胃肠道间质瘤免疫表达的临床病理分析

目的探讨DOG1、CD117和CD34等在胃肠间质瘤中表达的临床病理意义。方法应用免疫组化检测40例胃肠道间质瘤(GIST)中DOG1、CD117、CD34、SMA、S-100的表达情况。结果 40例GIST中DOG1、CD117、CD34阳性率为97.5%、92.5%、80%。SMA,S-100阳性率分别为7.5%和5%。结论 DOG1和CD117的联合应用在GIST的诊断中可以大大提高敏感性,但是DOG1和CD117表达与GIST的良恶性程度和组织学类型无关。DOG1蛋白是一种较为敏感和特异的GIST辅助诊断抗体,对指导伊马替尼和舒尼替尼等靶向药物的应用有重要意义。

前列腺癌的Gleason评分及PSA、PAP、P504S免疫表达分析

目的分析转移性与非转移性前列腺癌的Gleason评分及免疫表达的差异，为临床护理提供依据。方法选取我院泌尿外科收治的经病理组织形态学确诊的无转移性前列腺癌患者45例和转移性前列腺癌患者36例，对其前列腺组织标本的Gleason评分及相关标记物PSA、PAP、P504S的免疫表达进行分析。结果转移性前列腺癌患者的Gleason评分[（7．36±1．22分]高于无转移性患者的评分[（6．55±1．12）分]，经秩和检验，差异有统计学意义（P〈0．05）。≥71岁患者的免疫组化PSA、PAP含量≥（＋＋）的阳性患者多于≤70岁的患者，差异有统计学意义（P〈0．05）。81例前列腺癌中，71例P504S呈阳性表达，占87．7％。结论Gleason评分及PSA、PAP、P504S的免疫表达，能较准确地评估病情，促进护理随访和咨询质量。

阑尾组织的免疫表达及其应用价值

目的:探讨如何设立实用的免疫组化质控对照,使免疫组化检测操作更简便、结果更稳定。方法:收集慢性阑尾炎、急性单纯性阑尾炎、急性化脓性阑尾炎和急性坏疽性阑尾炎四种不同类型的阑尾组织,应用免疫组化技术对四种阑尾组织进行上百种抗体的染色,比较它们之间抗体染色阳性种类的差异,筛选出最佳的免疫组化质控对照组织类型。结果:急性单纯性阑尾炎、急性化脓性阑尾炎和急性坏疽性阑尾炎组织仅部分抗体染色阳性,而慢性阑尾炎组织中104种抗体染色均呈阳性。结论:慢性阑尾炎组织可表达多种抗原,适合作为常用抗体染色质控对照的优选组织类型,方法操作简便,结果稳定可靠。

老年人急性白血病MLL基因与免疫表达异常及预后的临床意义

目的检测老年人急性白血病患者混合系白血病(MLL)基因表达水平,并对部分患者转录本进行动态检测,以观察治疗后基因表达量的变化,并检测其免疫表达异常率和比较治疗效果及与巢式PCR结果进行敏感度比较。方法利用荧光实时定量PCR(RQ-PCR)技术检测MLL融合基因,观察白血病MLL基因的表达水平,分析MLL基因重排的发生频率和免疫表型异常的病例,进行化疗。对照MLL基因异常及免疫表达异常的临床意义。结果 41例老年白血病中7例检测到MLL基因,发生率为17.07%,其中MLL-AF64例(24.5%);其中4例缓解,其MLL基因中位数均低于平均值。免疫表达异常在MLL基因中的检出率较无MLL重排发生频率高,为28.8%,发生率较无MLL基因重排高,且临床缓解率低。基因重排及异常表达与缓解率有关。结论 RQ-PCR监测融合基因表达可以有效观察治疗效果,敏感性高,MLL基因重排与白血病分子机制有关。其次免疫表达异常的患者MLL基因重排检出率相对较高,其临床缓解及疗效差,可能提示预后不良。

