免疫荧光实验虚拟仿真教学模式构想

传统教学模式下开设免疫荧光实验项目成本较高,限制因素较多,采用虚拟仿真教学模式有望解决该问题。本文结合当前虚拟仿真教学平台构建的主流技术,设计了免疫荧光实验项目虚拟仿真教学模式的构建方法,为该实验项目虚拟仿真教学软件开发提供指导。

两种间接免疫荧光实验自动化操作平台的实测比对与分析

间接免疫荧光实验（IFA）是自身抗体临床检测的经典与＂金标准＂实验,广泛用于自身抗体的快速筛查、确立临床诊断方向及发现新抗体[1]。目前,用于检测自身抗体的间接免疫荧光检测试剂盒都是采用包被细胞（培养细胞或单细胞生物如绿蝇短膜虫等）或组织切片的玻璃或塑料载片,

一种间接免疫荧光实验封片印章的研制

目的设计一种用于解决间接免疫荧光实验过程中快速准确滴定封片液的工具(简称封片印章)。方法根据普通印章的原理,采用聚甲基丙烯酸甲酯材料制成封片印章。结果该设计解决了封片液快速均匀滴定的问题,目前已试用于全国20家医院的间接免疫荧光实验中,并得到一致认可。该封片印章滴定封片液速度快,封片液滴大小一致,液滴距离均匀,与荧光片对应整齐,显著提高了封片效率和封片质量。结论该产品可以广泛应用于间接免疫荧光实验封片过程及具有同类封片需求的实验中,将来还可以应用在有封片需求的自动化仪器上。

应用两株委内瑞拉粪类圆线虫(F2、F49)的微粒体抗原间接免疫荧光抗体实验诊断人体类圆线虫病

本研究应用两株委内瑞拉粪类圆线虫(F2、F49)的微粒体抗原,用间接免疫荧光抗体实验诊断人体类圆线虫病。实验分为阳性/阴性对照与实验组。滴度自1:20至1:1280,荧光标记的抗人IgG用3％伊文思蓝的PBS作150倍稀释。用二抗作非特异性对照。免疫荧光显微镜镜检玻片。当颗粒呈现均匀的亮兰色荧光时为阳性,阴性对照呈现离散的红光。检测结果用滴度表示,>1:20为阳性。

直接免疫荧光法检测白色念珠菌

目的探讨多克隆抗体直接免疫荧光法检测白色念珠菌的最佳反应条件及临床应用意义。方法观察不同抗体稀释度(1:10～1:2 560),不同孵育时间(15、30、45、60、90、120 min),不同封闭剂(1％、10％牛血清白蛋白及10％小牛血清)和不同菌数对实验效果的影响。结果以抗体稀释度1:40、37℃孵育45 min、封闭剂1％或10％牛血清白蛋白以及菌数1．0×106个／ml和5．0×106个／ml为最佳反应条件。结论直接免疫荧光法检测白色念珠菌具有一定的优点和临床应用价值。

实验小鼠呼肠孤病毒Ⅲ型抗体的实验室检测能力验证结果评价

目的通过实验小鼠呼肠孤病毒Ⅲ型抗体检测能力验证计划,了解实验动物检测机构检验能力,提高实验动物质量检测水平。方法按照CNAS批准的能力验证方案,血清经过标定后,经过稳定性和均匀性检验合格,作为能力验证样品。采用随机编号,发样给参加单位,并附作业指导书。在规定时限提交检验报告和原始记录复印件,其结果与样品预检结果一致的判为满意结果,不一致或未能提交结果的判为不满意结果。结果共有17个省市的27个实验动物检测机构报名参加本次能力验证项目。27个检测机构均提交了满意结果,占总参加机构的100%。采用酶联免疫吸附实验(ELISA)方法的有26个检测机构,采用免疫荧光实验(IFA)方法的有1个检测机构。结论实验动物质量检测机构实验小鼠呼肠孤病毒Ⅲ型抗体检测能力较高,实施能力验证计划能够反映实验室的检测水平。

