蛋白激酶Cβ亚型的表达间的关系。方法 :用免疫细胞化学双标技术 ,观察了大鼠一侧后脚掌注射福尔马林 1h后 ,脊髓腰段背角神经元中Fos蛋白和蛋白激酶Cβ亚型 (PKCβ)的表达及二者的共存情况。结果 :1)注射侧背角表层中有大量Fos蛋白样免疫组化染色阳性神经元出现 ,且其中一半以上同时有PKCβ样免疫反应的增强 ,而背角表层中有PKCβ样免疫反应增强的神经元中 ,只有 1/5同时有Fos蛋白样阳性反应出现 ;2 )在注射侧背角Ⅴ～Ⅶ层中也有少量Fos蛋白样阳性反应神经元出现 ,但它们都不出现PKCβ LI反应的增强。结论 :背角表层中的双标免疫阳性神经元可能与慢性伤害性输入引起的脊髓过敏状态的形成有关。

快速微波ABC法免疫组织化学技术的研究

随着免疫组织化学方法学的进展,其敏感性和特异性已得到显著提高。然而,目前常用的方法既费时又增加了非特异背景染色和脱片机会。近年来,有资料表明,微波辐社在免疫组化技术中的应用不仅克服了上述缺点,而且可获得令人满意的染色效果。作者将微波与ABC(Avidinbiotin complex)法相结合,应用多种单克隆及多克隆机体对不同类型的良恶性肿瘤进行了免疫组化标记,并与常规ABC法进行比较,以探讨该法的特异性、稳定性和实用价值。

突变特异性免疫组织化学法检测非小细胞肺癌EGFR基因突变

目的探讨应用突变特异性免疫组织化学(IHC)法检测非小细胞肺癌(NSCLC)中表皮生长因子受体(EGFR)基因突变的临床使用价值。方法随机选取94例NSCLC患者,采用突变特异性IHC法和罗氏454下一代测序系统法进行检测EGFR基因突变状态,比较两种方法的特异性和灵敏度。结果 EGFR基因突变阳性定位在肿瘤细胞质和细胞膜或细胞膜中。突变特异性IHC法检测NSCLC患者中EGFR基因突变阳性率为36.17%,其中腺癌的突变率为48.44%,鳞癌的突变率为10.00%,差异有统计学意义(P<0.05),罗氏454下一代测序系统法检测NSCLC患者中EGFR基因突变阳性率为38.30%,其中腺癌的突变率为51.56%,鳞癌的突变率为10.00%,差异有统计学意义(P<0.05)。突变特异性IHC法能够有效检测NSCLC EGFR基因突变,其结果与罗氏454下一代测序系统法具有极好的一致性(P<0.001)。结论突变特异性IHC法能够有效检测NSCLC EGFR基因突变,并且突变特异性IHC法能够与EGFR酪氨酸激酶抑制剂(TKIs)治疗快速的反应,具有耗时短、易判读、检测费用少等特点。

化学发光微粒子免疫法检测鳞状上皮细胞癌抗原的方法学评价

目的 对化学发光微粒子免疫法检测鳞状上皮细胞癌抗原（SCC Ag）进行方法学评价及性能验证。方法 对化学发光微粒子免疫法检测鳞状上皮细胞癌抗原的不精密度、回收率、线性分析、定量可报告低限值、特异性和灵敏度、反复冻融试验以及参考范围验证等方面进行评价。结果 化学发光微粒子免疫法检测鳞状上皮细胞癌抗原低、中、高值样本批内不精密度CV%分别为3.88%、2.80%和0.69%,批间不精密度CV%分别为3.98%、3.10%和3.17%;回收率为95.77%-102.25%,平均回收率为98.89%;线性分析R2为0.9997;定量可报告低限值为0.21ng/mL,CV%为15.06%;特异性为96%,灵敏度为94%;低、中、高值样本反复冻融试验CV%分别为7.99%、2.97%和1.36%;参考范围验证的检测结果均〈1.3ng/mL。结论 化学发光微粒子免疫法检测鳞状上皮细胞癌抗原方法符合实验室要求,检测性能良好,可广泛在实验室开展应用。

胶体金标记法在免疫细胞化学电镜的应用

免疫细胞化学系将细胞或组织中特异的抗原抗体反应以组织化学的方法显示出来,显示荧光反应的称为荧光抗体法,显色反应的如酶标抗体法和综合各种标记抗体法基础上产生的非标记抗体过氧化物酶—抗过氧化物酶法(unlabelled antibody peroxidase-antiperoxidase method)简称PAP法。免疫组织化学电镜(简称免疫电镜)即将免疫细胞化学应用到电镜水平。在八十年代的免疫细胞化学电镜领域内.