BRAFV600E突变的上皮样胶质母细胞瘤BRAFVE1免疫表达形式

上皮样胶质母细胞瘤（E-GBMs）的BRAFV600E突变率可高达50％以上，而普通型GBMs突变率很低，提示E-GBMs最可能为GBMs的一种变异亚型。BRAF基因状态检测是决定靶向药物vemurafenib使用的重要依据。采用BRAFVE1免疫组化（IHC）检测是否可以替代Sanger测序目前尚不清楚。

抗人类白细胞抗原Ⅰ类、Ⅱ类IgG抗体在同种带瓣大动脉移植后的免疫表达

目的:探讨先天性心脏病患者移植液氮保存同种异体带瓣大动脉(CVH)后抗人类白细胞抗原(HLA)Ⅰ类、Ⅱ类IgG抗体的免疫表达规律。方法:选择2001年10月至2003年10月施行液氮保存的CVH移植术的20例复杂先心病患者,分别于术前、术后1个月、3个月、1年不同时间点,以莱姆德抗原板通过酶联免疫吸附方法检测患者血清内的抗HLA-Ⅰ类、Ⅱ类IgG抗体,并与同期施行其他复杂先心病矫正术的20例患者进行比较。结果:所有患者术前抗体为阴性,CVH移植患者在术后1个月、3个月和1年时抗HLA-Ⅰ类抗体阳性率分别为(9.28±6.64)%、(62.14±11.95)%和(66.79±13.42)%,Ⅱ类抗体阳性率分别为(22.92±15.74)%、(41.67±18.73)%、(52.92±20.01)%,且1年内两类抗体的阳性率均呈上升趋势,对照组患者则全为阴性;两类抗体表达阳性率与患者年龄呈负相关。结论:液氮保存的CVH移植后可诱导受体产生抗HLA-Ⅰ类、Ⅱ类IgG抗体介导的体液免疫反应,而且患者年龄越小这种反应越强烈。

乳腺癌C-erbB-2及PCNA免疫表达与生物学意义

乳腺癌是威胁广大妇女生命的恶性肿瘤之一，目前尚未有十分满意的乳腺癌预后判断指标，1987年，Slamon等发现，C-erbB-2的扩增在乳腺癌中发生率很高，并指出基因扩增与预后差及淋巴结转移有关，另有许多报道表明c-erbB-2基因增殖和过度表达成为乳腺癌预后重要因素之一。Wright等人发现，用免疫组化确定癌蛋白的过度表达是仅次于淋巴结转移，具第二位预后意义的指标。PCNA表达亦为肿瘤细胞失调状态下的一个标记。本文结合临床资料研究C-erbB-2蛋白在乳腺癌组织中的表达特点，同时观测PCNA染色同C-erbB-2过表达之间的关系。

HIV患者合并肺部感染的相关免疫表达指标及其预防控制的前瞻性分析

前瞻性分析HIV患者合并肺部感染的相关免疫表达指标及其预防控制。方法:本研究选择对广州市第八人民医院2015年12月-2020年12月间收治的艾滋病患者80例,根据其是否合并肺部感染进行分组,其中40例AIDS合并肺部感染的患者列为感染组,其余40例不合并肺部感染的AIDS患者列为未感染组,将2组患者的临床资料进行前瞻性分析。依次检测患者外周血CD3+CD4+-T细胞表面免疫调控受体程序性死亡分子1(PD-1)、α干扰素(IFN-α)、干扰素诱导基因56(ISG56)、粘病毒抗蛋白A(MxA)和免疫酪氨酸样抑制基序(TIGIT)指标水平,探讨其对HIV患者疾病预防控制的指导意义。结果:感染组CD3+CD4+-T细胞占比高于未感染组,IFN-α、ISG56和MxA水平低于对照组,差异显著(P<0.05)。TIGIT占比与CD4+-T细胞绝对数呈负相关性,与病毒载量之间呈正相关性(P<0.05);PD-1占比与CD4+-T细胞绝对数呈负相关性(P<0.05)。结论:HIV合并肺部感染患者其CD3+CD4+-T细胞占比、PD-1和TIGIT水平会明显上升,其余IFN-α、ISG56和MxA等指标水平明显降低,充分证实相关指标在机体受到感染时会造成其免疫功能紊乱,对于疾病的诊断、治疗具有较高的参考价值。

