胶体金免疫层析试验在梅毒抗体检测中的价值及适用范围研究

目的 通过比较胶体金免疫层析试验(GICA)与酶联免疫吸附试验(ELISA)、光激化学发光法(LICA)、化学发光免疫分析法(CLIA)对梅毒螺旋体抗体检测的性能指标,探寻GICA法在检测梅毒螺旋体抗体的价值以及患者自检的可能。方法 选取2022年2~5月收集的合肥市滨湖医院住院患者、门诊就诊者以及体检者共143人份血清标本,同时采用GICA、LICA、ELISA、CLIA、梅毒螺旋体颗粒凝集试验(TPPA)进行梅毒螺旋体抗体检测。以TPPA结果为金标准,分析GICA与LICA、ELISA、CLIA的灵敏度、特异度、阴性预测值、阳性预测值,并与TPPA比较得出一致性以及符合率;通过绘制出GICA、LICA、ELISA、CLIA的受试者工作特征(ROC)曲线并对曲线下面积进行比较;根据计算所得最佳临界值进行分区,比较不同区间的TPPA符合率与GICA的TPPA符合率大小。结果GICA的特异度与ELISA、LICA比较,差异有统计学意义(P<0.05);GICA的特异度和阳性预测值均高于CLIA,差异有统计学意义(P<0.05)。GICA与TPPA的符合率均高于ELISA、LICA、CLIA,差异有统计学意义(P<0.05)。ELISA和LICA与GICA的符合率均高于CLIA与GICA的符合率,差异有统计学意义(P<0.05)。通过交叉示意图可见,GICA阳性时至少伴有其他2种方法同时阳性。GICA的ROC曲线下面积与ELISA、LICA、CLIA相比较,差异无统计学意义(P>0.05)。分区后发现ELISA、LICA和CLIA的S/CO值(样本吸光值/临界值)分别在1.00~12.00、1.00~10.00、1.00~4.00时的TPPA符合率与GICA的TPPA符合率存在统计学差异(P<0.05)。结论 GICA作为快速诊断梅毒的重要手段,其各项指标均优于ELISA、LICA、CLIA,还能作为此3种方法初筛梅毒抗体阳性后的复检方法,为日后患者自检模式的实现也提供了可能性。

胶体金免疫层析试验检测乙肝两对半时HBsAg假阴性结果的处置

目的胶体金免疫层析试验(GICA)检测乙肝两对半时,对乙型肝炎表面抗原(HBsAg)结果疑似假阴性的标本分别用酶联免疫吸附试验(ELISA)和时间分辨荧光分析法(TRFIA)定量试验进行HBsAg检测,并用抗体中和确认试验进行确认,以获得一个处理GICA检测HBsAg产生假阴性结果的可靠方法。方法 2014年1月至2015年2月用GICA检测乙肝两对半的标本3 078例,选取其中结果为单乙型肝炎核心抗体(抗-HBc),或单乙型肝炎e抗体(抗-HBe)为阳性,或抗-HBc和抗-HBe同为阳性,而HBsAg、乙型肝炎表面抗体(抗-HBs)、乙型肝炎e抗原(HBeAg)均为阴性的标本86例,分别用ELISA和TRFIA检测其HBsAg,对检测为阳性的标本进行抗体中和确认试验确认。结果 86例标本经抗体中和确认试验确认阳性的为35例;ELISA检出阳性标本28例,其中2例为假阳性;TRFIA检出阳性标本35例与抗体中和确认试验符合率100%。结论 GICA检测乙肝两对半时,对HBsAg结果疑似假阴性的标本可选用TRFIA进行复查确认。

兔出血症病毒胶体金免疫层析试纸条诊断方法的建立及初步应用

为了建立一种快速、简便的兔出血症病毒(RHDV)的检测方法,用胶体金标记纯化的RHDV多克隆抗体,以杆状病毒表达系统表达的重组RHDV VP60蛋白为免疫原制备RHDV的单克隆抗体(McAb,简称单抗)A3C,将RHDV McAb和羊抗兔IgG抗体包被在硝酸纤维素膜上,分别作为检测线和质控线,经条件优化研制成RHDV免疫胶体金试纸条。该试纸条可以检出红细胞凝集试验(HA)效价为1∶10的RHDV悬液,即HA检测为阴性的样品,该试纸条检测为阳性,其敏感性高于HA;特异性试验结果显示,该试纸条不与家兔其他常见病菌发生交叉反应。应用该试纸条对127份疑似兔出血症家兔肝脏样品进行初步检测,同时用HA做平行试验,阳性符合率为100%。因此,该试纸条是一种快速、灵敏、特异的兔出血症病毒检测方法,为兔出血症的现场诊断提供了有效的方法,显示出很好的临床应用前景。

