成像流式细胞术和免疫荧光技术检测成纤维样滑膜细胞Ahr入核的比较

目的探究成像流式细胞术和免疫荧光技术检测成纤维样滑膜细胞中Ahr入核的差别。方法用15%的DMEM培养人来源的成纤维样滑膜细胞细胞株MH7A,分别用激光共聚焦显微镜和量化成像流式细胞仪(ImageStreamX MarkⅡ)检测空白对照组、Kyn组和Kyn+CH223191组对MH7A中Ahr的入核水平,并采用非参数检验比较两种检测技术检测结果的相关性。结果与空白对照组相比,免疫荧光技术和成像流式细胞术测得的MH7A细胞中Kyn组和Kyn+CH223191组Ahr入核能力增加(P<0.05),两种实验方法测得的三组结果相关性良好,R 2值分别是0.8638、0.9287和0.9018,差异有统计学意义(P<0.05)。结论相较于免疫荧光技术的操作和结果,成像流式细胞术数据处理比较复杂,但所得结果精确度高,避免了实验者的主观性,减少实验误差。

多重微球流式免疫荧光技术对肺癌患者外周血IL-1β、IL-6、IFN-γ水平测定及与hs-CRP的相关性分析

目的探讨多重微球流式免疫荧光技术在肺癌患者外周血白细胞介素(IL)-1β、IL-6和干扰素γ(IFN-γ)细胞因子的表达情况及与超敏C反应蛋白(hs-CRP)相关性分析。方法采用回顾性研究的方法,选择张家港市中医医院(下称该院)肿瘤科和肺病科收治的30例肺癌患者作为肺癌组,另选择同期该院收治的30例肺炎患者作为肺炎组,同时选取同期该院体检健康者30例作为对照组,通过多重微球流式免疫荧光技术检测血清中IL-1β、IL-6和IFN-γ水平,同时利用乳胶增强免疫散射比浊法测定外周血全血中hs-CRP水平。结果肺癌组与对照组比较,IL-1β、IL-6和hs-CRP水平显著升高,差异有统计学意义(P<0.001),而IFN-γ水平差异无统计学意义(P>0.05);肺炎组与对照组比较,IL-1β、IL-6、IFN-γ、hs-CRP水平均显著升高,差异有统计学意义(P<0.001);肺癌组与肺炎组比较,IL-6、IFN-γ、hs-CRP水平明显降低且IL-1β水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05);肺癌组、肺炎组IL-6和hs-CRP水平分别进行Pearson相关性分析,均无明显的相关性。结论IL-1β、IL-6、IFN-γ可以作为有效评估肺癌患者免疫功能的辅助指标,多重微球流式免疫荧光技术的应用对于肺癌的诊断及监测具有潜在的临床应用价值。

冰冻切片免疫荧光细胞技术的改良

由于免疫荧光细胞化学的特异性、快速性和在细胞水平定位的敏感性与准确性,已在病理学诊断方面得到广泛应用。本文就我科多年的荧光技术实际操作中的经验体会做个介绍。

免疫荧光技术在生物材料体外细胞培养实验中的应用

作者根据荧光显微镜的成像原理，采用免疫荧光染色技术将钛片表面成骨细胞骨架——肌动蛋白特异性荧光标记，以呈现细胞的形态、大小以及细胞核。结果表明：束状排列的荧光着色微丝位于胞浆内，并勾画出细胞外形和细胞核的轮廓。细胞以三角形、方形为主，与扫描电镜所见完全相符。免疫荧光技术除能反映生物材料表面细胞的形态以外，还能从分子水平反映出细胞的特性及功能状态，在一定程度上优于扫描电镜技术。

应用改进的免疫荧光组织化学染色法对水稻根尖细胞微管结构的观察

植物细胞微管在细胞形态建成中具有重要作用。它体积小,且结构始终处于动态变化之中,因此观察到清晰的微管形态有一定的困难。本实验以水稻根尖为材料,介绍了一种改进的植物细胞微管免疫荧光组织化学染色方法,用此方法可以观察到清晰、完整的植物微管形态,此法对观察其它植物细胞微管结构也具有指导作用。