不同生物型牛病毒性腹泻病毒感染MDBK细胞后免疫相关基因表达谱分析

为研究牛病毒性腹泻病毒(BVDV)感染细胞后的免疫相关基因在不同时间差异表达,以及细胞病变型(CP)和非致细胞病变型(NCP)牛病毒性腹泻病毒感染MDBK细胞后免疫相关基因表达差异及功能,本研究采用基因表达谱芯片技术,将BVDV NM01株和JL株分别接种MDBK细胞,同时设正常细胞对照,分别将接种48 h、72 h和96 h后的细胞和对照细胞收集,提取总RNA,进行免疫相关基因扫描分析。实验结果显示:BVDV感染后48 h,MN01株病毒感染细胞有9个基因上调,1个基因下调;JL株有3个基因上调,3个基因下调;感染后72h,MN01株病毒感染细胞有33个基因上调,14个基因下调;JL株有15个基因上调,8个基因下调;感染后96 h,MN01株病毒感染细胞有43个基因上调,30个基因下调;JL株有7个基因上调,7个基因下调。通过研究不同生物型BVDV感染MDBK细胞后相关免疫基因表达情况,为进一步了解BVDV感染细胞的免疫机理提供了线索。

高强度聚焦超声消融子宫内膜术后病理、免疫组化表达变化及临床疗效评价的研究

探讨高强度聚焦超声(HIFU)消融子宫内膜术后的病理情况、免疫组化表达变化及疗效情况。方法 选取2020年11月-2021年12月就诊重庆医科大学附属第一医院南川医院诊断为AUB-A的50例患者,随机分成实验组(HIFU消融子宫腺肌病病灶组)25例、对照组(HIFU消融子宫腺肌病病灶及子宫内膜组)25例,术后持续随访6个月,术前术后均是采集病理组织,观察病理变化、免疫组化表达及临床疗效情况。结果 两组术后病理情况均是发生改变,而实验组变化显著;实验组HIFU治疗6-12个月在EP阳性、PR阳性率低于对照组(P<0.05);实验组术后1/3/6/12个月在病灶大小指标均是低于对照组(P<0.05);实验组术后并发症总发生率低于对照组(P<0.05)。结论 采取HIFU对子宫腺肌病,同时处理病灶及子宫内膜对患者病理及免疫组化表达作用优于单纯处理病灶方式,且术后并发症发生率低。

基于经皮冠状动脉介入治疗术后支架内再狭窄的免疫相关基因及免疫细胞浸润的生物信息学分析

目的:筛选支架内再狭窄(ISR)中差异表达的免疫相关基因(DEIRGs),分析ISR中免疫细胞浸润情况,并阐明ISR发生发展的机制。方法:由基因表达数据库(GEO)下载GSE46560数据集样本mRNA基因表达数据,分为ISR组与非ISR(non-ISR)组。采用R软件“Limma”包筛选出差异表达基因(DEGs)并与免疫相关基因(IRGs)交集获得ISR中DEIRGs。采用R软件进行DEIRGs的基因本体论(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析,采用STRING数据库构建蛋白-蛋白互作(PPI)网络,以Cytoscape软件可视化并计算核心基因(Hub基因)。绘制Hub基因的受试者工作特征(ROC)曲线,计算ROC曲线下面积(AUC),并评价其诊断价值。采用CIBERSORT软件分析ISR中免疫细胞浸润情况,Pearson相关分析法分析免疫细胞间及其与关键基因之间的相关性。结果:共鉴定出331个DEGs(P<0.05,|log_(2)FC|>1),其中176个基因表达上调,155个基因表达下调,获得38个DEIRGs。GO功能富集分析,在生物过程(BP)中DEIRGs主要富集在防御反应、免疫反应和免疫系统;在细胞组分(CC)中DEIRGs主要定位于胞外区和细胞质膜等;在分子功能(MF)中主要参与调控信号受体结合和细胞因子受体活性等。KEGG信号通路富集分析,ISR中DEIRGs主要富集于磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K-AKT)和转化生长因子β(TGF-β)等信号通路。PPI网络,前10位Hub基因中CD19具有最高节点。与non-ISR组比较,ISR组样本中CD19 mRNA表达水平明显升高(P<0.05)。CD19 mRNA表达的ROC曲线中AUC值为0.92(P<0.05)。免疫细胞浸润分析,与non-ISR组比较,ISR组患者滤泡辅助性T淋巴细胞(Tfh)浸润水平升高(P<0.05),初始B淋巴细胞、 CD8+T淋巴细胞、幼稚CD4+T淋巴细胞和M0巨噬细胞等浸润水平升高,但差异无统计学意义(P>0.05),记忆性B淋巴细胞、活化性记忆CD4+T淋巴细胞、调节性T淋巴细胞、静息性自然杀伤(NK)细胞、活化性NK细胞、单核细胞、静息性肥大细胞和中性粒细胞等浸润水平降低,但差异无统计学意义(P>0.05)。Tfh与M0巨噬细胞和静息肥大细胞等呈正相关关系(r=0.88,P<0.05;r=0.68,P<0.05),与单核细胞和中性粒细胞呈负相关关系(r=-0.49,P<0.05;r=-0.42,P<0.05)。结论:CD19可能通过调控PI3K-AKT信号通路激活影响Tfh和B淋巴细胞,促进ISR的发生发展。CD19可作为诊断ISR的生物标志物。