快速诊断滴虫性阴道炎免疫层析试纸条的初步研制

目的用胶体金标记抗阴道毛滴虫重组AP33单克隆抗体制备金标AP33 mAb,研制开发出一种能快速、简便、有效检测阴道毛滴虫感染的免疫层析(GICA)试纸条。方法采用柠檬酸钠还原法制备胶体金颗粒,标记抗阴道毛滴虫重组AP33单克隆抗体,选择最佳反应模式组装试纸条。用该试纸条检测滴虫性阴道炎患者及非滴虫性阴道炎患者白带中的靶抗原,鉴定方法的敏感性和特异性。结果用制备的免疫层析试纸条检测重组AP33抗原的最低量为20 ng/ml,其中以单克隆抗体4A2为包被抗体、单克隆抗体4F8为金标抗体的试纸条检测效果最佳。以湿片法为标准,用该试纸条检测60例滴虫性阴道炎患者白带,敏感性为90.0%(54/60);检测60例非滴虫性阴道炎患者白带,特异性为95.0%(57/60)。两法的总符合率为92.5%。结论GICA检测阴道毛滴虫特异性强、灵敏度高、简便快速,无需特殊仪器设备,有广泛应用价值。

胶体金免疫层析试验在检测急诊患者血液传播疾病中的应用

目的探讨胶体金免疫层析试验检测法（gold immunochromatography assay，GICA）在检测急诊病人乙型肝炎病毒表面抗原、丙型肝炎病毒抗体、人类免疫缺陷病毒抗体中的临床应用价值。方法随机选择2010年2月至2013年2月在四川省双流县第一人民医院就诊患者1080人作为研究对象，采集患者血清标本进行GICA与酶联免疫吸附测定（enzyme—linked immuno sorbentassay，ELISA）。以ELISA法检测结果为金标准，计算GICA检测乙型肝炎病毒表面抗原、丙型肝炎病毒抗体、人类免疫缺陷病毒抗体的灵敏度、特异度、漏诊率和准确性。结果用GICA检测乙型肝炎病毒表面抗原的灵敏度为91．3％（21／23），特异度为99．6％（1053／1057），漏诊率为8．7％（2／23），准确性为99．4％（1074／1080）；应用GICA检测抗丙型肝炎病毒抗体的灵敏度为57．1％（4／7），特异度为99．8％（1071／1073），漏诊率为42．9％（3／7），准确性为99．5％（1075／1080）。应用GICA检测人类免疫缺陷病毒抗体的灵敏度、特异度和准确性为100．0％。结论GICA可用于乙型肝炎病毒表面抗原和人类免疫缺陷病毒抗体的筛检，但对丙型肝炎病毒抗体的检测漏诊率高，不适宜用于丙型肝炎病毒抗体的筛检。

氯霉素单克隆抗体免疫金标快速检测试纸的研制及性能测定

以分泌抗氯霉素单克隆抗体(CAP mAb)杂交瘤细胞株的建立为基础,应用胶体金免疫层析试验(GICA)成功研制出CAP残留快速检测试纸(CAP_Strip),并对其性能进行了测定。结果表明,CAP_Strip的标准曲线呈典型的S型,符合4参数logit曲线拟合,目测检测限为0.5μg/L;与氯霉素琥珀酸钠的交叉反应为160%,与其他酰胺醇类和抗菌药物无交叉反应;其敏感性与竞争ELISA试剂盒相当,符合率为100%;10 min内显示结果,具有快速、敏感、特异、简便等特点,适合CAP残留快速检测的推广应用。

高亲和力克伦特罗单克隆抗体的研制及免疫试纸检测方法的建立

重氮化法将克伦特罗(CL)偶联于BSA合成免疫抗原BSA-CL,戊二醛法(GA)合成包被抗原OVA-CL,用BSA-CL免疫Balb/C小鼠。细胞融合技术建立高亲和力CL单克隆抗体(CLmAb)杂交瘤细胞株,体内诱生腹水法制备CLmAb,并测定其亲和性。依据胶体金免疫层析试验(GICA)原理,应用CLmAb研制CL残留快速检测免疫试纸(CL-Strip),并测定其性能。结果表明,筛选出16株杂交瘤细胞,其中亲和力最高的为3C12-6H6,亲和常数(Ka)为1.76×1010L/mol。CL-Strip的标准曲线呈典型的S型,符合4参数logit曲线拟合,目测检测限为0.5μg/L;其敏感性与竞争ELISA试剂盒和GC/MS相当,符合率为100%。CL-Strip具有具有敏感、特异、快速、简便的特点,可推广应用于CL残留的快速检测。

