鼠病肝卵石蜡切片间接免疫过氧化物酶染色法检测血吸虫病的实验研究

用鼠病肝卵切片免疫酶染色法诊断血吸虫病具有取材容易,操作简单,敏感性和特异性较高等优点。目前用的鼠肝卵切片抗原有冰冻切片和石蜡包埋切片两种,但前者需特殊的制冷设备,一般实验室不易做到,而后者一般实验室均俱备,且石蜡切片制作简单,在一般条件下可存放较长时间而不降低其效价,如提供此片在基层也便于推广。我们比较了各家方法,效果均不够理想,为了提高石蜡切片诊断血吸虫病的敏感性和特异性,减弱非特异性背景染色,加强特异性着色,我们进行了以下研究,取得较好效果,现报道如下。

肺癌病理应用支气管冲洗细胞块免疫组化链霉菌亲生物素蛋白-过氧化物酶连接法染色的诊断效果及检出率评价

目的探讨肺癌病理应用支气管冲洗细胞块免疫组化链霉菌亲生物素蛋白-过氧化物酶连接法(SP)染色的诊断效果及检出率。方法选取2017年2月至2021年12月广东省开平市中心医院收治的70例经支气管冲洗液检查阳性患者作为研究对象。采用液基薄层细胞学(TCT)技术制备细胞块,分别采用免疫组化SP法、苏木精伊红染色(HE)进行常规细胞学检查,比较两种检测方法诊断效能及不同肺癌类型免疫组化SP法检查后不同抗体阳性表达率比较。结果免疫组化SP法对恶性肿瘤诊断的灵敏度为96.15%、准确度为95.71%,均高于HE染色的69.23%、70.00%(P<0.05),特异度为94.44%,高于HE染色的72.22%,但差异无统计学意义。免疫组化SP法对肺癌病理类型总检出率高于HE染色,差异有统计学意义(P<0.05)。免疫组化SP法对肌上皮(p63)、细胞角蛋白5/6抗体(CK5/6)、细胞角蛋白7(CK7);甲状腺转录因子-1(TTF-1)、突触素(Syn)、人表皮生长因子受体-5(CD56),增殖细胞的核抗原(Ki67),天冬氨酸蛋白酶(Napsin-A)表达阳性率均高于HE染色,差异统计学意义(P<0.05)。不同类型肺癌患者p63、CK5/6、CK7、TTF-1、Syn、CD56、Ki67、Napsin-A阳性表达率比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论支气管冲洗液细胞块免疫组化SP法染色对肺癌有较高的诊断价值,对不同类型肺癌有较高的检出率及鉴别率,具有重要的临床意义。

免疫辣根过氧化物酶染色法诊断猪弓形虫病的研究

根据病猪临床表现以及病猪组织切片的常规苏木素-伊红(HE)染色和免疫辣根过氧化物酶染色对病猪作出初步诊断;采集病猪的各脏器组织,研磨后接种ICR鼠,分离鉴定病原,探讨免疫辣根过氧化物酶染色法快速诊断猪弓形虫病的可行性。结果表明:常规HE染色法和免疫辣根过氧化物酶染色法都能发现弓形虫的假包囊或速殖子。但是,HE染色切片仅能在个别视野中发现弓形虫,而免疫辣根过氧化物酶染色法可在许多器官切片的多个视野中观察到更多的被染成棕黄色的弓形虫速殖子和假包囊,证明免疫辣根过氧化物酶染色法是诊断猪弓形虫病的有效方法。

用免疫过氧化物酶蚀斑测定MDV蚀斑

美国研究人员报告了用免疫过氧化物酶染色的方法,快速、准确检测和定量马立克氏病病毒（MDV）蚀斑。固定单层培养物并与对MDV特异的单克隆抗体孵育。洗涤后,加第二抗体结合辣根过氧化物酶的山羊抗鼠IgG孵育1小时,并用磷酸盐缓冲液洗涤。培养物与二氨联苯胺、GoCl2及H2O2孵育后,蚀斑表现为黑色斑点并容易见到和计数。

