应用改进的免疫荧光组织化学染色法对水稻根尖细胞微管结构的观察

植物细胞微管在细胞形态建成中具有重要作用。它体积小,且结构始终处于动态变化之中,因此观察到清晰的微管形态有一定的困难。本实验以水稻根尖为材料,介绍了一种改进的植物细胞微管免疫荧光组织化学染色方法,用此方法可以观察到清晰、完整的植物微管形态,此法对观察其它植物细胞微管结构也具有指导作用。

小鼠早期脓毒性脑病中小胶质细胞活化的探索研究

脓毒性脑病是决定脓毒症死亡率的关键因素。虽然脑中炎症反应与脓毒性脑病的发生相关,但其分子机制尚不清楚。本文针对早期脓毒性脑病中小胶质细胞是否活化进行探索性研究。采用盲肠结扎穿孔术(CLP)制备脓毒症小鼠模型,将小鼠大脑皮层样本经组织免疫荧光化学染色后,在激光共聚焦显微镜下观察小胶质细胞免疫荧光强度变化情况,并与假手术组对比,通过形态上的变化来确认小胶质细胞的活化情况。结果发现在模型组小鼠中小胶质细胞的数量较对照组增多,荧光强度增大且出现小胶质细胞胞体变大,揭示了小胶质细胞被激活。

人肝细胞毛细胆管表达IL-2R_α的初步研究

目的了解人肝细胞毛细胆管是否表达IL-2Rα。方法对正常人肝组织、慢性乙型肝炎等不同病种人肝组织进行IL-2Rα标记,通过免疫组织化学染色、免疫荧光化学染色及免疫电镜三种方法观察其表达。结果免疫组化染色法和免疫荧光染色法显示IL-2Rα标记人肝细胞膜毛细胆管面定位正确,无非特异性染色,而肝细胞膜的血窦面、细胞浆、细胞核不被IL-2Rα标记。酶标记免疫电镜显示人肝细胞膜毛细胆管面有明显电子致密物沉积。结论人肝组织毛细胆管确实表达IL-2Rα,并且有很强的特异性和灵敏度。

大鼠腰多裂肌卫星细胞的分离培养与鉴定

目的建立一种有效的大鼠腰多裂肌卫星细胞(MSC)分离、纯化、培养及鉴定方法。方法取4周龄雌性SD大鼠腰4～5节段多裂肌,用Ⅰ型胶原酶消化,采用差速贴壁法纯化腰多裂MSC,采用免疫荧光细胞化学染色检测配对核转录因子7(Pax7)、成肌分化抗原(MyoD)、肌球蛋白重链(MyHC)的表达进行鉴定。结果通过分离、纯化得到的MSC形态为圆形,折光性强,培养一段时间后,细胞呈梭型。分离所得到的细胞具有一致的生长方式和形态特点。免疫荧光细胞化学染色结果显示,分离得到的大鼠腰多裂肌MSC在静止期表达Pax7、增殖期表达MyoD、分化早期表达MyHC。结论建立了一种简单、高效的分离培养及鉴定大鼠腰多裂肌MSC的方法。

神经肽Y影响人血管平滑肌细胞低密度脂蛋白受体表达

通过观察神经肽Y对人血管平滑肌细胞低密度脂蛋白受体表达的影响 ,以探讨神经体液因素在动脉粥样硬化发生中的重要作用。将体外培养的人血管平滑肌细胞分成对照组和不同浓度神经肽Y组 (浓度分别为 1 0 8mol L、1 0 7mol L、1 0 6 mol L和 1 0 5mol L) ,各组分别培养 6h、1 2h、2 4h和 4 8h ,然后经免疫荧光组织化学染色 ,在激光扫描共聚焦显微镜下定量检测神经肽Y对人血管平滑肌细胞的低密度脂蛋白受体表达的影响。结果发现 ,对照组低密度脂蛋白受体表达的平均荧光值在 2 4 2 8～ 2 5 2 7之间 ,且不同培养时间无显著性差异 (P >0 .0 5 )。而各神经肽Y组低密度脂蛋白受体表达的平均荧光值与对照组之间有显著性差异 (P <0 .0 5或P <0 .0 1 ) ,在不同的培养时间中 ,1 0 8mol L神经肽Y组平均荧光值在 1 798～ 2 4 0 8之间 ;1 0 7mol L神经肽Y组在 1 783～ 2 332之间 ;1 0 6 mol L神经肽Y组在 1 72 2～ 2 2 81之间 ;1 0 5mol L神经肽Y组在 1 5 90～ 2 0 1 0之间。与对照组相比 ,分别平均下降 1 5 .5 9%、1 9.78%、2 1 .91 %和 2 6 .83% ,且不同浓度神经肽Y组之间多有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ,神经肽Y对成人血管平滑肌细胞的低密度脂蛋白受体表达的下调作用呈现一定的剂量和时间依赖效应。结果提示 ,

