2种免疫细胞化学染色方法在脑脊液转移性肺腺癌诊断中的应用

目的:探讨2种免疫细胞化学染色方法在脑脊液转移性肺腺癌诊断中的应用。方法:收集2016年1月至2023年12月有肺腺癌病史并脑脊液转移的病例11例,行脑脊液细胞学检查;对照组为11例脑脊液转移性肺腺癌的苏木精—伊红染色或巴氏染色样本,实验组为相应对照组重制片或褪色后行免疫细胞化学染色的样本,同时分析11例病例的临床资料、细胞学形态、诊断方法及免疫细胞化学染色结果。结果:对照组镜下见数个异型细胞聚集成团或单个细胞散在分布,细胞胞浆中等到丰富,细胞核大、深染,部分细胞可见明显核仁,实验组做TTF-1、NapsinA免疫细胞化学染色证实为转移性肺腺癌。结论:肺腺癌脑膜转移患者预后极差,脑脊液细胞学的明确诊断对临床意义重大;在脑脊液标本量有限且仅有极少量异型细胞的情况下,重制片或褪色后行免疫细胞化学染色,能做出明确诊断,以辅助临床进行治疗。

BRAF免疫细胞化学染色在甲状腺乳头状癌术前诊断中的应用

甲状腺细针穿刺(fine needle aspiration,FNA)是目前术前评估甲状腺结节良恶性最有效的方法[1]。但仍有20%~30%的病例被归为不确定类别,这些不确定的诊断给临床治疗造成困惑。BRAF基因V600E突变是甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)中最常见的分子变异。

P16免疫细胞化学染色在宫颈癌前病变筛查中的价值

比较P16免疫细胞化学染色、HPV检测、TCT三种筛查方式对于组织学为高级别子宫颈病变(包括子宫颈上皮内瘤变CINⅡ、CINⅢ)的诊断价值。方法 收集因在其他医疗机构行宫颈癌筛查且TCT或HPV结果异常而就诊于我院妇科门诊或因有接触性出血、不明诱因阴道出血症状或单纯行妇科健康检查而就诊于我院妇科门诊的患者共5377例。以组织学病理诊断为"金标准",分析P16免疫细胞化学染色、HPV检测、TCT三种方法对组织学为高级别宫颈上皮内瘤变的筛查价值。结果 在筛查CINII+的准确性时,与高危型HPV检测、TCT相比,P16免疫细胞化学染色的灵敏度、NPV最高;-LR最低。P16的特异度、PPV、+LR仅低于TCT。P16的约登指数和kappa值最大。三种筛查指标中P16指标的ROC曲线面积(AUC)最大,曲线更接近左上角。结论 与高危型HPV检测、TCT相比,P16免疫细胞化学染色更具早期筛查宫颈癌的优势。

全自动免疫细胞化学染色P16/Ki-67双染在宫颈病变筛查的价值

目的探讨与分析全自动免疫细胞化学染色P16/Ki-67双染在宫颈病变筛查的价值。方法选取2022年4月—2023年6月在酒钢医院进行宫颈病变筛查的120例患者作为研究对象,所有患者都给予液基薄层细胞学(thinprep cytologic test,TCT)检查、病理检查、HPV检测与全自动免疫细胞化学染色P16/Ki-67双染检查,判定筛查结果。结果在120例患者中,P16/Ki-67双染阳性28例,总阳性率为23.3%。液基薄层细胞学检查判断为良性反应性细胞改变67例、宫颈未明确诊断意义的非典型鳞状上皮细胞37例、低级别宫颈鳞状上皮内病变12例、高级别宫颈鳞状上皮内病变4例,其P16/Ki-67双染阳性率分别为16.4%、21.6%、41.6%、100.0%。在120例患者中,病理检查判断:正常16例,宫颈上皮内瘤变Ⅰ级85例、宫颈上皮内瘤变Ⅱ级14例、宫颈上皮内瘤变Ⅲ级4例、宫颈癌1例,其P16/Ki-67双染阳性率分别为6.2%(1例)、15.3%(13例)、71.4%(10例)、75.0%(3例)、100.0%(1例),差异有统计学意义(P<0.05)。以病理检查结果作为金标准,全自动免疫细胞化学染色P16/Ki-67双染在宫颈病变中的敏感性与特异性分别为73.7%(14/19)、86.1%(87/101)。ROC曲线分析显示全自动免疫细胞化学染色P16/Ki-67双染在宫颈病变筛查的曲线下面积为0.872,Kappa值为0.824。结论全自动免疫细胞化学染色P16/Ki-67双染在宫颈病变筛查诊断宫颈癌的敏感性与特异性都比较高,具有很好的临床应用价值。