牙鲆精氨酸酶Ⅱ基因的克隆以及免疫应答表达分析

本研究克隆得到牙鲆(Paralichthys olivaceus)精氨酸酶Ⅱ基因(ArginaseⅡ,Arg-Ⅱ)全长cDNA序列,并检测了Arg-Ⅱ在牙鲆免疫组织和细菌感染过程中的时空表达模式。结果显示,Arg-Ⅱ基因cDNA全长1882 bp,包含1050 bp开放阅读框,编码349个氨基酸(预测分子量为38.02 kDa,等电点为6.42)。Arg-Ⅱ基因编码的氨基酸序列具有典型的精氨酸酶结构特征,推测与哺乳动物中的功能类似。系统进化分析显示,鱼类Arg-Ⅱ基因合成一簇,其中,Arg-Ⅱ基因与鲈鱼(Lates calcarifer)相关度最高(93%)。实时荧光定量结果显示,Arg-Ⅱ基因在健康牙鲆的肝、脾和鳃等免疫组织中有较高表达。进一步研究发现,经迟缓爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)感染的牙鲆成鱼中,主要免疫组织中Arg-ⅡmRNA的表达量在细菌感染后6~12 h显著上调,随后表达量恢复正常。离体培养的牙鲆巨噬细胞经迟缓爱德华氏菌感染后,Arg-Ⅱ基因也呈显著上调模式。因此,本研究结果表明,Arg-Ⅱ基因参与牙鲆响应迟缓爱德华氏菌感染的免疫过程,揭示Arg-Ⅱ基因可能在牙鲆抗病免疫中发挥重要作用。

大鼠心脏移植后淋巴细胞5种免疫分子表达的变化

目的 :观察大鼠异体异位心脏移植术后不同时间点 ,淋巴细胞相关免疫分子的表达水平、供心存活率及心肌组织的病理学改变 ,探讨免疫排斥反应的相关时间进程。方法 :分别经供体SD大鼠的心脏主动脉、肺动脉与受体Wistar大鼠的腹主动脉及下腔静脉吻合 ,进行异位心脏移植术。于术前及术后不同时间点 ,取血分离淋巴细胞。用流式细胞仪分别检测淋巴细胞上CD4、CD8、IL 2R、ICAM I和MHC II类分子的表达水平。对供心心肌组织进行常规病理学检查。结果 :于移植后2 4h ,只有MHC II类分子的表达水平增加 ,CD4、IL 2R和I CAM I的表达水平降低 ,CD8无改变。术后 72h,CD4、CD8及IL 2R的表达增加 ,其中CD8和IL 2R达峰值。术后 7～ 10d ,除CD4的表达继续增加外 ,其他 4种免疫分子的表达水平逐渐降低。术后不同时间点移植心脏的存活率分别为 :10 0 % (2 4h)、85 .7% (72h)、16 .7% (7d)、0 (10d和 12d)。病理学检查显示 ,移植后 2 4h ,心肌组织无明显的病理学变化 ,术后 3d ,7只大鼠中 4只出现ⅠA级及以上病理改变。术后 7d ,6只大鼠全部发生Ⅱ级以上的病理学变化。结论 :大鼠心脏移植后的 2 4h内 ,外周血淋巴细胞为以MHC II分子表达为主的抗原识别、呈递期 ,并伴有一过性免疫功能降低 ;术后 2 4～ 72h为T细胞活化期 。

