大鼠肝移植自发免疫耐受模型T淋巴细胞亚群的变化

免疫耐受是指机体对抗原刺激表现为“免疫不应答”的现象，免疫耐受具有免疫特异性，可以避免自身免疫性疾病和一些移植排斥反应的发生。目前，临床肝移植所面临的最大问题就是移植排斥反应，能在移植后患者身上实现针对移植器官的免疫耐受是临床工作者最大的愿望。肝移植排斥反应是受者和供者间抗原不一致所导致的，在这一应答反应中，T淋巴细胞是核心因素，因此，研究T淋巴细胞在免疫耐受发生中的变化将有助于揭示这种特殊的免疫状态。

中枢免疫耐受缺损模型的构建

目的构建基于shRNA介导的中枢免疫耐受缺损模型。方法分离妊娠后13.5 d的胎鼠胸腺,除去淋巴细胞,获得原代胸腺基质细胞,利用慢病毒将小鼠TRAF6基因特异性shRNA慢病毒质粒(LV-T6-shRNA)导入原代胸腺基质细胞中,重新聚集这些胸腺基质细胞得到LV-T6-shRNA重塑胸腺,将此重塑胸腺移植入无胸腺的雌性小鼠肾脏荚膜下,饲养8周。结果慢病毒可有效转导LV-T6-shRNA慢病毒质粒入原代胸腺髓质上皮细胞中;移植LV-T6-shRNA重塑胸腺的小鼠饲养8周后,胸腺明显较小,成熟的胸腺髓质上皮细胞减少,脾脏肿大,脾脏中活化的T淋巴细胞增多,肺脏中出现淋巴细胞浸润等现象,这些表现型与TRAF6-/-小鼠的表现型相似。结论中枢免疫耐受缺损模型构建成功。

pEGFP-N1-H2B1重组质粒的构建和鉴定

母胎免疫耐受作为天然的同种异体免疫耐受模型，大量研究表明，位于母胎界面的绒毛膜组织不表达经典人类白细胞抗原（HLA）Ⅰa类分子而表达非经典HLAⅠb分子（包括HLA—G等）是母胎耐受的重要机制之一。小鼠的H281（blastocystMHC）基因具有HLA-G结构，其mRNA选择性表达于母胎界面，被认为是HLA-G的同源基因，研究表明blastocyst MHC以H281 mRNA的形式能有效减轻自然杀伤细胞（NK）杀伤靶细胞的效应。