抗黑素细胞抗体免疫荧光细胞化学检测条件探讨

目的建立一种简单、实用、准确的抗黑素细胞抗体免疫荧光细胞化学检测方法,用于白癜风患者血清抗黑素细胞抗体的检测及其相关抗原分析研究。方法青少年包皮组织经分离酶(Dispase)Ⅱ及胰酶消化后,获取细胞悬液,用M2黑素细胞培养基及Accutase细胞消化液选择及扩大培养,取第3代黑素细胞在培养皿中直接用冷甲醇固定(-20℃),白癜风患者及健康人血清用抗体稀释液按1:10比例稀释进行反应,洗涤后加入FITC标记的羊抗人抗体,封片后荧光显微镜下观察;取不同荧光强度的标本血清用Western-Blot法进一步验证检测。结果获得高纯度、高活性的黑素细胞,黑素细胞在培养皿中经冷甲醇直接固定后细胞形态保持完整,实验过程无脱落,与白癜风患者及健康人对照血清反应后在荧光显微镜下发出不同亮度荧光,强阳性血清荧光强度+++^++++,发光部位为黑素细胞胞质和胞膜;弱阳性血清发光较明亮,亮度+^++,发光部位主要集中在胞膜;阴性血清不发光,只见隐约细胞轮廓,相同血清经重复检测2次后结果相同;经Western-Blot检测后证实黑素细胞胞质和胞膜有多种蛋白与抗黑素细胞抗体阳性血清结合,蛋白染色带的部位及颜色深浅与免疫荧光法检测结果相一致。结论本文建立的抗黑素细胞抗体的免疫荧光细胞化学检测方法简单、准确、重复性好,可全面地反映体内抗黑素细胞抗体表达水平,适用于临床检测及相关抗原的基础研究。

细胞滴片间接免疫荧光实验技术的探讨

目的:探讨在有限条件下简化细胞滴片间接免疫荧光实验操作技术。方法:以大鼠胸腺细胞为抗原,兔抗鼠抗血清为一抗,FITC羊抗兔IgG荧光抗体为二抗做细胞滴片的间接免疫荧光染色,荧光显微镜观察结果。结果:细胞悬液浓度在105～106个/ml为宜,新鲜细胞固定后可长期保存备用,冻存细胞则不能使用;固定剂可选10%甲醛、甲醇等,也可不用固定剂;粘片剂也可不用;平整的试管架代替湿盒更方便。结论:细胞滴片的间接免疫荧光实验操作步骤可简化,以减少实验开支。

用免疫荧光技术检测细胞培养物中兔出血症病毒

用本所实验室制备的兔出血症病毒(rabbit hemorrhagic diseasevirus,RHDV)高免血清,按常规方法提纯出抗体(IgG),用异硫氰酸荧光素(FITC)标记IgG。在细胞培养时,培养瓶中放入玻片,当细胞长成单层时,按常规方法接种病毒液,培养24、48、96、120h时取出玻片,用荧光抗体染色,在荧光显微镜下观察不同代次的细胞毒。经观察:兔肾上皮细胞(RK)毒培养到36～48h、羊睾丸细胞(ST)毒培养到72～96h时可观察到特异性荧光,随着培养时间的延长,荧光亮度增强,胞浆内充满特异性荧光。用肝组织强毒病料触片,呈特异性荧光,对照细胞培养48h无荧光出现,证实了两株细胞培养物中有大量的兔出血症病毒存在,从而成功的分离培养出了兔出血症病毒细胞毒。

免疫荧光细胞化学和免疫酶细胞化学染色方法检测IgA肾病患者尿足细胞的效果比较

目的：比较免疫荧光细胞化学和免疫酶细胞化学染色2种方法检测IgA肾病（IgAN）患者尿足细胞的效果，为尿足细胞检测方法的选择提供依据。方法：收集43例确诊为IgAN患者（实验组）和10例正常对照研究对象（对照组）活检前连续3d的晨尿各200mL，离心上清制成涂片。IgAN患者按Lee分级分成Lee I～LeeV组。采用抗人足细胞表面标记蛋白Podocalyxin（PCX）单克隆抗体对尿沉渣涂片分别行免疫荧光细胞化学和免疫酶细胞化学染色，荧光显微镜和普通光学显微镜下计数2组研究对象尿足细胞数；采用Spearman相关分析法分析2种方法检测IgAN患者尿足细胞数的相关性。结果：2种方法检测的对照组研究对象尿中未见足细胞，2种方法检测实验组研究对象尿中均可见足细胞；免疫荧光细胞化学法检测足细胞阳性率和检出中位数低于免疫酶细胞化学法，2种方法检测尿足细胞阳性率和中位数比较差异均有统计学意义（P〈0．05）；2种方法检查患者尿足细胞数呈明显的正相关关系（r=0．842，P〈0．01）。结论：采用免疫酶细胞化学法检测同一份尿标本的效果优于免疫荧光细胞化学法。

