基于免疫脂质体的荧光分析法检测棒曲霉素

棒曲霉素是一种霉菌产生的天然毒素,曲霉菌、丝衣霉菌、青霉菌、毛霉和根霉等真菌均可产生,能污染水果、蔬菜、谷物和奶酪等多种食物,对食品安全造成威胁。传统的棒曲霉素检测方法需用有机溶液进行分离和浓缩,对环境产生一定的压力。针对传统方法的缺陷,本文利用兔抗棒曲霉抗体及其修饰的脂质体开发一种快速、灵敏、环境友好的荧光检测方法,检测限可达8μg/L,低于欧洲婴儿和幼儿食品监管要求(10μg/L)。本方法快速、灵敏、环境友好,可用于苹果汁等食品中棒曲霉毒素的检测。

第三代载药免疫脂质体及体内外寻靶研究

目的 研究载阿霉素第三代免疫脂质体的制备及体内外寻靶、抑瘤效果。方法 设计将人膀胱癌单抗与聚乙二醇羧酸 (PEG COOH)端相联 ,使构成的脂质体既充分发挥PEG的保护功能 ,延长药物血循环时间 ,又使单抗伸展在外部充分发挥其寻靶作用 ,即第三代免疫脂质体 (IML)。进而研究载抗癌药的免疫脂质体的制备方案 ,制备出阿霉素免疫脂质体 (IML ADM)使达到对药物高包封、高稳定 ,又不降低单抗活性的目的。以人膀胱癌靶细胞EJ和人直肠癌非靶细胞LOVO进行体外杀伤和体内肿瘤的抑瘤实验。结果 IML ADM对EJ细胞和LOVO细胞杀伤 ,及对EJ细胞移植瘤体的抑制与对照组比较均有显著性差异。

大肠癌免疫脂质体导向紫杉醇的实验研究

采用新型偶联剂ＳＡＴＡ，将抗人体大肠癌的单克隆抗体与载有紫杉醇的脂质体偶联制成免疫脂质体。检测结果显示，脂质体稳定性良好，４℃存放１０ｄ，内含物无明显渗漏。制成免疫脂质体后，单抗免疫活性不丧失。体外细胞毒实验结果显示，紫杉醇免疫脂质体对细胞生长的抑制作用有明显的靶向专一性，对人大肠癌细胞的体外细胞毒作用优于普通脂质体和游离药物，ＩＣ５０分别为两者的６．７０和８８．７倍。

蜂毒多肽空间稳定免疫脂质体的制备及体外对肿瘤细胞的选择性

蜂毒多肽在肿瘤治疗中的应用引起研究者的极大兴趣。本研究使用大豆磷脂、胆固醇、羧酸化PEG-胆固醇制备了蜂毒多肽空间稳定脂质体,并将二硫键稳定抗人肝癌单链抗体联结PEG-胆固醇末端。使用酶联免疫法考察了蜂毒多肽空间稳定免疫脂质体的活性。蜂毒多肽空间稳定免疫脂质体有较高的肿瘤细胞选择性。体外实验证明,其对SMMC-7721细胞的杀伤能力远强于蜂毒多肽空间脂质体,而对Hela细胞的杀伤能力与蜂毒多肽空间脂质体无区别。蜂毒多肽空间稳定免疫脂质体对肿瘤细胞的选择性,可使其成为一种有效的靶向制剂。

Vasohibin免疫脂质体抑制小鼠肺纤维化的实验研究

目的制备Vasohibin免疫脂质体,并观察对小鼠肺纤维化的抑制作用。方法采用逆相蒸发法,首先制备含Vasohibin质粒的脂质体,并与山羊抗小鼠VWF单克隆抗体偶联,形成免疫脂质体,并用博莱霉素诱发肺纤维化小鼠模型。14 d后,处死小鼠,取出肺脏组织,用HE染色和免疫组化观察小鼠肺间质血管密度,比色法检测肺组织羟脯氨酸含量。结果与对照组相比,吸入Vasohibin免疫脂质体的小鼠的肺间质血管密度减少,CD31细胞数在模型组平均为(78±12)个,治疗组为(46±16)个,空白对照组为(9±2)个。肺组织羟脯氨酸含量降低,对照组为(1.39±0.23)μg/mg,治疗组为(0.84±0.12)μg/mg。结论 Vasohibin免疫脂质体能有效降低博莱霉素诱发的肺纤维化,为肺纤维化的早期治疗提供了理论基础。

阿苯达唑免疫脂质体的制备

目的 :制备阿苯达唑免疫脂质体 ,提高阿苯达唑治疗包虫病的靶向特异性。方法 :采用注入 - p H梯度法制备了脂质体 ;接着进一步采用戊二醛法将单克隆抗体与脂质体偶联制备免疫脂质体。 结果 :脂质体的包封率为( 6 4.0 2± 3.10 ) % ,粒径 2 0～ 80 nm;用 EL ISA法检测了免疫脂质体抗体效价 ,其活性仍保留近 80 %。结论