应用改进的免疫荧光组织化学染色法对水稻根尖细胞微管结构的观察

植物细胞微管在细胞形态建成中具有重要作用。它体积小,且结构始终处于动态变化之中,因此观察到清晰的微管形态有一定的困难。本实验以水稻根尖为材料,介绍了一种改进的植物细胞微管免疫荧光组织化学染色方法,用此方法可以观察到清晰、完整的植物微管形态,此法对观察其它植物细胞微管结构也具有指导作用。

免疫荧光细胞化学和免疫酶细胞化学染色方法检测IgA肾病患者尿足细胞的效果比较

目的：比较免疫荧光细胞化学和免疫酶细胞化学染色2种方法检测IgA肾病（IgAN）患者尿足细胞的效果，为尿足细胞检测方法的选择提供依据。方法：收集43例确诊为IgAN患者（实验组）和10例正常对照研究对象（对照组）活检前连续3d的晨尿各200mL，离心上清制成涂片。IgAN患者按Lee分级分成Lee I～LeeV组。采用抗人足细胞表面标记蛋白Podocalyxin（PCX）单克隆抗体对尿沉渣涂片分别行免疫荧光细胞化学和免疫酶细胞化学染色，荧光显微镜和普通光学显微镜下计数2组研究对象尿足细胞数；采用Spearman相关分析法分析2种方法检测IgAN患者尿足细胞数的相关性。结果：2种方法检测的对照组研究对象尿中未见足细胞，2种方法检测实验组研究对象尿中均可见足细胞；免疫荧光细胞化学法检测足细胞阳性率和检出中位数低于免疫酶细胞化学法，2种方法检测尿足细胞阳性率和中位数比较差异均有统计学意义（P〈0．05）；2种方法检查患者尿足细胞数呈明显的正相关关系（r=0．842，P〈0．01）。结论：采用免疫酶细胞化学法检测同一份尿标本的效果优于免疫荧光细胞化学法。

程序性细胞死亡1-配体1在不同免疫组织化学染色方法的一致性比较

目的:比较程序性细胞死亡1-配体1(programmed cell death 1-ligand 1,PD-L1,克隆号E1L3N、22C3、SP263)在不同免疫组织化学染色方法的一致性。方法:第一步,筛选最优流程:采用PD-L1(克隆号E1L3N)抗体分别按推荐流程、自建流程①、自建流程②与自建流程③,对5例扁桃体组织完成平行免疫组织化学染色,专科病理医生对全部切片进行质量评分(0~6分),筛选出评分最高的流程;第二步,用最优流程与两种标准流程的评分结果进行一致性比较:选取近两年北京大学第一医院病理最终诊断为非小细胞肺癌的标本共32例,用筛选出的自建流程①、与SP263标准流程及22C3标准流程对32病例各自进行平行染色,全部染色片由专科病理医师行阳性肿瘤细胞比例评分(tumor proportion score,TPS)。评分结果按<1%,≥1%至<10%,≥10%至<50%,≥50%分组,分析PD-L1检测抗体克隆号E1L3N与22C3、SP263染色结果的一致性。结果:扁桃体染色切片质量评分(0~6分)如下:推荐流程为5、5、5、5、5分;自建流程①为5、6、6、5、6分;自建流程②为4、4、4、4、4分;自建流程③为3、3、3、3、3分。自建流程①的结果总体评分最高,选用自建流程①完成32例非小细胞肺癌病例的免疫组组织化学染色,TPS评分为:自建流程①,<1%共6例,≥1%至<10%共5例,≥10%至<50%共10例,≥50%共11例;22C3标准流程,<1%共5例,≥1%至<10%共3例,≥10%至<50%共13例,≥50%共11例;SP263标准流程,<1%共7例,≥1%至<10%共4例,≥10%至<50%共11例,≥50%共10例。一致性检验结果为:自建流程①和22C3标准流程,κ值为0.736(P<0.001),一致性好;自建流程①和SP263标准流程,κ值为0.914(P<0.001),一致性极好。结论:采用PD-L1(克隆号E1L3N)抗体,在罗氏Ventana Benchmark GX平台,通过自建染色流程①完成,可获得良好质量的染色切片;在非小细胞肺癌病例的检测中,自建染色流程①与22C3标准流程和SP263标准流程一致性好。