实验大鼠仙台病毒抗体检测能力验证结果评价

目的了解全国实验动物检测相关实验室在大鼠仙台病毒抗体检测项目上的技术水平,发现并解决检验中存在的问题,促进各实验室加强质量管理,提高检测水平。方法制备标准实验大鼠血清样品,经过标定后分装,按照CNAS的要求进行均一性和稳定性验证,标定好的样品随机编号并随机发放给各参加实验室,每个实验室3个样本,在规定时间内反馈结果,结果以阳性或阴性表示,与预期结果均一致者判为满意结果,不完全一致或逾期未反馈结果者判为不满意。结果来自18个省市自治区的28家单位报名参加本次比对实验,均在规定时间反馈了结果,其中25家单位获得满意结果,占参加比对实验室的89.3%;结果不满意的3家单位,其中1家有1个样品与预期结果不符,另外2家均有2个样品与结果不符。28家单位中有27家采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测,另外1家用免疫荧光法(IFA)检测。反馈的原始记录总体真实可信,个别参加单位存在检测试剂来源不清、操作过程不详及阳性结果未进行复检等问题。结论各实验动物检测机构大鼠仙台病毒总体检测能力较高,本次能力验证计划的实施能够反映实验室的检测水平。

中国人群中甲型肝炎总抗体水平及其免疫性的研究

目的研究我国健康人群中甲型肝炎总抗体水平及其免疫性,以便更好地做好甲型肝炎的防治工作。方法采用法国梅里埃(BioMerieux)公司miniVIDAS全自动免疫荧光分析仪检测296例来我院移民体检的健康人甲型肝炎总抗体水平,分析其阳性率。结果296例标本中,218例HAV总抗体浓度≥20IU/L,阳性率为73.6%;其中有134例>400IU/L,占阳性人数的61.5%,占总人数的45.3%。结果分析显示,老年组中HAV总抗体水平阳性率最高,达91.4%,成人组次之,为74.9%,少儿组阳性率最低,为49.2%。结论我国健康人群中曾获得HAV感染的比率非常高,大多数人都产生了很高浓度的特异性抗体,接受了甲肝病毒被动免疫。此现象应引起足够的重视,做好其防治工作。

多头绒泡菌线粒体中肌动蛋白的免疫细胞化学鉴定

自多头绒泡菌(Physarum polycephalum Schw.)原质团中分离线粒体,以兔抗肌动蛋白抗体为一抗,荧光素标记的羊抗兔IgG和辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG作二抗进行间接免疫荧光和蛋白质免疫印迹实验。结果显示,线粒体中含有与肌动蛋白抗体呈阳性反应的抗原,以兔抗肌动蛋白抗体作一抗,金颗粒标记的蛋白A作二抗进行的问接免疫电子显微镜实验结果进一步证明了肌动蛋白是多头绒泡菌线粒体的组成成分,并在线粒体中呈散在分布。

淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒在实验大鼠中的感染状况

目的对实验室留存的大鼠血清样本进行淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)抗体检测,调查LCMV在我国实验大鼠中的感染情况。方法依据现行国家标准中规定的免疫荧光试验(IFA)方法对我实验室保存的172份大鼠血清样本(包括48份无级别、100份清洁级和24份SPF级大鼠血清样本)进行LCMV抗体检测。结果无级别大鼠血清样本(n=48)15份阳性,阳性率为33.25%,强阳性样本滴度可达1∶1280;SPF级及清洁级大鼠血清样本全部阴性。结论大鼠可以感染LCMV,实验动物等级标准应增加对大鼠LCMV的检测。

血清诱导95D细胞中Nm23H1从细胞质转位至细胞膜板状伪足

目的 探索Nm2 3H1(肿瘤转移抑制因子之一)在细胞内的定位与其功能关系。方法 以人肺巨细胞癌95D细胞为模型,在血清饥饿2 4h后加入血清,观察细胞形态变化及Nm2 3H1在细胞内的分布变化。结果 血清刺激可以诱导95D细胞形成板状伪足,细胞免疫荧光实验发现Nm2 3H1主要分布于细胞质,但在血清诱导形成的细胞板状伪足部位出现显著的Nm2 3H1分布。亚细胞组分分离及免疫印迹的实验结果也证实Nm2 3H1在血清刺激下可以转位到细胞膜,并且这种诱导作用是迅速的,在30min左右达到高峰,8h后降至仍然略高于血清诱导前的水平。结论 Nm2 3H1这种特殊的定位可能涉及细胞的运动,为进一步研究Nm2 3H1的功能与作用机制提供了基础。

