应用新型免疫缺陷型NCG小鼠建立患者来源急性T淋巴细胞白血病模型的研究

目的:将患者来源的急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)细胞接种于NCG小鼠,建立稳定的人类T-ALL白血病动物模型。方法:分离初诊T-ALL患者骨髓来源的白血病细胞,鉴定后经尾静脉接种于NCG小鼠。定期采用流式细胞术检测小鼠外周血中hCD45阳性的细胞比例,通过病理及免疫组化检测小鼠骨髓、肝脏、脾脏等脏器组织白血病细胞浸润情况。第一代小鼠模型建立成功后,取脾脏细胞接种于第二代小鼠,第二代小鼠模型建立成功后取脾脏细胞进一步接种于第三代小鼠,定期采用流式细胞术监测各组小鼠外周血白血病细胞生长情况,以评估此T-ALL白血病动物模型的稳定性。结果:第一代小鼠在接种d 10可在外周血中检测到hCD45阳性的白血病细胞,其后比例逐渐增高,平均第6-7周小鼠出现精神萎靡,小鼠外周血及骨髓涂片可见大量T淋巴细胞白血病细胞。小鼠脾脏明显肿大,免疫组织化学检测结果显示hCD3阳性的白血病细胞广泛浸润骨髓、肝脏、脾脏等。第二代、第三代小鼠能稳定发生白血病,平均生存期为4-5周。结论:采用T-ALL患者骨髓来源的白血病细胞,经尾静脉接种于NCG小鼠,可以成功构建患者来源的肿瘤细胞异种移植(PDTX)模型。

免疫缺陷小鼠肿瘤模型的建立及其肿瘤相关免疫机制的探讨

目的:观察不同免疫缺陷小鼠中的人肝癌细胞生长情况以及T,B淋巴细胞的免疫作用,探讨免疫缺陷小鼠肿瘤模型制作的意义。 方法:将体外培养的人肝癌细胞接种到四种免疫缺陷小鼠,分别为:B细胞缺陷的CBA/N,T细胞缺陷的Balb/c-nu,T,B细胞缺陷的SCID及免疫重建的SCID小鼠,观察其生长特点;作鼠脾细胞毒试验,测定外周血CD4^+,CD8^+数分数和荷瘤鼠血清Ig含量的变化;作肝癌细胞凝集试验。 结果:CBA/N和用BALB/c鼠外周血淋巴细胞重建的SCID(B-PBL-SCID)鼠不成瘤,nude、SCID和用CBA/N鼠外周血淋巴细重建的SCID(C-PBL-SCID)小鼠全部成瘤;SCID鼠的瘤体比裸鼠瘤体长的更快,肝内接种转移率更高、转移范围更大。接种瘤细胞的BALB/c和CBA/N鼠脾细胞对癌细胞杀伤力较强,免疫重建的SCID鼠脾细胞毒杀伤较小。接种瘤细胞的鼠CD4^+数分数都下降,CD8^+变化不大,CD4^+/CD8^+比值下降。具有B细胞的实验鼠均测得Ig在mg·L^(-1)水平,并能使癌细胞产生凝集反应。 结论:SCID鼠是建立肿瘤模型和免疫重建研究的理想小鼠;小鼠成瘤率与T细胞相关,T细胞在异种瘤移植排斥中起主要作用;B淋巴细胞及其产生的抗体在抗肿瘤中起着不可忽视的作用。

免疫重建荷人卵巢-癌严重联合免疫缺陷小鼠模型的建立

目的 :为研究卵巢癌的免疫治疗方法构建合适的动物模型。方法 :严重联合免疫缺陷 (severecombinedimmunodeficiency ,SCID)小鼠皮下接种人卵巢癌细胞系SKOV3,同时腹腔注射人脾或外周血淋巴细胞进行免疫功能重建。观察成瘤情况 ;并用ELISA法检测鼠血清中人IgG含量以及流式细胞学和ABC免疫组织化学法测定鼠脾内人T细胞表型鉴定免疫重建。结果 :免疫重建的小鼠成瘤率为 89.6 % ,免疫组化证实皮下瘤保持原细胞系特征。 3种方法检测发现用人外周血淋巴细胞免疫重建的效果优于用脾淋巴细胞。结论 :免疫重建的荷人卵巢癌