伴有上尿路梗阻的腺性膀胱炎的病理特征和免疫组化表达

目的探讨伴有上尿路梗阻的腺性膀胱炎的病理特征和免疫组化表达。方法 32例伴有上尿路梗阻与34例不伴有上尿路梗阻腺性膀胱炎的病理切片,光镜观察病理类型,同时采用免疫组化测定p53、Ki67、p21、MMP-9、MUC1、MUC2、COX-2的表达。结果 2组病理类型主要为移行上皮型,其次为肠上皮型,其他类型较少,组间差异无显著性。2组p53、Ki67、p21、MMP-9、MUC1、MUC2、COX-2均有不同程度的阳性表达,组间差异无显著性。泌尿上皮型与混合型相比,COX-2的差异有统计学意义,P<0.05。其他不同病理类型腺性膀胱炎之间免疫组化表达的差异无显著性。结论伴有上尿路梗阻的腺性膀胱炎具有不伴有上尿路梗阻的腺性膀胱炎相同的病理特征和免疫组化表达。目前尚难通过免疫组化测定p53、Ki67、p21、MMP-9、MUC1、MUC2、COX-2的表达来预示腺性膀胱炎的癌变趋势。

Asia-I口蹄疫病毒P1-2A基因真核表达质粒的构建及小鼠免疫试验

目的:构建含有Asia-Ⅰ型口蹄疫病毒(FMDV)衣壳蛋白前体P1-2A基因的真核表达质粒pVAXⅠ-P1-2A,并用pVAXⅠ-P1-2A免疫小鼠,评价其体液免疫和细胞免疫水平。方法:通过RT-PCR方法扩增得到含有FMDVP1-2A编码区的目的基因,并将其克隆到pMD18-T载体上。将pMD18-T-P1-2A和pVAXⅠ分别经EcoRⅤ和XbaⅠ双酶切后连接构建真核表达质粒pVAXⅠ-P1-2A。将酶切鉴定正确后的重组质粒转染HeLa细胞进行IFA检测。再进行小鼠血清特异性抗体试验、小鼠T淋巴细胞增殖试验和IFN-γ ELISPOT试验。结果:酶切结果与预期目的条带大小相符;荧光结果表明经pVAXⅠ-P1-2A转染的细胞有明显的黄绿色荧光,说明P1-2A基因在HeLa细胞中得到了表达;小鼠免疫结果表明,免疫的小鼠都产生了较强的体液免疫和细胞免疫,并且T淋巴细胞增殖数和产生IFN-γ的细胞数和对照组相比显著提高(P<0.05)。间接ELISA试验表明,在免疫第14天抗体水平比对照组明显增高(P<0.05)。结论:成功构建了真核表达质粒pVAXⅠ-P1-2A,并通过小鼠免疫试验发现重组质粒试验组能够诱导产生特异性的体液免疫和细胞免疫应答。

麻风病人T细胞亚群相关免疫分子表达的调查

很多疾病其外周血免疫学检测与分析多见报道[1,2],相比之下,麻风病由于患者数量有限,其外周血相关免疫学指标的检测相对较少。本研究对新发、复发48例经我院治疗的麻风病患者,在治疗前及第2、4周的外周血T淋巴细胞相关免疫分子进行了动态流式细胞的测定,