放射免疫洁、免疫细胞化学法检测癌胚抗原在胸水鉴别诊断中的应用

本文用放射免疫法（ＲＩＡ）测定良、恶性胸水各３０例的癌胚抗原（ＣＥＡ）的含量，并用过氧化酶—抗—过氧化酶法（ＰＡＰ法）对胸水中脱落细胞行抗ＣＥＡ染色的免疫细胞化学研究。ＲＩＡ测定恶性胸水中ＣＥＡ值为２５．１５±８．８８ｎｇ／ｍｌ，良性胸水中ＣＥＡ值为５．２４±２．１５ｎｇ／ｍｌ，有高度显著性差异（Ｐ＜０．００１）；以２０ｎｇ／ｍｌ为阳性界限，其敏感性为４０％，特异性为１００％，正确诊断率为７０％。ＰＡＰ法敏感性为７３．３％，特异性为９６．７％，正确诊断率为８５％。结果提示两法检测ＣＥＡ对良恶性胸水的鉴别诊断都有一定的实用价值，但ＰＡＰ较ＲＩＡ法敏感性高。

TP免疫细胞化学法在浆膜腔积液细胞学诊断中的应用

目的:探讨薄层细胞涂片法(TP)免疫细胞化学对浆膜腔积液中细胞学诊断的应用价值。方法:对73例浆膜腔积液进行常规HE染色,采用TP免疫细胞化学检测癌胚抗原(CEA)、上皮抗原(EA)、间皮细胞(MC)、钙结合蛋白(Cal)、角蛋白(CK)、CD56、白细胞共同抗原(LCA)、CD68等的检测。结果:42例腺癌中90.5%CEA表达阳性,95.2%EA表达阳性,4.8%MC表达阳性,4.8%Cal表达阳性。5例鳞癌中100%CK表达阳性,CEA表达阴性。2例淋巴瘤中100%LCA表达阳性,CD68表达阴性。1例小细胞癌100%CD56阳性。在23例反应性间皮细胞中,反应性间皮细胞(0/23)CEA和EA全部呈阴性表达,91.3%MC表达阳性,87.0%Cal表达阳性。CEA和EA在腺癌细胞中特异性为100%。MC和Cal在良性反应性间皮细胞中特异性为95.2%。结论:通过TP免疫细胞化学方法,选择性地联合使用数种抗体可以对浆膜腔积液中恶性肿瘤细胞与反应性间皮细胞进行诊断与鉴别诊断。

电化学与化学发光免疫传感器与细胞膜受体原位免疫分析新方法

近年来,对免疫传感器的研制与细胞在仿生界面上的固定化技术、细胞膜受体原位免疫分析新方法的建立等进行了研究,取得如下研究进展.

一种白细胞介素-6荧光免疫层析检测方法的临床评价

目的 对一种通过荧光免疫层析法检测白细胞介素-6(interleukin-6, IL-6)水平的新方法进行性能评价。方法 收集2021年12月北京协和医院疑似感染患者和体检正常人群的104份临床剩余血清样本,以飞测IL-6荧光免疫层析法(广州万孚生物技术股份有限公司,方法A)、IMMULITE1000化学发光免疫分析法(德国西门子公司,方法B)为参照,对待评价方法[荧光免疫层析法,伊诺达生物科技(太原)有限公司]检测血清IL-6的试剂等效性进行评价,同期收集39对同源配对的血浆和血清标本,评估待评价方法检测不同类型样本IL-6含量的等效性。结果 定量分析时(2份样本由于超出方法B检测上限被排除),待评价方法与方法A、方法B检测血清IL-6水平的回归方程分别为Y=-7.0950+1.1924X(R^(2)=0.9448)和Y=-2.6143+1.3072X (R^(2)=0.9391),Pearson相关系数分别为0.9720和0.9691;分别以方法A、方法B为参照时,待评价方法的Bland-Altman偏倚分别为-3.0、8.0,在医学决定水平处(7 ng/L)的预期偏倚分别为-1.44(95%CI:-5.37-2.50)ng/L和1.97(95%CI:-2.09-6.01)ng/L,95%CI均包含允许误差(±15%,-1.05-1.05 ng/L)。定性结果显示,待评价方法与方法A、方法B之间的总符合率分别为84.6%、83.7%。待评价方法对39对同源配对血浆和血清样本IL-6检测结果的一致性良好(P<0.0001),Bland-Altman偏倚分析显示,仅1个(2.6%,1/39)数据位于最大允许误差范围之外。结论 本文评价方法与目前临床应用的相同或不同原理的2种方法,对于IL-6水平的检测均具有良好的一致性和相关性,且检测结果几乎不受血清/血浆样本类型的影响,一定程度上可满足临床快速检测需求。

Envision法免疫组织化学染色研究重组人可溶性血管内皮细胞生长抑制因子的抗肿瘤活性

目的：研究重组人可溶性血管内皮细胞生长抑制因子(vascular endothelial growth inhibitor，VEGI)的抗肿瘤活性及其机制。方法：用重组人可溶性VEGI治疗荷S180肉瘤小鼠；第VIII因子相关抗原(FVIII RAg)标记肿瘤血管内皮细胞，用免疫组化Envision法检测瘤内微血管密度。结果：重组人可溶性VEGI显著抑制S180肉瘤生长，肿瘤微血管密度大大减低。结论：VEGI具有较强的抗肿瘤活性，其机制可能是通过抗新生血管形成介导的。