肾组织石蜡切片直接免疫荧光染色方法的再改良

目的探讨肾组织石蜡切片直接免疫荧光染色再改良的方法,以提高石蜡切片的诊断准确率。方法选择2010年6-12月在北京大学深圳医院行肾组织活检确诊为肾小球疾病的患者44例,其中IgA肾病20例,狼疮性肾炎12例,膜性肾病12例。对其肾组织除常规冰冻切片直接免疫荧光染色外,对石蜡切片进行高温、高压修复和胃蛋白酶消化处理,再分别行免疫球蛋白(IgA、IgG、IgM)、补体(C3、C1q)、纤维蛋白(Fib)、HBsAg及HBcAg直接免疫荧光染色,比较石蜡与冰冻切片的直接免疫荧光染色结果。结果冰冻切片:肾小球数1～12个,平均5个;石蜡切片:肾小球数7～30个,平均15个。20例IgA肾病、12例狼疮性肾炎、12例膜性肾病患者的肾组织行冰冻(IgA、IgG、IgM、C3、C1q、Fib、HbcAg和HbsAg)直接免疫荧光染色时在不同荧光强度中所占比例与行石蜡直接免疫荧光染色比较差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论再改良的肾组织石蜡切片直接免疫荧光染色是冰冻切片失败时较好的补救手段。其石蜡切片组织结构更清晰,免疫复合物沉积部位较冰冻切片更易判断。

人体活检穿刺组织、实验动物组织荧光制片、HE制片中的技术改进

目的人体活体行肺、肝、肾穿刺及实验用动物的肺、肝、肾组织制作免疫荧光切片、石蜡HE切片,用以明确疾病的性质以及做科研时动物试验的组织进行科学病理分析。方法我院患者的活检组织标本、试验室的动物组织标本取1/4及1/3用普通胶水代替OCT包埋剂,冰冻机下行冰冻切片用以制作直接免疫荧光染色。剩余标本组织在脱水机改进时间后进行脱水处理,行石蜡包埋切片做HE染色。结果组织荧光制片效果好,无背景着色,切片完整,组织结构清晰。组织石蜡HE切片染色胞浆分明,切片完整。两种制片镜下观察定位准确。结论采用改进后方法制片,节约资金,制片的阳性强度及阳性检出率与未改进前相比效果好,定位准确。

大鼠骨髓基质干细胞的分离培养及鉴定的初步研究

目的 :建立从成年SD大鼠股骨分离、培养并鉴定骨髓基质干细胞的方法。方法 :分离成年SD大鼠的股骨 ,用含 2 0 %胎牛血清的IMDM培养基冲洗出骨髓 ,利用骨髓基质干细胞附能力强的特点 ,分离、培养骨髓基质干细胞。采用三标 (CD11b ,CD45 ,CD90 )免疫荧光直接染色方法对骨髓基质干细胞进行鉴定。结果 :分离培养的细胞具有骨髓基质干细胞的基本特性。结论 :初步建立了大鼠骨髓基质干细胞分离、培养。

流式细胞术对人脑胶质瘤多药耐药膜糖蛋白测定的临床意义

目的 探讨流式细胞术对人脑胶质瘤多药耐药膜糖蛋白 (P - gp)测定的临床意义。 方法 采用流式细胞术直接免疫荧光染色法检测新鲜脑胶质瘤和正常脑组织标本中P - gp的表达。 结果 不同性别、年龄、肿瘤大小之间P - gp表达阳性率无明显差异 (P >0 0 5 ) ,不同恶性程度之间P -gp表达阳性率差异有显著性 (P <0 0 5 )。相同级别胶质瘤中复发与原发者P - gp表达差异有显著性 (P <0 .0 5 )。 结论 P- gp表达与病人性别、年龄、肿瘤大小无关 ,与肿瘤恶性程度呈正相关。P -gp测定可判断胶质瘤对化疗药物敏感性 ,指导临床应用多药耐药逆转剂 ,制订化疗方案 。

肺炎嗜衣原体菌体抗原的制备及应用

目的制备肺炎嗜衣原体(Chlamydophila pneumoniae,Cpn)菌体抗原,纯化后建立ELISA方法,用于血清Cpn抗体的检测。方法应用进口Cpn毒株感染Hep-2细胞,利用吖啶橙染色和直接免疫荧光染色判断Cpn感染细胞,制备Cpn抗原。用初步纯化的Cpn抗原建立ELISA方法检测人血清特异性抗体。结果吖啶橙染色和直接免疫荧光检测显示,Cpn成功感染Hep-2细胞。提取Cpn抗原,用ELISA检测84份病人血清特异抗体,阳性率为52.4%,ELISA试剂盒法的阳性率为51.2%,差异无统计学意义(P>0.05)。用Cpn菌体抗原ELISA检测209份病人血清,阳性率59.3%(其中心血管疾病患者血清138份,阳性率58.0%;呼吸系统疾病患者血清71份,阳性率62.0%);检测84份健康者血清,阳性率2.4%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论Cpn菌体抗原ELISA检测血清抗Cpn抗体可用于判断Cpn感染;病人血清Cpn抗体阳性表明,某些心血管和呼吸系统疾病患者的致病原因可能与肺炎嗜衣原体感染有关。

脑出血对T淋巴细胞亚群的影响和临床分析

目的 探讨脑出血对T淋巴细胞亚群的影响及临床分析。方法 用流式细胞仪直接免疫荧光染色法对49例脑出血患者和 45 例对照者外周血 CD3、CD4、CD8 水平进行检测。结果 脑出血急性期 CD3、CD4 和CD4/CD8明显降低,病情越重者,CD3、CD4和CD4/CD8下降越明显,而 CD8 没有明显的改变。结论 脑出血患者的细胞免疫功能发生明显的改变和平衡失调,病情越重,细胞免疫功能改变和平衡失调越明显。