最低限度免疫定义基因表达的HCV多表位DNA疫苗对小鼠细胞免疫的诱导作用

目的:探讨采用最低限度免疫定义基因表达法制备丙型肝炎病毒(HCV)多表位DNA疫苗的可行性,阐明该方法在疫苗领域可能的应用价值。方法:采用人工合成和PCR方法制备长度为1 346bp的含有CMV启动子、HCV 1b亚型多表位和牛生长激素(BCG)多聚腺苷酸序列的最低限度免疫定义基因表达DNA疫苗,命名为M-HCV-epi;同时制备结构基因被非HCV同源的DNA序列替换的相同长度DNA片段作为对照,命名为V-pcDNA3.1。12只ICQ小鼠随机分为实验组(n=6)和对照组(n=6),分别采用M-HCV-epi DNA和V-pcDNA3.1DNA各20μg皮下注射。QRT-PCR法检测免疫后小鼠脾细胞中干扰素γ(IFN-γ)mRNA的表达水平;人工合成3个HCV 1b亚型表位多肽和1条对照多肽。用上述合成的多肽刺激免疫后小鼠脾细胞,ELISA法检测脾细胞刺激上清中IFN-γ水平。结果:与对照组比较,实验组小鼠脾细胞中IFN-γmRNA表达水平升高(1.50±0.18)倍(P<0.05);加入aa35-44多肽的实验组小鼠脾细胞培养上清中IFN-γ水平较对照组明显升高(P<0.05)。结论:最低限度免疫定义基因表达法制备HCV多表位DNA疫苗可诱导细胞免疫反应,该方法在DNA疫苗领域可能具有应用价值。

猪Ⅱ型圆环病毒ORF2与猪GM-CSF基因重组腺病毒共表达及免疫效果分析

旨在构建含融合基因pGMCSF-ORF2的重组腺病毒,并对其表达水平和免疫效果进行分析。运用PCR方法扩增PCV2ORF2和pGM-CSF基因,拼接后克隆入pMD18-T载体,然后再亚克隆入腺病毒穿梭质粒pShuttle-CMV中,阳性穿梭质粒经PmeⅠ酶线性化后电转化含腺病毒基因组(AdEasy-1)的大肠杆菌细胞BJ5183-Ad-1,成功获得了重组腺病毒DNA。将纯化后的重组腺病毒DNA转染AD293细胞,经过病毒基因组的PCR和转录水平的RT-PCR及Westernblot等方面对融合蛋白的表达进行了鉴定。以该病毒免疫Babl/c小白鼠,对免疫小鼠血清中PCV2抗体进行检测。结果显示,获得了pGMCSF-ORF2重组基因,重组腺病毒载体构建成功,获得了表达pGMCSF-ORF2融合蛋白的重组腺病毒。该病毒免疫小鼠后,在小鼠血清中检测到了PCV2的特异性抗体。获得的重组腺病毒能有效表达pGMCSF-ORF2融合蛋白,且可诱导小鼠产生针对PCV2的特异性抗体。

小鼠胸膜间皮细胞53条免疫相关高表达基因与中医肺气学说的相关性研究

目的:研究小鼠胸膜间皮细胞免疫相关基因表达谱的状况,从而探索用现代免疫及基因芯片技术评价解释中医肺气学说的新方法。方法:取8只BALB/c小鼠胸膜组织块剪切成碎块,提取mRNA,经标记、杂交、清洗、芯片扫描、图像采集与数据分析等过程获得基因表达谱。结果:共筛选出小鼠胸膜间皮细胞53条免疫相关高表达基因。其中主要有免疫应答高表达基因14条;炎性反应高表达基因6条;非特异性免疫应答高表达基因7条;免疫应答调节高表达基因4条;急性反应阶段高表达基因3条;抗原加工与提呈高表达基因2条;Ⅱ型超敏反应正向调节高表达基因2条。结论:从现代免疫学观点及正常小鼠胸膜间皮细胞基因芯片的研究来看,胸膜间皮细胞既表达免疫相关的正向调节基因,亦表达负向免疫相关的调节基因。这不仅可为现代免疫学增添新的内容,而且对丰富中医肺气学说,研究中医肺脏的实质乃至推动中医学理论的深入研究都将具有积极意义,为胸膜的其他后续研究构建一平台,为丰富中医肺气学说与肺气的实质提供分子生物学的基础研究依据;弥补这方面的研究空白。