抗肝癌单链抗体免疫脂质体的制备及其体外抑瘤实验

目的:比较抗肝癌单链抗体免疫脂质体(hdsFv25-lip.PE38,简称免疫脂质体PE38)、抗肝癌单链抗体免疫毒素(hdsFv-PE38,简称免疫毒素PE38)和载PE38脂质体(lip.PE38,简称脂质体PE38)对体外培养的肝癌细胞SMMC-7721的杀伤作用。方法:将磷脂(PC)、胆固醇(CHOL)和胆固醇琥珀酰酯(CHS)按一定比例溶于氯仿。除去氯仿后形成干膜,加入PE38蛋白溶液,超声、过滤及过Sephadex G-50柱子。测包峰率后加入乙基[3-(二甲胺基)丙基]、碳二亚胺盐酸盐(EDC)和氮羟基琥珀酰亚胺碘酸钠(SSNHS)在2-(n-吗啡啉)乙磺酸(MES)缓冲液中反应30m in,再加单链抗体(hdscFv),4℃过夜。用单四唑(MTT)法检测所制备的免疫脂质体、免疫毒素和脂质体对肝癌细胞的杀伤作用。结果:通过MTT法显示:免疫脂质体对肝癌细胞的杀伤效果最好,免疫毒素次之,脂质体最差,其半抑制浓度(IC50)值分别为0.59μg/m l、6.04μg/m l和92.07μg/m l。结论:载PE38免疫脂质体有望成为良好的新型抗肝癌药物。

大肠癌特异性卡莫氟免疫脂质体的体外抗癌活性研究

目的研制抗人体大肠癌的单克隆抗体的卡莫氟免疫脂质体 ,并对其体外抗癌活性进行了研究。方法由偶联剂将抗大肠癌的单抗与载药脂质体偶联制成免疫脂质体 ,并应用酶联免疫吸附法和MTT法分别测定其免疫活性和体外细胞毒毒性。结果脂质体稳定性良好 ,制成免疫脂质体后 ,单抗免疫活性不丧失 ;体外细胞毒实验结果显示 ,卡莫氟免疫脂质体对人大肠癌细胞的体外抗癌活性优于普通脂质体和游离药物 ,IC50 分别为两者的 1 0 6和 3 5 9倍 ,对非靶细胞的作用与普通脂质体相似。

DEC-205单抗耦联长循环免疫脂质体的制备及其体外靶向

为使脂质体将所包封的药物或抗原高效地递呈给树突状细胞(dendritic cells,DCs),诱导产生强烈的T细胞免疫应答或特异性免疫耐受,采用薄膜分散法制备了包裹FITC-dextran的纳米脂质体;用DSPE-PEG(2000)对脂质体膜进行修饰使之具有长循环功能;用异型双功能交联剂SPDP将抗小鼠DEC-205单克隆抗体耦联于脂质体表面使之具有主动靶向DCs的能力。稳定性实验表明脂质体在4℃贮存7d后粒径分布变化较小,FITC-dextran累积泄漏率小于7%;体外结合实验证明耦联抗DEC-205的免疫脂质体(anti-DEC-205 iLPSM)可特异性地识别DCs,并作为良好载体将FITC-dextran带入DCs浆内。成熟树突状细胞(mDC)与未成熟树突状细胞(iDC)均可高效摄取anti-DEC-205 iLPSM,iDC摄取能力更强。anti-DEC-205 iLPSM有望成为一种新型DC疫苗应用于临床。

新型药物载体免疫脂质体的研究进展

免疫脂质体作为一种新型药物载体具有很多优势,在临床治疗中有着广阔的应用前景。本文就免疫脂质体的分类、抗体连接脂质体的方法、临床应用及其发展现状进行综述。

包裹碱性磷酸酶免疫脂质体的制备

目的制备包裹碱性磷酸酶的免疫脂质体并评价实验方法。方法采用逆相蒸发法、薄膜分散法制备包裹碱性磷酸酶的脂质体,应用戊二醛交联法、抗体衍生化法将脂质体与兔抗人IgG结合,使脂质体既包裹酶又具有免疫活性。对制备方法进行了分析比较。结果应用逆相蒸发法制备的脂质体数量多,圆整均匀,具有较高的碱性磷酸酶活性;以戊二醛为交联剂结合抗体方便、高效、实用。结论通过选择适当的实验方法,制备了具有酶和抗体活性的免疫脂质体。