犬细小病毒2c亚型毒株的分离与鉴定

采集一疑似犬细小病毒(CPV)患犬的粪便,用纳米PCR方法对病料进行CPV检测,并应用猫肾细胞F81进行病毒分离培养,采用免疫过氧化物酶单层细胞染色法(IPMA)检测病毒在F81细胞中的增殖动态。利用PCR扩增分离病毒的VP2基因,测序结果用DNAMAN软件对获得的VP2基因序列进行拼接,并与NCBI上已经公布的犬细小病毒的全基因组序列以及相关蛋白的核酸序列进行比较,确定其所分离的病毒株型并推导氨基酸序列。结果表明,纳米PCR检测结果为CPV核酸阳性,病料接种到F81细胞培养后出现明显细胞病变(CPE),血清学鉴定为CPV抗原阳性,序列测定分析表明,该毒株VP2基因开放阅读框(ORF)为1755 bp。进化分析显示,该毒株属于CPV-2c型,并命名为CPV-2c-Guangxi23。

白血病

0133974 对石蜡包埋急性白血病的抗CD10免疫过氧化物酶染色:与流式细胞免疫表型的比较/Bavikatty N R//HumanPathology.-2000,31(9).

1株犬细小病毒的分离鉴定及其生物学特性研究

采集一疑似犬细小病毒(CPV)患犬的粪便,采用胶体金试纸条和PCR方法对病料进行CPV检测,并应用猫肾细胞F81进行病毒分离培养,分别采用免疫过氧化物酶单层细胞染色法(IPMA)和PCR检测病毒在F81细胞中的增殖动态,采用无血清培养和有血清培养2种方法进行体外培养,IPMA测定病毒滴度。利用PCR扩增分离病毒的VP2基因,经序列测定后采用DNAStar 7.0和MEGA 5.0软件进行生物信息学分析。结果表明,胶体金试纸条检测为CPV抗原阴性,PCR检测结果为CPV核酸阳性,病料接种到F81细胞培养后出现明显细胞病变(CPE),血清学鉴定为CPV抗原阳性,将分离得到的病毒命名为CPV-NY130615。IPMA可从感染后6 h的F81细胞中检出病毒,PCR能从感染后6 h培养上清中检出CPV核酸。血清同步接种培养法培养和无血清单层接种培养法培养的第15代病毒滴度分别为1×108.06TCID50/m L和1×107.65TCID50/m L。序列测定分析表明,该毒株VP2基因开放阅读框(ORF)为1 755 bp,编码584 aa。进化分析显示,该毒株属于CPV-2a型。

1株猪传染性胃肠炎病毒的分离鉴定及其生物学特性研究

采集1例疑似感染猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)仔猪的粪便,运用RT-PCR方法和血清学方法对病料进行TGEV检测,并应用猪睾丸细胞(ST)进行病毒分离培养,分别采用免疫过氧化物酶单层细胞染色法(IPMA)和RT-PCR方法检测病毒在ST细胞中的增殖动态,应用RT-PCR方法扩增分离TGEV S1基因,经序列测定后,采用DNAStar 7.0和Mega 5.0软件对TGEV进行生物信息学分析。结果表明,病料接种到ST细胞培养后,出现明显细胞病变效应(CPE);RT-PCR检测结果显示,TGEV核酸阳性;血清学鉴定TGEV抗原阳性。将分离毒株命名为TGEV-NY。感染12 h后,IPMA检测结果阳性,且可从细胞培养上清中检出TGEV核酸。序列测定分析表明,分离毒株S1基因开放阅读框(ORF)为2 220 bp,编码740个氨基酸。进化分析显示,分离毒株与我国2006年分离的SC-Y毒株亲缘关系最近,分离毒株属于基因Ⅰ群。