GC32细胞对三种虫媒病毒的敏感性研究

用胃癌细胞株ＧＣ３２，对乙型脑炎、基孔肯雅、兰加特病毒进行敏感性研究。并用ＢＨＫ２１细胞作对照，发现ＧＣ３２细胞对两种病毒的敏感性与对照细胞ＢＨＫ２１极为接近。ＢＨＫ２１和ＧＣ３２细胞对基孔肯雅、乙型脑炎和兰加特的免疫荧光实验，于感染后４８ｈ或７２ｈ都出现＋＋＋～＋＋＋＋的阳性结果。两种细胞对基孔肯雅和乙型脑炎病毒都形成空斑，ＢＨＫ２１细胞对基孔肯雅和乙型脑炎病毒的空斑形成单位分别为５．６５和５．３６；ＧＣ３２对基孔肯雅和乙型脑炎病毒的空斑形成单位分别为６．４８和５．６１。实验表明，ＧＣ３２细胞可以作为有关病毒实验的理想细胞株。

肺炎衣原体诊断学研究进展

肺炎衣原体（Cpn）是新近发现的主要引起人急、慢性呼吸道感染的病原体，此外，Cpn感染可能还与冠心病的发生存在相关性，因而引起人们的极大关注。近年来，Cpn感染的实验室诊断方法有了很大的进展，并已在临床上广泛应用。本文综述了这些实验室诊断方法并对其优缺点分别作了评价。

肿瘤抑制剂GA对SH-SY5Y细胞凋亡的影响及分子机制研究

为了探讨HSP90特异的功能抑制剂geldanamycin(GA)能否用于神经母细胞瘤的临床治疗 ,通过检测未分化的和全反式维甲酸 (RA)诱导分化的神经母细胞瘤SH SY5Y细胞在不同浓度GA处理后的细胞存活率 ,发现GA呈剂量依赖性诱导SH SY5Y细胞凋亡 ,但是分化细胞对同样剂量的GA不是很敏感 [细胞存活率依次为 (82 0±6 0 ) %比较 (6 5 0± 3 0 ) % ,P <0 0 2 ;(6 7 9± 3 1) %比较 (4 3 4± 3 9) % ,P <0 0 3;(4 3± 0 8) %比较 (0 4±0 1) % ,P <0 0 5 ]。Western印迹分析和免疫荧光实验显示 ,GA能抑制细胞中c Jun和c Fos的表达 ,并且GA剂量越高 ,其抑制越明显 ;同时GA也诱导了p5 3的核聚集。与未分化细胞相比 ,在相同剂量GA处理后分化细胞中c Jun和c Fos的表达均比未分化细胞略高 ;但是分化细胞中p5 3的核聚集却不如前者明显。提示未分化细胞对同样剂量的GA比分化细胞更敏感 ,可能与分化细胞能抵抗GA引起的c Jun、c Fos的降低以及p5 3的核聚集有关。

基于IFA技术检测微线体蛋白2在艾美耳属球虫的空间分布

微线体蛋白2（Microneme protein2，Mic2）是艾美耳球虫入侵宿主细胞时分泌的主要功能蛋白之一。本研究中，以抗柔嫩艾美耳球虫微线体蛋白2（EtMic2）单克隆抗体为检测抗体，利用间接免疫荧光实验（IFA）检测了Mic2在柔嫩艾美耳球虫、和缓艾美耳球虫、斯氏艾美耳球虫和无残艾美耳球虫等不同种艾美耳属球虫的空间分布。结果显示，Mic2在不同种艾美耳属球虫中均定位于子孢子的顶部（微线体部位），但表达强度存在差异。这提示Mic2可作为研究艾美耳属球虫相关蛋白空间分布的“参照物”。

内流性钾通道2.1蛋白在大鼠脊髓和小脑的分布

目的:内流性钾通道(Kir)2.1蛋白在大鼠脊髓和小脑的分布。方法:免疫荧光组织化学和免疫荧光双标记。结果:在脊髓灰质前角的运动神经元和白质的星形胶质细胞呈现 Kir2.1免疫反应活性强阳性。少数少突胶质细胞呈现Kir2.1和GS共存。在小脑蒲肯野氏细胞及纤维呈Kir2.1免疫活性强阳性。双标记显示近蒲肯野氏细胞旁的少突胶质细胞的Kir2.1蛋白和GS蛋白共存。结论:脊髓和小脑灰质和白质中的Kir2.1表达不一,这种分布可能与保持细胞外的K^+平衡、促进K^+的内流维持细胞兴奋性有重要关系。