免疫缺陷大、小鼠在肿瘤学研究中的应用及实验中常见问题分析

目的:免疫缺陷大、小鼠在肿瘤学研究中发挥着越来越重要的地位,但由于其品系较多,实验者往往无从选择,本文对常用的免疫缺陷大、小鼠的特点及其应用进行分析探讨。方法:从免疫缺陷动物的分类、先天性免疫缺陷大、小鼠的特点及应用比较和肿瘤学研究中常见问题分析三个层次加以论述。结果:肿瘤学研究中应切实综合考虑各个免疫缺陷大、小鼠的特点。结论:为科研工作者使用免疫缺陷大、小鼠进行肿瘤学研究提供了有价值的参考资料。

人造血干细胞的免疫缺陷小鼠移植模型研究与应用

已有多种免疫缺陷动物被用于人造血干 /祖细胞的检测。理想的免疫缺陷动物应具有完整的免疫缺陷 ,能高效的移植人造血干 /祖细胞 ,又有足够长的寿命能适于观察。通过介绍Nude、SCID、Nod/SCID、NOD/SCID β 2mnull等一系列免疫缺陷小鼠的遗传及免疫学特点及其在造血干细胞研究中的贡献。本文综述了小鼠移植模型的发展 ,评价了免疫缺陷移植模型在造血干细胞研究中的重要性及小鼠移植模型的新进展和方向。

肺孢子菌肺炎小鼠模型建立及免疫学评价

目的构建肺孢子菌肺炎(Pneumocystis pneumonia,PCP)小鼠模型并进行免疫学评价。方法采用重度联合免疫缺陷(severe combined immunodeficiency,SCID)小鼠气管滴注肺孢子菌构建PCP模型,通过实时荧光定量PCR及肺组织六胺银染色进行病原学鉴定,通过苏木素-伊红染色评估肺组织损伤程度,通过免疫荧光染色和流式细胞术进行免疫学评价。结果模型组小鼠感染6周后,肺组织肺孢子菌rRNA拷贝数显著高于假手术组,六胺银染色可见肺孢子菌滋养体和包囊,肺组织肺泡壁增厚,肺间质增宽,大量Gr-1~+中性粒细胞CD68~+巨噬细胞浸润,中性粒细胞活化标志物髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)和巨噬细胞活化标志物一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)活化水平显著升高,肺内及肺泡灌洗液的中性粒细胞和单核细胞数量及比例显著高于对照组和假手术组。结论采用SCID小鼠进行气管滴注肺孢子菌能构建稳定的PCP小鼠模型,该模型表现出与临床相似的免疫学特征。

严重免疫缺陷小鼠皮层脑梗死模型的制作

目的介绍严重免疫缺陷(SCID)小鼠皮层脑梗死模型的制作和相对梗死体积测量计算方法.方法 SCID小鼠嗅束外缘外侧1～2 mm范围内电凝并切断左侧大脑中动脉,术后24 h麻醉后经心脏灌注碳素墨汁染色以及取脑TTC染色进行大体观察;术后1个月经心脏灌注固定后取脑,中线部分处左侧皮层宽度除以右侧皮层宽度得出皮层梗死宽度指数(CWI)作为相对梗死体积的观察值.结果模型制作成功率达到90%,梗死部位固定在左侧大脑皮层.SCID小鼠的CWI为0.34±0.03,变异系数为8.8%.结论使用SCID小鼠制作的皮层脑梗死模型有很高的成功率和稳定性.CWI作为梗死体积的观察指标,测量方便,变异小.