干化学酶法与荧光染色镜检法在阴道分泌物检测中的应用价值探讨

探讨干化学酶法与双重荧光染色镜检法在妇科门诊阴道分泌物检测中的应用价值。方法 收集2023年4月至2023年5月武汉市蔡甸区妇幼保健院门诊检查阴道炎的119例女性患者标本,同时采用常规湿片镜检法、双重荧光染色镜检法和干化学酶法对阴道分泌物进行检测,结果 进行比较分析。结果 三种检测方法的阳性率以及两两检测方法的结果一致性分析显示,双重荧光染色镜检法检测出霉菌性阴道炎35例,占29.4%,高于湿片镜检法的26.9%和干化学酶法的21.8%,差异具有统计学意义(Cochrant-Q为7.00,P<0.05),且双重荧光染色镜检法和湿片镜检法对霉菌的检测结果的一致性较好;干化学酶法显示细菌性阴道炎51例,占42.9%,高于湿片镜检法的32.8%和双重荧光染色镜检法的34.5%,差异具有统计学意义(Cochrant-Q为7.75,P<0.05)。结论 荧光染色镜检法在检测阴道分泌物辨别真菌和滴虫方面具有更高的准确性和特异性,而干化学酶法对于细菌性阴道炎有较高的检出率,可以结合这2种方法,以提高临床门诊对阴道炎的检测水平和诊断效率。

免疫荧光染色检测不同组织细胞微管蛋白-β的表达

为了探讨体外培养的正常及肿瘤细胞微管蛋白 β的表达 ,将肺成纤维细胞 ( 3T3)、胃癌细胞 (BGC 82 3)、神经母细胞瘤株 (SH SY5Y)、大鼠胶质瘤细胞株 (C6)、多形性胶质母细胞瘤株 (BT32 5)体外培养 ,免疫荧光细胞染色检测微管蛋白 β的表达。发现 :所有细胞均为微管蛋白 β免疫反应阳性。结果提示 :微管蛋白

抗黑素细胞抗体免疫荧光细胞化学检测条件探讨

目的建立一种简单、实用、准确的抗黑素细胞抗体免疫荧光细胞化学检测方法,用于白癜风患者血清抗黑素细胞抗体的检测及其相关抗原分析研究。方法青少年包皮组织经分离酶(Dispase)Ⅱ及胰酶消化后,获取细胞悬液,用M2黑素细胞培养基及Accutase细胞消化液选择及扩大培养,取第3代黑素细胞在培养皿中直接用冷甲醇固定(-20℃),白癜风患者及健康人血清用抗体稀释液按1:10比例稀释进行反应,洗涤后加入FITC标记的羊抗人抗体,封片后荧光显微镜下观察;取不同荧光强度的标本血清用Western-Blot法进一步验证检测。结果获得高纯度、高活性的黑素细胞,黑素细胞在培养皿中经冷甲醇直接固定后细胞形态保持完整,实验过程无脱落,与白癜风患者及健康人对照血清反应后在荧光显微镜下发出不同亮度荧光,强阳性血清荧光强度+++^++++,发光部位为黑素细胞胞质和胞膜;弱阳性血清发光较明亮,亮度+^++,发光部位主要集中在胞膜;阴性血清不发光,只见隐约细胞轮廓,相同血清经重复检测2次后结果相同;经Western-Blot检测后证实黑素细胞胞质和胞膜有多种蛋白与抗黑素细胞抗体阳性血清结合,蛋白染色带的部位及颜色深浅与免疫荧光法检测结果相一致。结论本文建立的抗黑素细胞抗体的免疫荧光细胞化学检测方法简单、准确、重复性好,可全面地反映体内抗黑素细胞抗体表达水平,适用于临床检测及相关抗原的基础研究。

