免疫荧光细胞化学和免疫酶细胞化学染色方法检测IgA肾病患者尿足细胞的效果比较

目的：比较免疫荧光细胞化学和免疫酶细胞化学染色2种方法检测IgA肾病（IgAN）患者尿足细胞的效果，为尿足细胞检测方法的选择提供依据。方法：收集43例确诊为IgAN患者（实验组）和10例正常对照研究对象（对照组）活检前连续3d的晨尿各200mL，离心上清制成涂片。IgAN患者按Lee分级分成Lee I～LeeV组。采用抗人足细胞表面标记蛋白Podocalyxin（PCX）单克隆抗体对尿沉渣涂片分别行免疫荧光细胞化学和免疫酶细胞化学染色，荧光显微镜和普通光学显微镜下计数2组研究对象尿足细胞数；采用Spearman相关分析法分析2种方法检测IgAN患者尿足细胞数的相关性。结果：2种方法检测的对照组研究对象尿中未见足细胞，2种方法检测实验组研究对象尿中均可见足细胞；免疫荧光细胞化学法检测足细胞阳性率和检出中位数低于免疫酶细胞化学法，2种方法检测尿足细胞阳性率和中位数比较差异均有统计学意义（P〈0．05）；2种方法检查患者尿足细胞数呈明显的正相关关系（r=0．842，P〈0．01）。结论：采用免疫酶细胞化学法检测同一份尿标本的效果优于免疫荧光细胞化学法。

培养的雪旺氏细胞S-100蛋白酶联免疫细胞化学染色法

目的：以酶联免疫细胞化学技术显示培养的雪旺氏细胞。方法：采用抗Ｓ－１００蛋白的小鼠单克隆抗体，以酶联抗小鼠抗体，联苯胺、过氧化氢显色。结果：雪旺氏细胞整个胞体及突起呈深棕褐色，成纤维细胞未见着色呈透明状态。结论：Ｓ－１００蛋白的单克隆抗体酶联免疫细胞化学技术，可特异性地显示培养的雪旺氏细胞。

免疫细胞化学双染技术探讨

在临床与实验病理研究中,常用到免疫细胞化学双染技术。它可在同一细胞内定性、定位、定量的显示出两种抗原成分,利于研究人员了解细胞间的形态和机能的关系,以及抗原成分间的相互关系。我们在小鼠脾脏调节性T细胞在过敏性鼻炎发病机制中的作用[1,2]和摸索体外培养胚胎大鼠背根神经节细胞作为感音神经性聋治疗的新途径[3]的实验中均使用了该技术,

免疫细胞化学法检测尿足细胞的临床应用

目的:免疫荧光细胞化学和免疫酶细胞化学两种方法检测尿足细胞的比较,以促其临床推广应用。方法:尿标本均为我科住院患者的肾活检日新鲜晨尿,采用抗人足细胞标记蛋白Podocalxin(PCX)单克隆抗体进行尿沉渣免疫荧光细胞化学和免疫酶细胞化学染色。14例患者均经肾活检,肾组织由光镜、免疫荧光和电镜检查做出病理诊断。结果:(1)14份尿标本应用免疫荧光细胞化学和免疫酶细胞化学方法均可检测到足细胞。(2)同一份尿沉渣采用免疫荧光细胞化学法检测足细胞均数为(16.7±15.1)/HP,而免疫酶细胞化学法检测足细胞均数为(26.1±24.3)/20HP,两组比较有统计学意义(P<0.05);但两种方法所测足细胞数之间有很好的相关性(r=0.969)。结论:免疫荧光细胞化学和免疫酶细胞化学两种方法检测尿足细胞,前者较简便、镜下易辨认,后者设备简单、标本可保存。

间接免疫细胞化学法快速检测新城疫病毒抗原的研究

本研究旨在建立一种简单、方便、准确、特异的方法检测新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)。比较间接HRP-免疫细胞化学法与间接免疫荧光法两种方法检测NDV在COS-7细胞中的定位。两种试验方法都可以检测到NDV主要定位在COS-7细胞的胞浆内。间接HRP-免疫细胞化学法检测NDV要求一抗滴度≤1∶100,间接免疫荧光法要求的滴度≤1∶100。间接HRP-免疫细胞化学法检测NDV要求二抗滴度≤1∶300,间接免疫荧光法要求的滴度≤1∶50。而且结果观察中间接HRP-免疫细胞化学法要比间接免疫荧光法方便。间接HRP-免疫细胞化学法进行NDV检测优于间接免疫荧光法,是一种简单、快捷、准确的适用于检测NDV的技术。