胶体金免疫层析法与双单克隆抗体夹心ELISA检测鼠疫F1抗原的比较

目的比较胶体金免疫层析法(GICA)和双单克隆抗体夹心酶联免疫吸附试验(DMcAbS-ELISA)检测鼠疫F1抗原的敏感性和特异性。方法用GICA试纸条和DMcAbS-ELISA平行检测308份强毒鼠疫耶尔森菌感染鼠脏器标本和327份对照鼠标本,用RIHA微量法同时检测作为参照。结果327份对照鼠鼠疫细菌学检验及GICA,DMcAbS-ELISA和RIHA的F1抗原检测均为阴性,GICA,DMcAbS-ELISA和RIHA在108cfu/mL水平上未发现与近缘假结核耶尔森菌有交叉反应;308只感染鼠样本细菌培养阳性284只,24只样本未分离到鼠疫菌;F1抗原检测GICA阳性287份,DM-cAbS-ELISA阳性280份,RIHA阳性276份,GICA阳性检出率最高93.19%,与DMcAbS-ELISA和RIHA比较,差异均有统计学意义(χ2=5.14,9.09;P=0.016,0.001);GICA与DMcAbS-ELISA符合率97.73%(Kappa=0.845);GICA和DMcAbS-ELISA与RIHA符合率分别是96.43%和98.70%(Kappa=0.774,0.926);284份细菌培养阳性鼠标本F1抗原检测GICA阳性率是98.59%,高于DMcAbS-ELISA和RIHA,差异有统计学意义(χ2=4.17,5.14;P=0.031,0.016);24份细菌培养阴性实验鼠标本F1抗原检测:GICA检出7份阳性,阳性率29.17%,DMcAbS-ELISA检出6份阳性,阳性率25%,RIHA检出3份阳性,阳性率12.5%,GICA高于DMcAbS-ELISA和RIHA,但差异无统计学意义(χ2=2.25,0;P=0.125,1.000)。结论GICA检测鼠疫F1抗原敏感特异,快速简便,优于DMcAbS-ELISA和RIHA,是鼠疫快速诊断中有应用价值的检测技术。

两种快速梅毒血清学试验的临床评价

目的评价快速梅毒血清学试验检测梅毒的临床价值。方法对2 868例皮肤科门诊患者的血清用甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)检测梅毒反应素,胶体金免疫层析试验(GICA)检测梅毒螺体抗体。结果TRUST试验对梅毒的诊断灵敏度、诊断特异度、阳性预测值、阴性预测值、阳性似然比和阴性似然比分别为90.70%、96.33%、43.33%、99.70%、24.71和0.10,GICA试验对梅毒的诊断灵敏度、诊断特异度、阳性预测值、阴性预测值、阳性似然比和阴性似然比分别为93.02%、98.42%、64.52%、99.78%、58.87和0.07,TRUST和GICA平行联合试验的诊断灵敏度、诊断特异度、阳性预测值、阴性预测值、阳性似然比和阴性似然比分别为98.84%、94.81%、37.12%、99.96%、19.04和0.01;TRUST和GICA序列联合试验的诊断灵敏度、诊断特异度、阳性预测值、阴性预测值、阳性似然比和阴性似然比分别为84.88%、99.93%、97.33%、99.53%、1 212.57和0.15。结论TRUS和GICA平行联合试验可提高诊断灵敏度,但会增加假阳性病例,应注意结合临床做好鉴别诊断。

不同免疫检验方法检测抗HIV结果的可靠性分析

探究不同免疫检验方法检测抗HIV结果。方法 纳入80例艾滋病患者,截取自2020.01-2021.12这一时间段,采集入选对象血液样本,经处理获得血清,行酶联免疫试验、胶体金免疫层析试验、电化学发光法检测,确认试验为免疫印迹法诊断结果,对所得数据进行对比分析。结果 艾滋病患者经过免疫印迹法检测显示HIV抗体阳性标本和阴性标本分别有51例、29例;酶联免疫试验检测可发现HIV抗体阳性标本和阴性标本分别有51例、29例,真阳性、真阴性分别为48例、26例;经胶体金免疫层析试验检测可发现HIV抗体阳性标本和阴性标本分别有52例、28例,真阳性和真阴性分别为44例、21例;经电化学发光法检测可发现HIV抗体阳性标本和阴性标本分别有52例、28例,真阳性、真阴性分别为50例、27例;三种不同免疫检验方法阳性检出率(63.75%、65.00%、65.00%)对比无明显差异(P>0.05);酶联免疫试验和电化学发光法诊断灵敏度(94.12%、98.04%)、特异度(89.66%、93.10%)和诊断符合率(92.50%、96.25%)均明显高于胶体金免疫层析试验(86.27%、72.41%、72.25%),存在显著差异(P<0.05);电化学发光法诊断效能高于酶联免疫试验,不具有差异性(P>0.05)。结论 运用电化学发光法检测抗HIV,诊断效果要优于酶联免疫试验、胶体金免疫层析试验,具有较高的灵敏性、特异性和准确率。