传统涂片联合细胞块及免疫细胞化学染色技术诊断浆膜腔积液的应用价值

目的探讨传统涂片联合细胞块及免疫细胞化学染色技术诊断浆膜腔积液,尤其是恶性浆膜腔积液的应用价值。方法收集2022年1-6月空军军医大学第一附属医院病理科接收的浆膜腔积液标本659例,其中胸腔积液416例,腹腔积液221例,心包积液22例;男389例,女270例,年龄11~102岁,中位年龄64岁。分析传统涂片制片方法、细胞块制作、免疫细胞化学染色技术和细胞病理学诊断结果并学习相关文献。结果659例患者中采用单纯传统涂片诊断为良性浆膜腔积液303例(45.98%),恶性浆膜腔积液123例(18.66%),意义不明的、可疑恶性233例(35.36%);659例患者中72例采用传统涂片联合细胞块及免疫细胞化学染色技术,其中诊断为良性浆膜腔积液8例(11.11%)、恶性浆膜腔积液64例(88.89%),并进一步确诊了恶性细胞的组织起源。结论传统涂片联合细胞块及免疫细胞化学染色技术相对于单纯传统涂片不仅能提高阳性标本检出率,还对确定组织来源、确诊肿瘤原发灶有很重要的帮助。

p16/微小染色体维持蛋白2免疫细胞化学双染在宫颈癌筛查中的应用价值

目的探讨p16/微小染色体维持蛋白2(MCM2)免疫细胞化学双染在宫颈癌筛查中的应用价值。方法选取2022年7月至12月于徐州市肿瘤医院进行人乳头瘤病毒(HPV)分型及薄层液基细胞学检查(TCT)检测的525例宫颈癌筛查患者作为研究对象。所有患者均行HPV分型检测、TCT检测、p16/MCM2双染及阴道镜和活检。分析p16/MCM2表达与高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)感染、宫颈病变的关系,比较p16/MCM2、HR-HPV及TCT诊断宫颈病变的敏感度、特异度及准确率。结果HPV16/18阳性患者、其他HR-HPV阳性患者的p16/MCM2阳性占比高于HPV阴性,差异有统计学意义(P<0.017);HPV16/18阳性患者的p16/MCM2阳性占比与其他HR-HPV阳性比较,差异无统计学意义(P>0.017);宫颈上皮内瘤变(CIN)Ⅰ、CINⅡ、CINⅢ、宫颈鳞癌(SCC)患者中的p16/MCM2阳性占比高于良性病变患者,差异有统计学意义(P<0.005);p16/MCM2、HR-HPV诊断敏感度高于TCT,p16/MCM2、TCT诊断特异度高于HR-HPV,p16/MCM2诊断准确率高于TCT,差异有统计学意义(P<0.017);p16/MCM2与HR-HPV诊断敏感度、p16/MCM2与TCT诊断特异度、p16/MCM2与HR-HPV诊断准确率、HR-HPV与TCT诊断准确率比较,差异无统计学意义(P>0.017)。结论p16/MCM2免疫细胞化学双染诊断宫颈病变敏感度、特异度及准确率均较高,能够识别宫颈异常细胞,降低宫颈病变的漏诊率及误诊率。

免疫荧光细胞染色对肾性和非肾性血尿的鉴别

目的：建立免疫荧光方法对尿中红细胞膜上免疫球蛋白进行荧光定位，以区别肾性与非肾性血尿。方法：以荧光标记兔抗人免疫球蛋白为抗体，采用直接免疫荧光染色法观察尿中红细胞膜上的荧光着色程度，从而达到红细胞荧光定位，共分析了170例病人的尿（血尿）标本，同时做尿沉渣形态学检查及肾活检。结果：在确诊为肾炎病人标本中，直接免疫荧光染色法阳性率88.5％，形态学检查为61.5％，直接免疫荧光染色法是在尿沉渣检查的基础上发展的一种新的染色法。对提高肾性和非肾性血尿鉴别诊断具有重要意义。结论：免疫荧光染色方法特异性强，对鉴别肾性与非肾性血尿是一种有价值的诊断方法。

用免疫荧光细胞化学法观察肿瘤细胞内的微丝分布

文章介绍了从鸡砂囊平滑肌中提取肌动蛋白抗原及抗肌动蛋白血清的制备,并用自制抗血清应用于间接免疫荧光染色技术,观察体外培养的5种正常细胞和3种肿瘤细胞株内的微丝结构。观察结果提示正常细胞中微丝的数量、分布,形态与细胞的不同时相、运动和形态变化有关。含肌动蛋白的微丝可呈现直纤维状的线型荧光或呈弥散的颗粒状荧光。肿瘤细胞内微丝的数量略有减少,排列稀疏,在细胞浆内分布不均匀。与正常细胞间存在一定差异。