RFFIT法血清系列参考品的建立

目的建立血清参考品,用于RFFIT法检测抗狂犬病毒中和抗体。方法狂犬病疫苗免疫后人血清,采用小鼠脑内中和试验确定抗狂犬病毒中和抗体滴度后,混匀,分装,以第2批人免疫球蛋白国际标准品为参考品用RFFIT方法进行标定,并考察所建参考品的稳定性。结果检测用标准血清效价为22.14IU.mL-1,弱阳性、强阳性参考品分别1.11IU.mL-1,9.20IU.mL-1,阴性参考品低于0.1IU.mL-1。结论建立的系列参考品适用于RFFIT法检测人血清中抗狂犬病中和抗体水平。

Effect of taurine on GFAP and TauT expressions in rat retinal Müller cells in high glucose culture

Objective： To detect the expression of glial fibrillary acid protein （GFAP） and taurine transporter （TauT） in the retinal Müller cells in high glucose culture with taurine and to explore the influence of glucose on the taurine transporting, and the possible protective effects of taurine on MUller cells in early diabetic retinopathy. Methods： The Müller cells from the rat retina were cultured in high glucose, and GFAP and Taut expressions were detected in the cells treated with different doses of taurine by immuocytochemical fluorescein staining and Western blotting. Results： High glucose enhanced the expression of GFAP and decreased the expression of TauT in Müller cells. Taurine decreased the up-regulation of GFAP in the cells which was induced by high glucose; 0. 1-10 mmol/L taurine increased the expression of TauT in Müller cells. Conclusion： Taurine can inhibit the changes in Müller cell resulted from high glucose.

荧光标记抗狂犬病病毒核蛋白单克隆抗体的制备及初步应用

抗狂犬病病毒(Rabies virus,RABV)核蛋白荧光抗体具有价格昂贵、保质期短和购买周期长等缺点,非常不利于各级疾病预防控制系统对该试剂的紧急使用。作为国家狂犬病实验室,亟需研发具有自主知识产权的异硫氰酸荧光素(Fluorescein isothiocyanate,FITC)标记抗RABV核蛋白单克隆抗体(Monoclonal antibody,MAb),并且商品化,使其广泛应用于流行病学调查和实验室的病原学和血清学诊断,实现国家狂犬病监测和检测相关试剂的标准化,从而为我国狂犬病防控提供技术支持。制备FITC标记的抗RABV核蛋白MAb,并将其初步应用于直接免疫荧光实验(Direct fluorescent assay,DFA)和快速荧光灶抑制试验(Rapid fluorescent focus inhibition test,RFFIT)。将本实验室制备的抗RABV核蛋白MAb 3B12进行FITC标记,通过DFA确定荧光标记抗体(FITC--3B12)工作浓度,以市售FITC标记MAb作为阳性对照,对狂犬病相关临床样本进行DFA和RFFIT检测。DFA实验结果显示,FITC--3B12的工作浓度为1∶80,与市售荧光抗体的检测结果符合率为100%。RFFIT结果显示,FITC-3B12与市售荧光抗体的检测结果无统计学差异,且具有良好的重复性(CV<15%)。以上结果表明,本实验室所制备的抗RABV核蛋白荧光抗体可应用于狂犬病相关的DFA及RFFIT检测。

脊髓康含药血清对脂多糖诱导的小胶质细胞迁移功能的影响

目的观察中药复方脊髄康(JSK)含药血清对脂多糖(LPS)诱导的小胶质细胞迁移功能的影响。方法采用摇床法提取原代小肢质细胞进行培养、鉴定;制备JSK含药血清;将小肢质细胞分为空白血清组、LPS组、JSK低、中、高剤量组、黄芪甲苷(AS-IV)组;选取细胞划痕实验、Transweil小室迁移实验、鬼笔环肽免疫荧光实验对LPS诱导后的原代小胶质细胞的迁移功能进行检测。结果空白血清组、JSK低、中、高剂量组、AS-IV组小胶质细胞的迁移能力均低于LPS组(P<0.01);JSK高刑量组、AS-IV组小肢质细胞的迁移能力均低于JSK低、中剂量组(P<0.05);JSK高剂量组与AS-IV组相比无明显差异(P>0.05)。结论中药复方脊髓康(JSK)含药血清对LPS诱导的小胶质细胞迁移功能具有一定的抑制作用,从抑制小肢质细胞迁移的角度为中医药治疗脊敌损伤提供一定的依据。