抗氯霉素单克隆抗体杂交瘤细胞株的筛选及金标试纸检测方法的建立

以BSA-CAP-HS免疫Balb／C小鼠,用细胞融合技术筛选抗氯霉素单克隆抗体(CAP mAb)杂交瘤细胞,体内诱生腹水法制备cAP mAb,并鉴定其免疫学特性;依据胶体金免疫层析试验(GICA)原理,以CAP mAb 为金标抗体,研制CAP残留快速检测金标试纸(CAP-Strip),并对其性能进行测定。结果表明,筛选出了3株杂交瘤细胞,其中最好的4F9-B2株间接ELISA效价细胞培养上清为1:1 280,腹水为1:640 000,亲和常数(Ku)为 1．84×1010 L/mol,对CAP的半数抑制浓度(IC50)为0．88μg/L,与氯霉素琥珀酸钠的交叉反应(CR%)为150%,与其他酰胺醇类和抗菌素类药物无交叉反应;CAP-Strip的标准曲线呈典型的S型,符合4参数logit拟合曲线,目测检测限为0．5μg/L;其敏感性与竞争ELISA试剂盒相当,符合率为100％;可见CAP-Strip具有快速、敏感、特异、简便等特点,适合于CAP残留的快速检测,具有较高的推广应用价值。

链霉素快速检测试纸的研制及其性能测定

以分泌抗链霉素(SM)单克隆抗体(mAb)杂交瘤细胞株的建立为基础,应用胶体金免疫层析技术成功研制出SM残留快速检测试纸,并对其敏感性、特异性、重复性、符合性等特性进行了测定。结果表明,检测试纸的检测限为8μg/L;检测上线为100μg/L;与双氢链霉素的交叉反应为100%,与其他抗生素类药无交叉反应;其敏感性与ELISA试剂盒相当,与ELISA试剂盒的检测结果符合率为100%;检测试纸在10 min内显示结果。

3种方法检测HBsAg弱阳性结果比较

目的了解时间分辨荧光(TRFIA)法、酶联免疫吸附试验(ELISA)法及胶体金免疫层析试验(GICA)等检测乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)弱阳性标本结果的差异。方法用TRFIA法检测HBsAg为弱阳性的血清标本100份和阴性血清标本101份,分别用ELISA及GICA方法检测HBsAg含量,对检测结果进行比较分析。结果TRFIA法HBsAg弱阳性标本100份中,ELISA法检测阳性97例,符合率97.0%,特异性96.0%;GICA法检测阳性83例,阳性符合率83.0%,特异性95.0%。ELISA法与TRFIA法检测阳性率间差异无统计学意义(P>0.05),但GICA检测阳性率分别低于ELISA法及TRFIA法(P<0.05)。结论ELISA法检测低浓度HBsAg标本灵敏度与TRFIA法相似,但GICA法灵敏度低于TRFIA法及ELISA法,GICA法检测存在一定的漏检率。

不同血清学方法在奶山羊布鲁氏菌病诊断中的比较分析

布鲁氏菌病(简称布病)是一种危害畜牧业的主要人兽共患传染病,为了选择适合基层奶山羊布病监测净化实际的快捷准确血清学检测方法,以便基层做好布病监测和净化工作。采用虎红平板凝集试验(RBT)、免疫胶体金层析试验(GICA)、间接酶联免疫吸附试验(i-ELISA)、试管凝集试验(SAT)、竞争酶联免疫吸附试验(c-ELISA)对479份奶山羊血清样品进行布病检测,分析、评价不同检测方法的敏感性、特异性、符合率、Kappa值等指标。以SAT作为判定标准,c-ELISA的敏感性、特异性、符合率、假阳性率、假阴性率及Kappa检验一致性均为最好;GICA的特异性、假阳性率和符合率最差,敏感性较高;i-ELISA敏感性最差,但符合率均在95%以上,Kappa值均≥0.75,一致性较为理想。5种检测方法在奶山羊布病诊断中均有重要价值,各检测方法在敏感性、特异性、操作便捷程度、成本及检测条件要求等各方面都有优缺点。因此,基层奶山羊布病监测净化过程中对于诊断方法的选择,要结合工作实际,推荐RBT或GICA初筛,c-ELISA复核确诊,通过2种及以上方法联合诊断较为理想。