人肺癌不同程度免疫缺陷小鼠的移植及其高转移模型的建立

将不同转移特性的人肺巨细胞癌PLA－801C、PLA－801D、PLA－801DL及人肺腺癌Anip973四株裸鼠皮下移植瘤作为瘤源，分别移植于60Co－γ辐射裸鼠、单纯脾切除或复合60Co－γ辐射脾切除探鼠、SCID小鼠．观察移植瘤转移情况。结果表明：脾切除或复合60Co－γ脾切除裸鼠更有利于移植瘤转移表型表达，在裸鼠及SCID小鼠体内未发现转移的PLA－801C移植瘤在脾切除裸鼠出现淋巴结转移，提示高转移瘤株与低转移瘤株是一个相对概念，肿瘤转移表型的表达是肿瘤与宿主相互作用的结果。

两种免疫缺陷动物人胃癌原位移植模型的肿瘤生物学特性研究

目的探讨裸小鼠和SCID小鼠两种免疫缺陷动物人胃癌原位移植后肿瘤生长和转移等生物学特性的差异。方法将MKN-45细胞株接种至裸小鼠皮下,成瘤后采用组织学完整的组织块移植于裸小鼠和SCID小鼠胃壁建立原位移植模型,观察所建模型的原位成瘤率、移植瘤生长、侵袭和转移情况。结果①两种免疫缺陷动物的原位成瘤率都为100%;②裸小鼠原位移植瘤平均体积2884±1337mm3,腹腔淋巴结、肝、肺、膈转移率分别为67%、83%、33%和8%;③SCID小鼠原位移植瘤平均体积4582±1326 mm3(P<0.05),肝转移率90%(P>0.05),与裸小鼠较为接近, 腹腔淋巴结转移率90%,肺和膈转移率分别为100%(P<0.01)和60%(P<0.05)。结论证明应用T、B细胞联合免疫缺陷的SCID小鼠较裸小鼠更适用于建立胃癌的原位移植模型。

阿霉素载药微球在免疫缺陷大鼠肝脏原位肿瘤组织内缓释作用与长效抗肿瘤活性研究

目的:建立免疫缺陷大鼠肝脏原位肿瘤模型,以阿霉素为模型药物,在肿瘤组织注射吸附有阿霉素的载药微球,建立肿瘤组织内抗肿瘤药物缓释与长效作用的研究方法。方法:利用MHCC-97H高侵袭肝细胞癌细胞系在免疫缺陷裸鼠皮下成瘤后,解剖瘤块并切割,种植于免疫缺陷大鼠肝脏原位;进行开腹给药,将阿霉素载药微球精准注射进大鼠肝脏原位肿瘤组织中;收集大鼠血液、肿瘤组织标本等,检测药物在大鼠体内特别是肿瘤组织内的留存情况,最后进行PET/CT小动物活体成像,确定阿霉素载药微球在免疫缺陷大鼠肝脏原位肿瘤组织内缓释作用与长效抗肿瘤活性。结果:通过大鼠肝脏原位接种肝细胞癌瘤块可建立免疫缺陷大鼠肝脏原位肿瘤模型;使用阿霉素载药微球对病灶进行精准给药可实现阿霉素载药微球在体内的缓释作用;索拉非尼(Sorafenib)联用阿霉素载药微球可更显著地抑制大鼠肝脏原位肿瘤的生长。结论:建立了免疫缺陷大鼠肝脏原位肿瘤模型,建立了肿瘤组织内抗肿瘤药物缓释与长效作用的研究方法。

人和动物肿瘤移植于免疫缺陷和正常小鼠脾内后肝转移形成及其机制探讨

为了探讨肝转移形成机制和生物学特性,用人类鼻咽癌(CNE—2Z)和小鼠子宫颈癌(U14)分别在裸鼠和615近交系小鼠脾内移植。结果人类鼻咽癌脾内移植后43—50天有8/10例(80％)在脾一端形成瘤结节的同时肝内也形成转移瘤,其中4例合并肺转移;小鼠子宫颈癌在615小鼠脾内移植后,13—14天处死,结果1和3天切除原发瘤,分别有11％和63％发生了肝转移,而未切除原发瘤有73％发生肝转移。同时有程度不等的肺和淋巴结转移。结果表明凡有足够的癌细胞接种到脾内均可发生原发瘤,继而沿血流系统进入肝脏,在肝内形成转移瘤。

严重联合免疫缺陷SCID小鼠在肿瘤研究中的应用

严重联合免疫缺陷ＳＣＩＤ小鼠在肿瘤研究中的应用张晓娟，综述，蔡有余，审校（中国医学科学院，中国协和医科大学实验动物研究所，北京）１９８３年，美国学者Ｇ．Ｃ．Ｂｏｓｍａ及同事首次报道具有先天性Ｔ．Ｂ淋巴细胞功能缺乏的Ｓｃｉｄ小鼠［１，２］．此缺陷是由于...