传统涂片联合细胞块及免疫细胞化学染色技术诊断浆膜腔积液的应用价值

目的探讨传统涂片联合细胞块及免疫细胞化学染色技术诊断浆膜腔积液,尤其是恶性浆膜腔积液的应用价值。方法收集2022年1-6月空军军医大学第一附属医院病理科接收的浆膜腔积液标本659例,其中胸腔积液416例,腹腔积液221例,心包积液22例;男389例,女270例,年龄11~102岁,中位年龄64岁。分析传统涂片制片方法、细胞块制作、免疫细胞化学染色技术和细胞病理学诊断结果并学习相关文献。结果659例患者中采用单纯传统涂片诊断为良性浆膜腔积液303例(45.98%),恶性浆膜腔积液123例(18.66%),意义不明的、可疑恶性233例(35.36%);659例患者中72例采用传统涂片联合细胞块及免疫细胞化学染色技术,其中诊断为良性浆膜腔积液8例(11.11%)、恶性浆膜腔积液64例(88.89%),并进一步确诊了恶性细胞的组织起源。结论传统涂片联合细胞块及免疫细胞化学染色技术相对于单纯传统涂片不仅能提高阳性标本检出率,还对确定组织来源、确诊肿瘤原发灶有很重要的帮助。

以单细胞免疫荧光技术观察烟草细胞融合过程中微管骨架的变化

本文建立了单细胞免疫荧光标记技术并以此结合单对细胞融合技术对细胞融合过程中微管骨架组织形式的动态变化进行了追踪观察。发现在聚乙二醇(PEG)诱导条件下,一旦细胞开始粘连,细胞内微管骨架便开始解聚。在细胞融合的整个过程中一直维持着这种解聚的状态,直到融合完成,在后续的培养中微管骨架才重新出现。在微管骨架呈解聚状态时融合产物不能完成与另外的细胞融合。实验揭示了细胞的再融合能力可能受细胞本身微管骨架状态的影响。该结果为解释高等植物如何避免多精入卵提供了新的可能性。

用免疫荧光细胞化学法观察肿瘤细胞内的微丝分布

文章介绍了从鸡砂囊平滑肌中提取肌动蛋白抗原及抗肌动蛋白血清的制备,并用自制抗血清应用于间接免疫荧光染色技术,观察体外培养的5种正常细胞和3种肿瘤细胞株内的微丝结构。观察结果提示正常细胞中微丝的数量、分布,形态与细胞的不同时相、运动和形态变化有关。含肌动蛋白的微丝可呈现直纤维状的线型荧光或呈弥散的颗粒状荧光。肿瘤细胞内微丝的数量略有减少,排列稀疏,在细胞浆内分布不均匀。与正常细胞间存在一定差异。

多重免疫荧光染色技术

多重免疫荧光染色技术是一种基于酪胺信号放大原理,在一张组织切片中进行多种标志物染色的技术。该技术需与多光谱成像及智能图像分析联合使用,通过多重成像对生物标志物的空间及相互作用关系进行探究。从基础研究和转化医学角度,多重免疫荧光技术可与组织芯片、单细胞测序、空间转录组等实验技术联用,提高生物标志物开发效率,更加精准地筛选靶向药适用人群,为生物标志物在疾病发生发展中的功能提供更有价值的信息。

免疫荧光技术在急性早幼粒细胞白血病诊断及治疗中的作用

目的 :探索免疫荧光技术在急性早幼粒细胞白血病诊断及治疗中的作用。方法 :采用免疫荧光技术检测APL患者PML -RARα融合蛋白。结果实验组PML -RARα融合蛋白阳性 ,对照组PML -RARα融合蛋白阴性。实验组采用ATRA诱导治疗后 ,达CR者PML -RARα融合蛋白全部转阴 ;未达CR患者 ,其PML -RARα融合蛋白持续阳性。结论 :用免疫荧光技术检测PML -RARα融合蛋白在APL诊断中具有快速、特异性强、灵敏度高等特点。根据PML -RARα融合蛋白变化可以判断APL疗效。