一株I型犬腺病毒的分离与鉴定

为给I型犬腺病毒(CAV-I)后续研究提供基础材料,采集疑似犬传染性肝炎患犬粪便,用PCR方法进行CAV-I核酸检测,并运用犬肾传代细胞(MDCK)进行病毒分离培养,采用PCR和免疫过氧化物酶单层细胞染色法(IPMA)检测病毒在细胞内的繁殖状态。结果显示:患犬粪便样品PCR检测为CAV-I核酸阳性,病料接种MDCK细胞培养24 h后出现明显的"葡萄串样"细胞病变效应(CPE);培养物血清学鉴定为CAV抗原阳性,不同代次病毒培养物均为CAV-I核酸强阳性;第9代病毒核酸序列与Gen Bank中CAV-I毒株核苷酸相似性在99.0%以上,与CAV-Ⅱ相似性仅为65.3%;该病毒与CAV-I毒株处于同一遗传分支;病毒接种MDCK后8 h内均无抗原检出,12 h后细胞核中分布大量的CAV抗原,24 h后细胞出现典型的"葡萄串样"病变,抗原在细胞中呈弥散分布。上述结果表明,分离到的毒株为CAV-I,命名为CAV-ZY180711。

一例猪伪狂犬病野毒感染的实验室诊断

为确诊衡阳市某猪场育肥猪发生的疑似猪伪狂犬病(PR)疫情,采集发病猪脾脏,运用PCR方法进行猪伪狂犬病病毒(PRV)核酸检测,利用非洲绿猴肾细胞(Vero)进行病毒分离培养,采用免疫过氧化物酶单层细胞染色法(IPMA)进行病毒血清学鉴定;用分离培养物进行家兔感染试验,观察临床症状和病例剖检变化,采用PCR检测各器官中的病毒分布情况。结果显示:病料接种Vero细胞培养3 d后,出现明显的细胞病变效应(CPE);分离培养的病毒与PRV阳性血清呈阳性反应;家兔感染后出现奇痒等神经症状并死亡,其肝、脾组织均为PRV gE核酸检测阳性。试验结果证实,分离到的病毒为PRV野毒,从而确诊了该疑似疫情。

一例伪狂犬病毒野毒株感染病例的病原学诊断

对一例疑似伪狂犬病毒(PRV)感染病例进行实验室检测和病原的分离培养。采集病猪的脏器,进行PRV gE基因的PCR检测,病料接种非洲绿猴肾细胞(Vero)并传代培养,观察细胞病变效应(CPE),PCR监测第3代、第5代和第7代培养物PRV的gE和gG基因核酸,采用免疫过氧化物酶单层细胞染色法(IPMA)检测病毒在Vero细胞中的增殖动态。结果表明,病猪心脏、肺脏和脾脏为PRV gE基因核酸阳性,Vero细胞在接种病毒48 h,变圆、融合;第3代、第5代和第7代培养物中gE和gG基因核酸均为阳性,第7代培养物与PRV阳性血清呈特异性反应,病毒感染后第6 h、Vero细胞中即可检测PRV抗原,第24 h绝大部分细胞呈PRV抗原阳性。该病例为PRV野毒株感染,所分离的PRV毒株对Vero细胞适应力强。

抗幽门螺旋菌单克隆抗体的制备和临床应用

用幽门螺旋菌（HP）109免疫Balb/c小鼠，取其脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞SP2／0融合，得到3株分泌高效价抗HP单克隆抗体（HP－MAbs）的杂交瘤细胞株SCH7、SCH9和．SCH10。3株HP－MAbs主要与HP58000菌体蛋白条带反应。HP－MAbsSCH9免疫过氧化物酶染色，与18株HP反应均阳性，与空肠弯曲细菌、结肠弯曲细菌及13种常见肠道标准菌株反应均阴性。用该方法检测121例胃粘膜活检成本，阳性率高于分离培养和／或涂片Gram染色法（P＜0．05）。结果表明，采用本方法制备的HP－MAbs敏感、特异，可应用于临床诊断HP感染。