不同的固定及渗透方法对小鼠卵母细胞免疫荧光染色的影响

目的探索有效的染色前固定及渗透卵母细胞的方法,以提高小鼠卵母细胞免疫荧光染色的效率。方法采用4种不同的固定及渗透方法处理小鼠卵母细胞:①方案A:先用4%多聚甲醛(PFA)固定1 h,再用0.5%Triton X-100穿透10 min;②方案B:先用0.5%Triton X-100穿透10 min,再用4%PFA固定1 h;③方案C:用1%PFA+0.5%Triton X-100同时固定与穿透1 h;④方案D:用-20℃预冷甲醇固定15 min。分析10种核蛋白(TFⅡA、TFⅡB、TAF1、TAF4、polⅡ、BRF1、MeCP2、MBD2ab、HP1α及HP1β)在小鼠卵母细胞中的免疫荧光染色效果。结果只有方案C能够完全检测出这10种蛋白质。结论用1%PFA+0.5%Triton X-100同时固定与穿透1 h,可以在小鼠卵母细胞形态保持良好的同时检测出更多的蛋白质。

急性分离的成年大鼠心肌细胞在免疫荧光染色中的应用

目的 介绍用急性分离的心肌细胞进行免疫荧光染色的方法。方法 采用急性分离的成年大鼠心肌 细胞和培养的乳鼠心肌细胞为标本,分别用免疫荧光染色直接法和间接法对细胞的肌动蛋白和肌钙蛋白进行染 色。结果无论是用肌动蛋白或肌钙蛋白抗体,两种心肌细胞染色效果无明显差别。结论 可以尝试用急性分 离的成年大鼠心肌细胞为标本进行免疫荧光实验。

胸水细胞蜡块结合免疫组织化学染色技术诊断肺癌的临床意义

目的分析胸水细胞蜡块结合免疫组织化学染色技术诊断肺癌的价值。方法选取2021年5月—2023年3月睢宁县人民医院收治的疑似肺癌患者67例为研究对象,均给予液基细胞学、细胞蜡块结合免疫组化检测,以病理检查结果为金标准,比较不同检测方法诊断效能以及对不同类型肺癌的鉴别准确性。结果67例患者中经病理检查确诊肺癌47例、良性病变20例,细胞蜡块结合免疫组织化学染色检查灵敏度、特异度、准确性、阳性预测值、阴性预测值均高于液基细胞学检测结果。以病理检查为金标准,细胞蜡块结合免疫组织化学染色检测对于腺癌诊断符合率100.00%,高于液基细胞学检测的78.95%,差异有统计学意义(χ^(2)=6.846,P<0.05)。结论肺癌诊断中,以胸水细胞蜡块结合免疫组化检测技术应用价值较高,除进行肺癌检出之外,还可进行肿瘤类型鉴别。

液基薄层细胞学技术联合免疫荧光染色在尿足细胞检测中的应用

目的观察液基薄层细胞学技术(TCT)联合间接免疫荧光染色对尿液中足细胞的染色效果并探讨其临床应用价值。方法收集50例2型糖尿病肾病患者和14例健康对照者晨尿标本,TCT制片与传统离心涂片后均行间接免疫荧光染色,观察足细胞形态。结果 64例标本中TCT制片满意率(85.94%)高于传统离心涂片(50.00%),TCT制片的足细胞检出率(73.47%)高于传统离心涂片(51.02%),差异有统计学意义(P<0.05)。2种方法检测足细胞均阳性时,TCT制片的阅片效果优于传统离心涂片。结论较传统离心涂片而言,TCT制片联合间接免疫荧光染色在尿足细胞检测中具有优越性。

一种不溶血红细胞免疫荧光细胞化学检测方法的建立

目的以氯通道蛋白ClC-3为靶蛋白,建立一种不溶血的红细胞免疫荧光细胞化学检测方法。方法采集大鼠红细胞,涂片,0.5%丙烯醛/PBS固定,以不同浓度的Triton X-100/PBS(含0.1 mol/L甘氨酸)溶液透膜,用含0.05 mmol/L甘氨酸、2%BSA、0.05%NaN3的PBS溶液封闭抗原,随后孵育ClC-3的一抗和荧光标记的二抗,最后在共聚焦荧光显微镜下观察结果。结果 0.1%Triton X-100/PBS结合其他优化液处理的红细胞未出现溶血现象,共聚焦显微镜下清晰地观察到目的蛋白及其亚细胞分布情况。结论通过优化固定液、透膜液、封闭液和洗涤液,解决了常规免疫细胞化学法导致红细胞易溶血的缺点,在确保红细胞不溶血的同时成功检测到红细胞氯通道ClC-3蛋白,即成功建立了一种不溶血的红细胞免疫荧光细胞化学检测方法。