改良碱性磷酸酶-抗碱性磷酸酶桥联酶染色微板法检测细胞表面抗原

目的 对碱性磷酸酶 -抗碱性磷酸酶 ( APAAP)桥联酶染色常规玻片法进行改良 ,用于检测细胞表面抗原。方法 用微量细胞毒试验反应板 (简称微板 )代替载玻片作细胞载体进行 APAAP桥联酶染色 ,检测人外周血淋巴细胞表面 CD3、CD4、CD8、CD11a、CD11b、CD18和 CD5 4的表达。结果 微板法与玻片法检测结果无显著性差异 ( P均 >0 .0 5 ) ,有良好重复性 ,并将检测 7项指标所需的血量由 10 m l减至 2 m l,各种试剂 (一抗、二抗、APAAP复合物和底物 )用量由 5 0μl减至 5μl。结论 微板法节约了试剂及用血量 ,操作方便 ,效果良好 。

利用辣根过氧化物酶作抗原显示抗体形成细胞的探讨

用辣根过氧化物酶作为抗原免疫家兔，取窝淋巴结作涂片，经该酶处理后显色，可清晰地定位抗体形成细胞──淋巴母细胞、浆母细胞、浆细胞和特化的小淋巴细胞内的抗体成分。该方法简便、特异性强。

体外应用大鼠胰腺提取物诱导小鼠间充质干细胞分化为胰岛素产生细胞

目的探讨大鼠胰腺提取物(RPE)是否可以使小鼠骨髓间充质干细胞(BMMSCs)分化为胰岛素产生细胞(IPCs),以及小鼠BMMSCs的分化条件,为糖尿病的干细胞治疗提供新的方法。方法传代纯化培养昆明小鼠的骨髓间充质干细胞,应用SD大鼠的RPE诱导分化小鼠BMMSCs为IPCs,首先取18瓶小鼠BMMSCs随机分为6组,每组3瓶,分别加入RPE 10mg/L、20mg/L、30mg/L、40mg/L、50mg/L、100mg/L,筛选出最佳的分化剂量,然后用最佳的分化剂量(50mg/L)分化BMMSCs,免疫酶细胞化学鉴定细胞内胰岛素的表达;双硫腙染色检测胰岛素产生细胞的分化和纯度。放射免疫分析检测C肽片段表达。结果50mg/L RPE可以使间充质干细胞分化良好,形态较规则,1周后细胞分化成熟,双硫腙染色呈现猩红色;免疫酶细胞化学和免疫荧光细胞化学显示:胰岛素表达阳性,C肽放射免疫学显示有C肽释放。结论RPE可以使小鼠的骨髓间充质干细胞分化为胰岛素产生细胞。

联合检测PAIg与CD41+淋巴样小巨核对ITP及MDS鉴别诊断的意义

目的:探讨血小板相关抗体(PAIg)及CD41+淋巴样小巨核在特发性血小板减少性紫癜(ITP)中的诊断价值,以及对ITP与骨髓增生异常综合征(MDS)的鉴别诊断价值。方法:研究血小板相关抗体的样本取自两组患者。一组为ITP患者,另一组为MDS患者。在CD41患者检测中,ITP患者组与MDS患者组进行了比较。ELISA方法用来检测血小板相关抗体的表达,包括PAIgA、PAIgM和PAIgG。CD41阳性淋巴样小巨核的检测采用生物素酶连亲和-碱性磷酸酶标法。抗CD41抗体是单克隆抗体。数据统计分析使用卡方检验。结果:血小板相关抗体检测中,ITP组49例患者的PAIg检出阳性率为81.6%,MDS组9例患者PAIg阳性率为33.3%,二者比较有显著差异,结果具有统计学意义。酶联免疫细胞化学检测ITP组和MDS组淋巴样小巨核CD41阳性表达显示,ITP组阳性率为5%(1/20),而MDS组阳性率为58.3%(21/36)。结论:血小板相关抗体(PAIg)及CD41+淋巴样小巨核的表达可作为一项有价值的指标帮助诊断和鉴别诊断ITP患者;同时对判断ITP患者的效果及预后,以及提高ITP的诊断率具有重要的价值。并且CD41+淋巴样小巨核可作为ITP与MDS的鉴别诊断依据。