MRK-16修饰阿霉素免疫脂质体逆转肺癌细胞多药耐药研究

目的:研究MRK-16修饰阿霉素免疫脂质体与阿霉素脂质体对非小细胞肺癌多药耐药的逆转作用。方法:25%的戊二醛偶联MRK-16于阿霉素脂质体,制备MRK-16修饰阿霉素免疫脂质体;以MTS测定细胞存活率,检测SPC-A1/TAX的耐阿霉素指数;以阿霉素脂质体与MRK-16修饰阿霉素免疫脂质体作用于SPC-A1/TAX,设阿霉素组对照;研究两者对SPC-A1/TAX的体外细胞毒与多药耐药逆转作用;流式细胞仪检测用药后2、4、6小时后细胞内药物浓度。结果:免疫脂质体细胞杀伤率(48h)达67.7%,其多药耐药逆转指数达7.45;脂质体对细胞的杀伤率49.2%,逆转指数4.28;流式细胞仪检测细胞内药物浓度,6小时后阿霉素免疫脂质体组细胞内药物浓度是阿霉素组的18.34倍,脂质体组是阿霉素的10.1倍。结论:MRK-16修饰阿霉素免疫脂质体、阿霉素脂质体在体外对非小细胞肺癌多药耐药具有一定的逆转作用。

尿激酶免疫脂质体对肺栓塞家兔的靶向溶栓治疗作用

目的:以鼠抗人纤维蛋白D-二聚体单克隆抗体(DDmAb)为靶向装置,制备尿激酶(UK)的血栓靶向脂质体即尿激酶免疫脂质体,并在兔急性肺动脉栓塞模型上观察其早期溶栓效果。方法:新西兰大白兔40只,随机分为5组:TBS组(TBS缓冲液,阴性对照组)、UK组(15×104IU/kgUK,阳性对照组)、Lip组(5×104IU/kgUK的Lip-UK)、Ab组(5×104IU/kgUK的Ab-Lip-UK)和2Ab组(5×104IU/kgUK但DDmAb用量为Ab组2倍,2Ab-Lip-UK)。各组成功建立急性肺动脉栓塞模型后,分别以TBS缓冲液、UK、Lip-UK、Ab-Lip-UK和2Ab-Lip-UK各30mL经股静脉输入,进行兔体内溶栓实验,并观察右心室收缩压(RVSP)和右心室舒张压(RVDP)在1h内随时间变化的情况。实验结束后,处死动物并取材,观察肺动脉内残留栓子数及心、肝、肾的肉眼和组织学变化。结果:TBS组RVSP在溶栓后1h内无显著变化,UK组、Lip组、Ab组、2Ab组RVSP分别于溶栓后30min、40min、30min、20min后显著下降。TBS组、UK组、Lip组、Ab组、2Ab组肺内残留栓子数分别为:(4.0±0,2.4±0.9,3.1±0.6,2.4±0.9,1.9±0.6)个。各组肺均有不同程度的淤血、水肿表现。HE染色除UK组心、肝、肾有出血外,其余组未见出血。结论:以2Ab-Lip-UK这种具有双重靶向作用的药物进行溶栓治疗是肺动脉栓塞的一种理想溶栓方式,可缩短有效溶栓时间,疗效好且安全。

免疫脂质体鱼肝油酸钠作用于人血管瘤内皮细胞的实验研究

目的:探讨免疫脂质体鱼肝油酸钠的制备方法及其对人增殖期血管瘤内皮细胞的作用。方法:以N-琥珀酰-3-2-联硫基吡啶-丙酸盐((N-Succinimidyl-3-(2-pyridyldithio))propionate,SPDP)作为耦联剂,将针对血管内皮生长因子受体2(VEGFR2/KDR)的单克隆抗体耦联到脂质体表面,运用吹膜挤压法制备免疫脂质体鱼肝油酸钠,通过激光共聚焦显微镜和倒置显微镜观察、Giemsa染色、透射电镜观察、MTT以及流式细胞仪检测,探讨其对人增殖期血管瘤内皮细胞的作用。结果:制备的免疫脂质体鱼肝油酸钠平均粒径为122.9nm,具有良好的稳定性;与普通脂质体制剂相比,其与人血管瘤内皮细胞结合能力更强、更早,促凋亡作用更为明显,而对人血管瘤内皮细胞的毒性作用与普通脂质体制剂类似,作用较为缓和。结论:成功制备免疫脂质体鱼肝油酸钠,其在体外具有良好的特异性主动靶向能力,可以诱导人增殖期血管瘤内皮细胞发生较为普遍的凋亡。

丝裂霉素靶向免疫脂质体对胃癌细胞M85的体外杀伤作用

许多药物,特别是大多数抗癌药物,缺乏组织和细胞专一性是影响它们治疗效果的重要因素,十几年来,寻求药物靶向输送的努力一直在许多实验室进行,并且已经取得可喜进展。在脂质体的脂双层中插入专一靶细胞表面抗原的单克隆抗体做成的免疫脂质体作为药物载体,既具有载药量大,在体内滞留时间长,又具有靶细胞专一性等优点,是当前极受科学家重视,也最有前途的药物靶向输送系统。