构建临床癌症研究相关的人源肿瘤异种移植模型的进展

人源肿瘤异种移植(patient-derived tumor xenograft, PDX)模型是从癌症患者手术切除肿瘤组织,随后移植到免疫缺陷小鼠体内,从而更好地保留了肿瘤的异质性。这是一种重要的转化医学研究方法,特别是在推动精准医学方面,这种方法已经崭露头角。本文从时间维度阐述了PDX模型在各个阶段的发展。

恶性疟疾的免疫缺陷小鼠模型研究进展

由于恶性疟原虫的宿主特异性,人们很难在小动物体内进行恶性疟疾红细胞内期的研究,这已成为制约该领域发展的一大难题。免疫缺陷小鼠以其体液免疫或/和细胞免疫缺陷的特点,除了在肿瘤学、免疫学、毒理学、感染性疾病等领域的基础性研究中被广泛应用外,也被用于对疟原虫无性生殖期的研究。本文将针对恶性疟原虫红细胞内期的免疫缺陷小鼠模型的研究进展综述如下。

免疫缺陷大鼠模型的研究进展

免疫缺陷动物模型是指通过筛选自发突变或者基因工程改造建立的缺失一种或多种免疫系统组分,并用于生物医学研究的动物模型。免疫缺陷小鼠模型发展较为成熟,为人源化、患者来源异种移植(patient-derived xenograft,PDX)、干细胞移植以及传染性疾病等研究提供了良好的工具。与小鼠相比,大鼠具有体型更大,代谢和生理与人更接近,更易进行手术操作、样本获取,以及长期应用于临床前毒理和药理的评估等优势。因此,近年来出现了各种免疫缺陷大鼠模型。文章通过动物模型之间的比较,着重综述了免疫缺陷大鼠模型的最新进展,并展望其在干细胞研究和抗肿瘤治疗中的应用前景。

评价肿瘤疫苗免疫原性的新型人免疫系统小鼠模型

人免疫系统(human immune system,HIS)小鼠大都用于评价肿瘤疫苗诱导细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)效应的能力,却不能准确反映肿瘤疫苗诱导体液免疫应答的能力。本研究利用密度梯度离心法分离人外周血单核细胞,与体外诱导分化的同源树突状细胞(dendritic cells,DCs)共移植到NCG小鼠中从而建立DC-HIS小鼠模型。在DC-HIS小鼠中,共移植的抗原递呈细胞(HLA-DR^+CD11c^+)能定植于模型小鼠脾脏;DCs共移植也显著提高了激活的人CD4^+ T/CD8^+ T细胞和人B细胞的比例,提示DCs-HIS小鼠能较好的模拟人体的免疫应答情况。利用所构建的DCs-HIS小鼠评价靶向HER2蛋白疫苗(NitraTh-HER2)的免疫原性,结果显示,NitraTh-HER2疫苗能够诱导HER2特异性人IgG抗体的产生,并具有显著的抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity,ADCC),靶细胞SK-BR-3的裂解率达到47.1%;NitraTh-HER2疫苗能够产生抗原特异性的CTL效应,靶细胞SK-BR-3的裂解率达到14.6%。研究结果提示,DC-HIS小鼠模型为预测人类肿瘤疫苗的免疫原性提供了有效的方法。