用免疫荧光技术检测细胞培养物中兔出血症病毒

用本实验室制备的兔出血症病毒（rabbit hemorrhagic disease virus，RHDV）高免血清，按常规方法提纯出抗体（IgG），用异硫氰酸荧光素（FITC）标记IgG。在细胞培养时，培养瓶中放入玻片，当细胞长成单层时，按常规方法接种病毒液，培养24、48、96、120h时取出玻片，用荧光抗体染色，在荧光显微镜下观察不同代次的细胞毒。经观察：兔肾上皮细胞（RK）毒培养到36—48h，羊睾丸细胞（ST）毒培养到72—96h时可观察到特异性荧光，随着培养时间的延长，荧光亮度增强，胞浆内充满特异性荧光。用肝组织强毒病料触片，呈特异性荧光，对照细胞培养48h无荧光出现，证实了两株细胞培养物中有大量的兔出血症病毒存在，从而成功的分离培养出了兔出血症病毒细胞毒。

胸水细胞蜡块结合免疫组织化学染色技术诊断肺癌的临床意义

目的分析胸水细胞蜡块结合免疫组织化学染色技术诊断肺癌的价值。方法选取2021年5月—2023年3月睢宁县人民医院收治的疑似肺癌患者67例为研究对象,均给予液基细胞学、细胞蜡块结合免疫组化检测,以病理检查结果为金标准,比较不同检测方法诊断效能以及对不同类型肺癌的鉴别准确性。结果67例患者中经病理检查确诊肺癌47例、良性病变20例,细胞蜡块结合免疫组织化学染色检查灵敏度、特异度、准确性、阳性预测值、阴性预测值均高于液基细胞学检测结果。以病理检查为金标准,细胞蜡块结合免疫组织化学染色检测对于腺癌诊断符合率100.00%,高于液基细胞学检测的78.95%,差异有统计学意义(χ^(2)=6.846,P<0.05)。结论肺癌诊断中,以胸水细胞蜡块结合免疫组化检测技术应用价值较高,除进行肺癌检出之外,还可进行肿瘤类型鉴别。

基于磁分选技术和间接免疫荧光技术的肺癌A549细胞的分离检测

采用磁分选技术及间接免疫荧光技术分离检测肺癌循环肿瘤细胞(CTCs).将表皮生长因子受体(EGFR)抗体连接到四氧化三铁(Fe3O4)磁珠表面构建免疫磁珠(MNPs-Anti-EGFR),通过EGFR抗体和肺癌A549细胞的表面抗原的特异性结合,将免疫磁珠与肺癌细胞结合.通过磁场作用,使肺癌细胞在磁场的作用下从混合细胞中分离富集.分离出的细胞利用间接荧光技术在其细胞表面连接结合PE荧光团的特异性抗体,并用4',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)对细胞核染色以定位细胞位置.通过倒置荧光显微镜的观察,从而实现对肿瘤细胞的定量计数检测.实验结果显示该方法对肺癌A549细胞具有较好的检测灵敏度和检测下限,检测下限可达3 cells/m L.

液基薄层细胞学技术联合免疫荧光染色在尿足细胞检测中的应用

目的观察液基薄层细胞学技术(TCT)联合间接免疫荧光染色对尿液中足细胞的染色效果并探讨其临床应用价值。方法收集50例2型糖尿病肾病患者和14例健康对照者晨尿标本,TCT制片与传统离心涂片后均行间接免疫荧光染色,观察足细胞形态。结果 64例标本中TCT制片满意率(85.94%)高于传统离心涂片(50.00%),TCT制片的足细胞检出率(73.47%)高于传统离心涂片(51.02%),差异有统计学意义(P<0.05)。2种方法检测足细胞均阳性时,TCT制片的阅片效果优于传统离心涂片。结论较传统离心涂片而言,TCT制片联合间接免疫荧光染色在尿足细胞检测中具有优越性。

一种不溶血红细胞免疫荧光细胞化学检测方法的建立

目的以氯通道蛋白ClC-3为靶蛋白,建立一种不溶血的红细胞免疫荧光细胞化学检测方法。方法采集大鼠红细胞,涂片,0.5%丙烯醛/PBS固定,以不同浓度的Triton X-100/PBS(含0.1 mol/L甘氨酸)溶液透膜,用含0.05 mmol/L甘氨酸、2%BSA、0.05%NaN3的PBS溶液封闭抗原,随后孵育ClC-3的一抗和荧光标记的二抗,最后在共聚焦荧光显微镜下观察结果。结果 0.1%Triton X-100/PBS结合其他优化液处理的红细胞未出现溶血现象,共聚焦显微镜下清晰地观察到目的蛋白及其亚细胞分布情况。结论通过优化固定液、透膜液、封闭液和洗涤液,解决了常规免疫细胞化学法导致红细胞易溶血的缺点,在确保红细胞不溶血的同时成功检测到红细胞氯通道ClC-3蛋白,即成功建立了一种不溶血的红细胞免疫荧光细胞化学检测方法。