米托蒽醌免疫脂质体的制备及对前列腺癌的体外作用

目的探讨米托蒽醌免疫脂质体的制备方法及其对前列腺癌PC-3细胞的体外毒性。方法采用硫酸铵梯度法制备米托蒽醌免疫脂质体,用分光光度法测定米托蒽醌免疫脂质体的药物包封率及其在磷酸缓冲液和血浆中的稳定性;以MTT检测米托蒽醌免疫脂质体对前列腺癌PC-3细胞的体外细胞毒性。结果米托蒽醌免疫脂质体的药物包封率达到(97.5±2.3)%;米托蒽醌免疫脂质体在磷酸缓冲液1个月和血浆中24 h的稳定性良好,其包封率仍达(94.2±0.9)%和(85.6±0.8)%;体外细胞毒性显示,游离米托蒽醌、米托蒽醌脂质体及米托蒽醌免疫脂质体的体外细胞毒性(半抑浓度IC50)分别为0.250、9.000及0.035μg/mL。结论米托蒽醌免疫脂质体可增强米托蒽醌的抗PC-3细胞毒性。

侧脑室注射免疫脂质体介导GFP基因脑内表达时程

目的探索以免疫脂质体携带基因侧脑室注射,透过脑室管膜屏障脑内寻靶。方法以衍生化的抗 Lex／SSEA—1单克隆抗体(P—MMA)偶联阳离子脂质体DOSPER构建免疫脂质体P-MMA-DOSPER。P-MMA- DOSPER包封绿色荧光蛋白质粒(pEGFP-C2)。注入SD大鼠侧脑室,于术后1、3、7、14、21d取脑,冷冻切片nestin抗体免疫荧光染色,荧光显微镜观察。结果注射脂质体质粒复合物一侧侧脑室周围均有大量GFP表达,并可见于对侧侧脑室及第三脑室周围,术后1d、21d GFP表达明显低于其他时间点,差异有统计学意义(P<0．01);3d、7d、14d GFP+／nestin+细胞在nestin+细胞中比例均高于1d、21d,差别均有统计学意义(P<0．01)。结论免疫脂质体P- MMA-DOSPER能够透过脑室管膜屏障高效安全的向脑内原位神经干细胞转移基因。

免疫脂质体的研究进展

就免疫脂质体的组成、结构、制备方法、临床应用进行讨论,为脂质体的开发与临床应用提供有用的情报。同时提供了一些提高免疫脂质体特定靶向性的一些方法。

免疫脂质体与人胃癌细胞的相互作用

我们把抗人胃癌细胞M85的单克隆抗体3Hll插入脂质体的脂双层做成免疫脂质体,研究了这些免疫脂质体与M85细胞的相互作用.结果表明,M85细胞对免疫脂质体的吸收与温育时间、温度密切相关.在37℃温育10小时,细胞吸收的免疫脂质体的量是在4℃时的7倍左右.37℃温育5小时,靶向脂质体结合在M85靶细胞上的量是非靶向脂质体的2倍多;与非靶细胞—人皮肤成纤维细胞Fb32的结合量只有与M85靶细胞结合量的1/6.游离单抗3Hll能够抑制靶向脂质体与靶细胞的结合,而专一性与3Hll抗体不同的单抗3G9则不能.NH_4Cl和NaN_3等内吞作用抑制剂使靶细胞吸收免疫脂质体的量分别减少58%和79%.与此同时,NH_4CI还能抑制包入脂质体的ADM,而不能抑制游离ADM的细胞毒作用.因此我们的结论是,3Hll免疫脂质体能够与靶细胞专一地结合,并把所荷载的物质主要经内吞作用输送到细胞内,杀伤靶细胞.用荧光显微镜对与荧光免疫脂质体温育的M85细胞进行的形态观察也支持上述结论.

阿糖胞苷免疫脂质体的靶向抗单纯疱疹病毒研究

通过间接免疫荧光法和空斑形成抑制试验研究阿糖胞苷（Ａｒａ－Ｃ）免疫脂质体抗单纯疱疹病毒（ＨＳＶ－１）的作用。结果证明含Ａｒａ－Ｃ２．８２μｇ免疫脂质体的空斑抑制率是单纯用Ａｒａ－Ｃ５００μｇ的２．８４倍，是同量Ａｒａ－Ｃ脂质体５．５７倍，同量单克隆抗体的无药免疫脂质体的３．２１倍。充分说明Ａｒａ－Ｃ免疫脂质体是一种可以靶向结合，局部缓慢释放药物的特异靶向输药系统。