HBsAg弱阳性标本4种检测方法敏感性的比较

比较电化学发光免疫分析(ECLIA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、胶体金免疫层析技术(GICA)、HBsAg确认试验4种方法检测HBsAg弱阳性标本的检出率;探讨ELISA法不同孵育时间条件下,HBsAg弱阳性标本的检出率,为临床工作中降低HBsAg弱阳性标本的漏检提供参考。用上述4种方法平行检测HBsAg弱阳性血清68份(ECLIA法结果1.0<吸光度/临界值(S/CO)<20.0);ELISA法分别设立孵育时间为30min、45min、60min三个组别。对检出率进行统计学比较。结果显示,ECLIA法阳性率100%,ELISA法阳性率83.82%,GICA法阳性率7.35%,HBsAg确认试验阳性率79.41%。ELISA法孵育60min的检出率高于孵育30min和45min,但检出率的差异无统计学意义。因此,为降低弱阳性标本的漏检,可以采用灵敏性高的ECLIA方法;若采用ELISA方法检测HBsAg,建议按照说明书要求,孵育60min。

三种方法检测HBsAg弱阳性样本的结果比较

目的:比较胶体金免疫层析试验(GICA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)及微粒子化学发光检测技术(MEIA)检测HBsAg弱阳性样本的结果符合率,以了解三种方法的特异性与灵敏度。方法:用三种方法平行检测收集的血清标本HBsAg,并相互比较。结果:三种方法检测HBsAg的结果符合率为74.3%,其中,ELISA与MEIA结果符合率为94.9%;GICA与MEIA结果符合率为76.9%。GICA检测HBsAg弱阳性样本的各项诊断指标都不甚理想。结论:①GICA的灵敏度和特异性分别为81.5%和81.5%,较ELISA和MEIA低,检测HBsAg弱阳性样本时存在一定程度的漏检率和误诊率,只能起筛查作用。遇到HBsAg弱阳性的血清标本必须与ELISA法并用,实行双检。②ELISA较MEIA灵敏度和特异性略低,当测定标本的OD值在cutoff附近,即检测灰区时,建议用MEIA复检。

三种方法测定HBsAg弱阳性样本的分析比较

目的比较电化学发光检测技术(ECLIA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)与胶体金免疫层析试验(GICA)检测HBsAg弱阳性样本的结果符合率,以了解三种方法的特异性与灵敏度等诊断指标。方法用三种方法平行检测收集的血清标本HBsAg,并进行相互比较。结果三种方法检测HBsAg的结果符合率为82.1%,其中ELISA与ECLIA结果符合率93.5%;GICA与ECLIA结果符合率为78.9%.GICA检测HBsAg弱阳性样本时的各项诊断指标都不甚理想。结论①GICA的灵敏度和特异性分别为77.8%和77.8%,较ELISA和ECLIA低,检测HBsAg弱阳性样本时存在一定程度的漏检率和误诊率,只能起筛查作用,遇到HBsAg弱阳性的血清标本必须与ELISA法并用,实行双检。②ELISA较ECLIA灵敏度和特异性略低,当测定标本的OD值在Cutoff附近即检测灰区时建议用ECLIA复检。(

三种方法检测乙型肝炎病毒表面抗原阳性结果的分析

目的探讨微粒子化学发光检测技术(MEIA),酶联免疫吸附试验(ELISA)和胶体金免疫层析试验(GICA)检测乙型肝炎病毒表面抗原(HBs Ag)的结果符合率。方法用MEIA、ELISA和GICA三种方法对200份标本进行乙型肝炎病毒表面抗原检测,比较三种方法的阳性率、敏感度和特异度。结果 ELISA法阳性率为43.5%,阴性率为56.5%;GICA法阳性率为41.0%,阴性率为59.0%;MEIA法阳性率为45.5%,阴性率为54.5%。ELISA与MEIA符合度较高,阳性率较高,GICA与MEIA符合度差,阳性率最低。三种方法中以MEIA法的敏感度和特异度最高,其次为ELISA法,GICA法最低。结论 GICA灵敏度较低,只能作为初筛;ELISA较MEIA灵敏度略低,遇到检测样本吸光度值(OD值)在对照样本临界值(cut off值)附近时,需要复检。