重组人血小板生成素联合地塞米松对原发免疫性血小板减少症患者免疫功能的影响

目的观察重组人血小板生成素(Recombinan Human Thrombopoietin,rh TPO)联合大剂量地塞米松治疗对原发免疫性血小板减少症(Immune Thrombocytopenia,ITP)患者T淋巴细胞亚群及其细胞因子水平的影响。方法 60例原发ITP患者根据治疗选择方案不同分为两组,对照组(30例)仅予以大剂量地塞米松静脉滴注治疗,观察组(30例)在对照组治疗基础上予以rh TPO皮下注射治疗,两组治疗时间均为14 d。比较两组疗效,采用流式细胞仪检测两组治疗前后(CD3^+、CD4^+、CD8^+) T淋巴细胞亚群水平及CD4^+/CD8^+变化,采用酶联免疫吸附法检测两组治疗前后血清IL-10、细胞毒T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4)、转化生长因子-β1(TGF-β1)表达水平。结果观察组治疗总有效率(90. 0%)明显高于对照组(66. 7%),差异有统计学意义(P <0. 05);两组治疗前(CD3^+、CD4^+、CD8^+) T淋巴细胞亚群水平及CD4^+/CD8^+比较无显著性差异(P> 0. 05),两组治疗后CD3^+、CD4^+水平及CD4^+/CD8^+明显升高(P <0. 05),而CD8^+水平明显降低(P <0. 05),且观察组治疗后较对照组升高和降低更为明显(P <0. 05);两组治疗前血清IL-10、CTLA-4、TGF-β1表达水平比较无显著性差异(P> 0. 05),两组治疗后血清IL-10、CTLA-4、TGF-β1表达水平明显升高(P <0. 05),且观察组治疗后较对照组升高更为明显(P <0. 05)。结论rh TPO联合大剂量地塞米松治疗原发ITP患者可能通过纠正T淋巴细胞亚群比例平衡紊乱,调控免疫负性调节因子表达水平而提高临床治疗效果。

分泌性HIV-1 Nef-EGFP融合蛋白表达载体的构建与鉴定

目的:构建含有人类免疫缺陷病毒I型(human immunodeficiency virus type Ⅰ,HIV-1)负性调节因子(nega-tive regulation factor,Nef)和增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)基因的重组融合蛋白分泌性表达载体,并检测该融合蛋白在真核细胞中的表达及其在培养上清中分泌情况,为进一步研究Nef功能奠定基础。方法:利用PCR扩增出HIV-1 Nef和EGFP基因,插入到分泌性表达载体pSecTag2B中。构建的pSecTag2B-Nef-EGFP融合蛋白表达质粒,转染293T细胞,荧光显微镜下观测细胞中Nef-EGFP融合蛋白的表达。收集细胞及上清液,蛋白质印迹和ELISA法分别检测Nef-EGFP融合蛋白的表达及其分泌。结果:限制性内切酶酶切鉴定和核酸序列测定证实,成功构建了含有Nef-EGFP基因的分泌性表达载体,该质粒转染293T细胞后,蛋白质印迹法能够检测到Nef-EGFP融合蛋白的表达条带,ELISA法检测上清液中目的蛋白分泌量为1.7 ng/ml。结论:成功构建含有Nef-EGFP的融合蛋白表达质粒,融合蛋白Nef-EGFP在293T细胞中获得表达,并能分泌到胞外。