三种组织透明化方法在神经科学应用中的比较

目的选择三种较常见的组织透明化方法,即PACT、MACS和Visikol,比较其在脑组织不同抗原类型和不同标记方案中的兼容性,为检测特定靶蛋白的最适组织透明化方案提供参考。方法分别利用转基因小鼠来源的内源性荧光、小分子荧光标记物标记特定蛋白、免疫荧光化学标记特定靶抗原等方法进行脑组织样本的标记;采用基于水凝胶包埋的PACT方法、基于尿素透明化技术改进的MACS方法和基于溶剂透明技术的Visikol HISTO商品化试剂三种方案对上述标记的脑组织样本分别进行透明化处理;利用共聚焦显微镜,选择适配于以上三种透明化方案样本折射率的物镜进行成像。结果以厚脑片(150μm)为研究对象,三种方法达到组织透明效果所需的时间PACT法最长,Visikol法次之,MACS法最短。对于不同内源性荧光蛋白,PACT和MACS法能较好保存抗原荧光,而Visikol法处理后荧光淬灭严重;对于以血管凝集素为例的小分子荧光标记物,三种方法均可完成标记,但Visikol法效果最好。对于胞核与胞质抗原分别进行免疫荧光化学染色,三种方法均可完成标记;而对于胞膜抗原进行免疫荧光化学染色,PACT和MACS法能较好实现标记。结论由于抗原类型的特点和透明化原理的不同,组织成像效果并不完全相同。选择合适的抗原标记方案结合特定的组织透明化方法对于成功实现一定空间范围内的三维组织成像至关重要。

体内和体外条件下Nogo-A在大鼠小脑颗粒神经元上表达差异的研究

Nogo-A是网膜家族蛋白的成员之一,在抑制成年哺乳动物中枢神经系统损伤后轴突再生的过程中发挥着重要作用。Nogo-A表达于寡突胶质细胞和多种神经元,但在成年动物的小脑颗粒神经元中却未检测到。为探讨Nogo-A在小脑颗粒神经元上的表达情况及其影响因素,本实验应用免疫荧光组织化学染色法研究了Nogo-A蛋白在新生大鼠脑切片上和不同体外培养条件下小脑颗粒神经元中的表达。结果显示:在体条件下Nogo-A蛋白在新生大鼠的小脑颗粒神经元上的表达逐渐减少,至新生14d时检测不到;而在体外培养的来源于新生7d大鼠的小脑颗粒神经元中Nogo-A蛋白持续表达,可维持到14d;与胶质细胞共培养,或加入胶质细胞培养上清的小脑颗粒神经元仍然表达Nogo-A蛋白。本研究结果表明,体内和体外两种条件下Nogo-A蛋白在小脑颗粒神经元上的表达存在差异,新生期Nogo-A在小脑颗粒神经元上的表达下调可能与Purkinje细胞有关,提示Nogo-A在生后发育过程中可能与神经元的迁移或突触的形成密切相关。

人骨肉瘤组织钙网织蛋白表达及其意义探讨

目的:探讨钙网织蛋白(calreticulin,CRT)在骨肉瘤组织中的表达与骨肉瘤生长、转移的关系,以及化疗对其表达的影响。方法:取2005-10-01-2010-09-31在山东中医药大学附属医院(15例)、山东大学齐鲁医院(11例)及新汶矿务局集团中心医院(4例)骨科行骨肉瘤切除术、病历资料完整并排除合并其他运动系统肿瘤的骨肉瘤标本30例,其中转移20例,术前化疗者20例。每例标本同时取距离瘤组织>30mm的正常组织作对照。免疫组织化学染色法检测CRT在瘤体组织和正常组织中的表达;RT-PCR法检测CRT在mRNA水平的表达;蛋白质印迹法检测CRT蛋白的表达。结果:CRT主要存在于细胞质内,在所有标本中都有表达。其表达强度为瘤体组织(1.07±0.32)<瘤体周围正常组织(2.68±0.09),P<0.01;肿瘤转移组(0.93±0.21)<未转移组(1.36±0.42),P=0.020;术前未化疗组(0.75±0.21)<术前化疗组(1.24±0.30),P=0.001。CRT mRNA的表达强度为瘤体组织(0.58±0.30)<瘤体周围正常组织(1.48±0.14),P<0.01;肿瘤转移组(0.50±0.22)<未转移组(0.73±0.23),P=0.033;术前未化疗组(0.27±0.13)<术前化疗组(0.74±0.23),P<0.01。CRT蛋白的表达水平为瘤体组织(369.35±14.27)<瘤体周围正常组织(599.23±6.78),P<0.01;肿瘤转移组(361.95±17.37)<未转移组(394.15±17.97),P=0.031;术前未化疗组(288.96±12.86)<术前化疗组(409.54±18.22),P<0.01。结论:CRT的表达在人骨肉瘤组织中降低,其mRNA和蛋白质表达水平下降程度与瘤体是否转移有关,化疗可增加其表达水平。