可移植性鼠骨肉瘤肿瘤模型的建立

目的建立快速简便的有细胞免疫力的鼠骨肉瘤肿瘤模型。方法取含10×106个对数生长期的UMR106骨肉瘤细胞的混悬液0.5ml,注射至SD大鼠前侧腋窝皮下,或取含5×106个对数生长期的LM8骨肉瘤细胞的混悬液0.3ml,注射至C3h雄性小鼠前侧腋窝皮下。密切观察其生长情况。2～3周时切除肿块,常规病理活检。结果SD大鼠在7～10天时可见明显肿块,3周时可形成1.5cm×1.5cm大小的肿块,肿瘤生成率50%;C3h雄性小鼠在第5天时可见明显肿块,2周时可形成1.0cm×1.0cm大小的肿块,肿瘤生成率100%。肿块经病理检查均证实为骨肉瘤组织。结论种植骨肉瘤细胞LM8于C3h雄性小鼠,可以快速、简便、非常可靠地建立有细胞免疫力的鼠骨肉瘤肿瘤模型。

4-1BBL-B7-H3基因对免疫重建重症联合免疫缺陷荷瘤鼠的抑瘤作用

目的通过建立人免疫重建重症联合免疫缺陷(SCID)荷瘤鼠嵌合模型来探讨4-1BBL-B7-H3基因在非特异性抗肿瘤免疫中的作用。方法将40只SCID鼠随机分为5组,A组(对照组)行免疫重建加注射Tca8113细胞;B组(Ad4-1BBL-B7-H3组)行免疫重建加注射含有人4-1BBL-B7-H3基因腺病毒转染的Tca8113细胞;C组(空载组)行免疫重建加注射含有空载体腺病毒转染的Tca8113细胞;D组(非免疫重建组)不给予小鼠免疫重建,注射Tca8113细胞;E组(非肿瘤组)行免疫重建加注射PBS。每周定期测量肿瘤体积;酶联免疫吸附法检测人IgG蛋白含量;流式细胞仪检测外周血中人CD3+、CD56+淋巴细胞比例;免疫组织化学法观察自然杀伤细胞2族成员D(NKG2D)和Toll样受体2(TLR2)在肿瘤中的表达;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测4-1BBL-B7-H3 mRNA的表达,实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测主要组织相容性复合体1类相关分子(M1C)A、B及TLR2的表达。结果 1)B组小鼠肿瘤体积最小(P<0.05);2)A、B、C、E组小鼠外周血中检测到人IgG、CD3+、CD56+淋巴细胞,B组淋巴细胞比例高于A、C和E组(P<0.05);3)B组NKG2D和TLR2的表达较其余各组明显增强;4)人4-1BBL-B7-H3基因在B组小鼠肿瘤中稳定表达;5)B组M1CA、M1CB和TLR2的表达高于A、C、D组(P<0.05)。结论 4-1BBL-B7-H3基因在肿瘤组织中的高表达能成功诱导人CD3+、CD56+细胞增殖,直接或间接活化TLR2,上调NKG2D及其配体M1CA、M1CB的表达,从而产生有效的抗肿瘤免疫应答。

人免疫重建荷人HPV16阳性宫颈癌SCID鼠模型的建立及其生物学特征研究

目的 :建立人免疫重建荷人HPV16阳性宫颈癌 -严重联合免疫缺陷小鼠模型并研究其生物学特征。方法 :向严重联合免疫缺陷 (SCID)鼠腹腔注射人外周血淋巴细胞 (PBL)后 2 4h ,皮下接种HPV16阳性的人宫颈癌细胞株SiHa细胞建立人免疫重建荷人HPV16阳性宫颈癌SCID鼠模型 ,观察荷瘤鼠成瘤、一般特征和移植瘤生长、转移情况及组织学特征 ,检测外周血、肿瘤组织和肺脾等其它组织中HPV16DNA、血清中人IgG含量和移植物抗宿主情况。结果 :SCID小鼠成瘤率为 10 0 % ,移植瘤生长以局部浸润为主 ,未见转移瘤。免疫重建荷瘤组生存期 (136 .2± 6 .3d)显著长于未重建荷瘤组 (97.8± 3.7d) ;组织学检查示移植前后肿瘤细胞形态相似 ;所有肿瘤组织中HPV16DNA呈阳性 ,而外周血和肺脾等其它组织均为阴性。未发现移植物抗宿主情况。结论